Локализация, идентификация и Удаление мышиный жировой депо
Summary
Из-за резкого и отрицательной связи между ожирением и другими сопутствующими заболеваниями, исследование о роли жировой играет в болезни и общее состояние здоровья является оправданным. Мы приводим протокол для выделения и удаления жировых депо, позволяющих проводить исследования жировой помощью на месте и в лабораторных методов.
Abstract
Obesity has increased dramatically in the last few decades and affects over one third of the adult US population. The economic effect of obesity in 2005 reached a staggering sum of $190.2 billion in direct medical costs alone. Obesity is a major risk factor for a wide host of diseases. Historically, little was known regarding adipose and its major and essential functions in the body. Brown and white adipose are the two main types of adipose but current literature has identified a new type of fat called brite or beige adipose. Research has shown that adipose depots have specific metabolic profiles and certain depots allow for a propensity for obesity and other related disorders. The goal of this protocol is to provide researchers the capacity to identify and excise adipose depots that will allow for the analysis of different factorial effects on adipose; as well as the beneficial or detrimental role adipose plays in disease and overall health. Isolation and excision of adipose depots allows investigators to look at gross morphological changes as well as histological changes. The adipose isolated can also be used for molecular studies to evaluate transcriptional and translational change or for in vitro experimentation to discover targets of interest and mechanisms of action. This technique is superior to other published techniques due to the design allowing for isolation of multiple depots with simplicity and minimal contamination.
Introduction
Жировая внесли заметный внешний вид в центре внимания средств массовой информации, в связи с резким увеличением ожирения в течение последних нескольких десятилетий 20-го века. Ожирение в настоящее время затрагивает более чем одну треть взрослых и 17% детей и подростков в Соединенных Штатах Америки (США) 1. Spanning всех этнических групп, статистическое исследование вокруг эпидемии ожирения показали, что не испаноязычные чернокожие имеют самый высокий уровень с поправкой на возраст ожирения (49,5%) по сравнению с американцев мексиканского происхождения (40,4%), все выходцы из Латинской Америки (39,1%), и не- Испанец белые (34,3%) 2. Экономический эффект ожирения также растущее беспокойство для системы здравоохранения. В 2012 году было подсчитано, что ежегодные медицинские затраты на лечение от ожирения в США в 2005 составил $ 190,2, почти 21% от общего медицинского расходов бюджета. К сожалению, детское ожирение, по оценкам, будет отвечать за $ 14 млрд в прямые медицинские расходы в одиночку. Статистически, было установлено, что в среднем медицинской стоимостилюди с ожирением составила $ 2741 выше году, чем те, без этого заболеваемости 3-5.
Ожирение является основным фактором риска для различных условий, таких как: сахарный диабет типа 2, дислипидемии, сердечно-сосудистых заболеваний, рака, мышечных скелетных расстройств и хронического воспаления. Ожирение глубоко связаны с патогенезом метаболического синдрома и других хронических заболеваний 6-8. С таким решительным и отрицательных связей между ожирением и другими сопутствующими заболеваниями, научные исследования обратили внимание, чтобы лучше понять текущей эпидемии и разнообразные и основные роли, которую играют жировой.
Исторически сложилось так, жировой ткани считалось несущественным, и рассматривалось просто как простой заполнения ткани. В настоящее время, жировая как было показано, играют многие важные роли в функции организма в: обмена веществ, гормональной регуляции, воспаление, защиты и изоляции 9. Жировая ткань состоит в основном изадипоциты, но также содержит перицитов, эндотелиальные клетки, моноциты, макрофаги и плюрипотентных стволовых клеток 8. Жировая ткань распределяется по всему телу в разных депо. Основные депо могут быть найдены подкожно, подкожно, внутримышечно и интуитивно 10. Жировые депо, как было показано, чтобы иметь депо конкретные метаболические профили, которые показали депо конкретную восприимчивость к ожирению расстройств, связанных и 8.
Традиционно, жировая ткань была классифицирована на два основных типа: белая жировая ткань (WAT) и бурая жировая ткань (BAT); хотя в последнее время литература указывает Присутствия третьей группы окрестили Brite или бежевый жировой 11. Жировая ткань как было показано, имеют различные цвета, морфологию, метаболические функции, биохимические свойства и генетические паттерны экспрессии 10. Адипоциты в Ват есть один большой липидов капли и различное количество митохондрий. WATв преимущественно находятся в подкожной и висцеральной местах тела. WAT функционирует в первую очередь как место хранения энергии и защиты органа. Адипоциты в городе Бат есть многоячеистую морфологию и обильные митохондрии. ВАТ расположен в основном в области шеи и крупных кровеносных сосудов грудной клетки, а также лопатками 12. BAT в первую очередь функции в энергетических расходовать поведения, которые регулируют термогенез 7. Brite или бежевого жировая было показано, что разделяют аналогичную морфологии и экспрессии на биту, но было установлено, что возник из белых адипоцитов 11.
Описаны хирургический метод в этой рукописи предоставляет исследователям с возможностью анализировать различные эффекты, что такие факторы, как: окружающая среда, фармацевтика, и генетики, имеющие на жировой; а также выгодно или вредно роль жировой играет в болезни и общего состояния здоровья. Кроме того, предоставляя возможность для идентификации и выделения различных типов жировой тканипозволяют лучше понять биохимические отношений и различий между депо. Это может помочь в определении отношения между местоположением, функции и виды жира в организме. Описанный метод решает эту задачу, обеспечивая средства для валового визуализации, анализа экспрессии генов, анализа экспрессии белка, гистологического исследования и изоляции линий первичных клеточных для изучения в лабораторных условиях. В настоящее время существует много статей, которые дают представление о метаболической поведения различных жировых депо, а также их анатомических местах; но не предоставляют метод углубленного о том, как конкретно локализовать, идентифицировать и изолировать эти склады. Это хирургический метод обеспечивает точное метод, который позволяет для выделения нескольких депо с минимальным количеством вскрытия и загрязнение по сравнению с другими методами, предназначенных для изолята из одного или двух депо 13-14.
Цель этого протокола заключается в обеспеченииточный метод для выявления и изоляции различных типов жировых депо из нескольких анатомических мест.
Protocol
Representative Results
Discussion
Ожирение может привести к большому целому ряду заболеваний и полном понимании той роли, которую жировой играет до конца не изучен; Поэтому продолжение исследований в области жировой необходимо. Модели на животных, в частности, мышиные модели идеально подходят для начального исследова…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
The authors have no acknowledgements.
Materials
| Name of Reagent/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| isoflurane | Med-Vet International | #RXISO-250 | |
| 70% Ethanol | Fisher | 07-678-001 | |
| DMEF-12 | Sigma Aldrich | D-6421 | Warm in waterbath before putting on tissue |
| 2 mL microcentrifuge tubes | Midsci | MCT-200-C-S | |
| Phosphate buffered saline | Sigma Aldrich | P5368-10PAK |
Riferimenti
- Ogden, C. L., Carroll, M. D., Kit, B. K., Flegal, K. M. Prevalence of obesity in the United States, 2009-2010. NCHS Data Brief. 82, 1-8 (2012).
- Flegal, K. M., Carroll, M. D., Kit, B. K., Ogden, C. L. Prevalence of obesity and trends in the distribution of body mass index among US adults, 1999-2010. 307 (5), 491-497 (2012).
- Cawley, J., Meyerhoefer, C. The medical care costs of obesity: an instrumental variables approach. Journal of Health Economics. 31 (1), 219-230 (2012).
- Marder, W., Chang, S. Childhood Obesity: Costs, Treatment Patterns, Disparities in Care, and Prevalent Medical Conditions. Thomson Medstat Research Brief. , (2006).
- Cortez, M., Carmo, L. S., Rogero, M. M., Borelli, P., Fock, R. A. A high-fat diet increases IL-1, IL-6, and TNF-α production by increasing NF-κB and attenuating PPAR-γ expression in bone marrow mesenchymal stem cells. Inflammation. 36 (2), 379-386 (2013).
- Sanchez-Gurmaches, J., Hung, C. M., Sparks, C. A., Tang, Y., Li, H., Guertin, D. A. PTEN loss in the Myf5 lineage redistributes body fat and reveals subsets of white adipocytes that arise from Myf5 precursors. Cell Metab. 16 (3), 348-362 (2012).
- Sethi, J. K., Vidal-Puig, A. J. Thematic review series: adipocyte biology. Adipose tissue function and plasticity orchestrate nutritional adaptation. J Lipid Res. 48 (6), 1253-1262 (2007).
- Aarsland, A., Chinkes, D., Wolfe, R. R. Hepatic and whole-body fat synthesis in humans during carbohydrate overfeeding. Am J Clin Nutr. 65 (6), 1774-1782 (1997).
- Park, A., Kim, W. K., Bae, K. H. Distinction of white, beige and brown adipocytes derived from mesenchymal stem cells. World J. Stem Cells. 6 (1), 33-42 (2014).
- Wu, J., et al. Beige adipocytes are a distinct type of thermogenic fat cell in mouse and. 150 (2), 366-376 (2012).
- Giralt, M., Villarroya, F. White, brown, beige/brite: different adipose cells for different functions. Endocrinology. 154 (9), 2992-3000 (2013).
- Casteilla, L., Pénicaud, L., Cousin, B., Calise, D. Choosing an adipose tissue depot for sampling: factors in selection and depot specificity. Methods Mol. Biol. 456, 23-38 (2008).
- Grant, R., Youm, Y. H., Ravussin, A., Dixit, V. D. Quantification of adipose tissue leukocytosis in obesity. Methods Mol. Biol. 1040, 195-209 (2013).
