I ratti di cotone sono estremamente eccitabili e hanno una forte risposta di fuga o lotta. Viene descritto un metodo di manipolazione ottimizzato per ridurre lo stress degli animali che renderà i ratti di cotone più accessibili come modello preclinico.
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Articolo metodologico
Manipolazione del Cotton Rat in studi per la valutazione pre-clinica di oncolitici virus
In questo articolo
Sommario
Abstract
I virus oncolitici sono una nuova terapia antitumorale con la capacità di colpire le cellule tumorali, lasciando intatte le cellule sane. Affinché questa strategia abbia successo, studi recenti hanno dimostrato che il coinvolgimento del sistema immunitario dell'ospite è essenziale. Pertanto, la viroterapia oncolitica deve essere valutata nel contesto di un modello immunocompetente. Inoltre, lo studio di terapie antitumorali in modelli animali tollerati può riassumere meglio i risultati osservati negli studi clinici. I ratti di cotone, comunemente usati per studiare i virus respiratori, sono un modello interessante per studiare la viroterapia oncolitica poiché i modelli singenici del carcinoma mammario e dell'osteosarcoma sono ben consolidati. Tuttavia, mancano informazioni pubblicate sulla corretta procedura di manipolazione di questi roditori altamente eccitabili. L'approccio di manipolazione e cattura delineato riduce al minimo lo stress degli animali per facilitare la sperimentazione. Questa tecnica si basa sulla capacità del ricercatore di mantenere la calma durante la manipolazione e di eseguire le procedure in modo tempestivo. Infine, descriviamo come preparare le cellule tumorali mammarie di ratto di cotone per una formazione tumorale sottocutanea coerente e come eseguire iniezioni intratumorali e intraperitoneali. Questi metodi possono essere applicati a un'ampia gamma di studi che promuovono lo sviluppo del ratto del cotone come modello preclinico rilevante per lo studio della terapia antitumorale.
Introduzione
Virus oncolitici (OV) replicano selettivamente nelle cellule tumorali sfruttando differenze biochimiche tra cellule normali e tumorali 1,2. Ci sono due tipi di VU: quelli che non necessitano di una mutazione per raggiungere oncolisi selettivo, denominato naturalmente allo wild-type virus e quelli che devono essere progettati per ottenere oncolisi selettiva. La collezione di mutazioni all'interno di un determinato tipo di tumore determina la natura del vantaggio di crescita selettiva su cellule normali per OV 2. La sicurezza e vantaggio di utilizzare VU è stata dimostrata in studi clinici 3-7. Nonostante i progressi nel campo della....
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Protocollo
NOTA: I protocolli utilizzati sono stati approvati dal nostro istituzionale Animal Research Ethics Consiglio della McMaster University in base al Canadian sugli orientamenti per la cura degli animali. Gli esperimenti sono stati condotti presso l'impianto di McMaster University Central Animal.
1. Le celle Culturing LCRT
- Cellule Culture LCRT in terreno Eagle modificato di Dulbecco (DMEM) supplementato con 10% siero bovino fetale (FBS), 2 mM L-glutammina, 100 U / ml di penicillina e 100 ug / ml di streptomicina. Mantenere le cellule in T-150 fiasche di coltura tissutale a 37 ° C e 5% di CO 2. Passaggio cellul....
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Risultati
A causa della natura estremamente eccitabile di ratti cotone, essendo a conoscenza e utilizzando procedure ottimizzate per ridurre lo stress degli animali faciliterà nel loro uso come modello animale preclinico. L'uso di tecniche di manipolazione anche minimizzare i rischi per il ricercatore.
Quando si utilizzano topi cotone è indispensabile per mantenere la calma. I ratti sono altamente eccitabile e tenteranno di sfuggire alla loro gabbia. L'uso di un tubo di arricchimento e nestlets minimi.......
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Discussione
I ratti del cotone sono altamente eccitabili e hanno una forte risposta al volo. Pertanto, è necessario prestare particolare attenzione per ridurre al minimo qualsiasi stress eccessivo sull'animale. La configurazione della gabbia descritta consentirà una cattura facile e sicura degli animali, con il posizionamento del tubo di arricchimento della massima importanza. Quando si installano le gabbie, assicurarsi che i tubi di arricchimento soddisfino i requisiti di dimensioni e forma e siano posizionati con l'orientamento co.......
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Dichiarazioni
Gli autori riconoscono che non ci sono conflitti di interesse finanziari relativi a questa ricerca.
Ringraziamenti
Breanne Cuddington ha ricevuto una borsa di studio dalla Canadian Breast Cancer Foundation. Questo lavoro è stato sponsorizzato da sovvenzioni operative della Cancer Research Society e del Canadian Cancer Society Research Institute (ex Canadian Breast Cancer Research Alliance). Ringraziamo Ann Tollefson (Saint Louis University School of Medicine) per le cellule LCRT e la dottoressa Kathleen Delaney e Marion Corrick per l'assistenza tecnica con la stabulazione e la sedazione dei ratti di cotone.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Dulbecco' s Eagle modificato' s medio | Gibco | 11965-092 | Può utilizzare qualsiasi marca |
| 1X soluzione salina tamponata con fosfato | Può essere preparato in laboratorio, filtrare per sterilizzare | ||
| 200 mM di L-glutammina | Gibco | 25030164 | Può utilizzare qualsiasi marca |
| 100x antibiotico-antimicotico... | Gibco | 15240-062 | Può utilizzare qualsiasi marca |
| di siero fetale bovino | Quality Biological Inc. | 110-001-101HI | Può utilizzare qualsiasi marca |
| T-150cm2 pallone per colture tissutali | Fisher Scientific | 14-826-80 | Può utilizzare qualsiasi marca |
| 1X TypLE Express | Life Technologies | 12604-013 | |
| Piastra per colture cellulari a 12 pozzetti, fondo piatto | Fisher Scientific | 08-772-29 | Può utilizzare qualsiasi marca, deve essere trattata per coltura tissutale |
| alamarBlue | Life Tecnologie | DAL1025 | Può utilizzare un reagente alternativo per la determinazione della vitalità cellulare |
| 8640 Teklad 22/5 Dieta per roditori | Harlan | 8640 | |
| 1/8" lettiera per roditori di pannocchie di mais | Harlan | 7092 | |
| Nestlets | Ancare-Realizzato | in fibra di cotone vergine polpato, privo di polvere e autoclavabile | |
| 50 mL Provette coniche | Fisher Scientific | 14-432-22 | Può utilizzare qualsiasi marca, deve essere sterile |
| Isoflurano USP, 99,9 %, anestetico per inalazione | Pharmaceutical Partners of Canada Inc. | M60302 | |
| 70% Etanolo | Può preparare in laboratorio | ||
| 10% Formalina tamponata neutra | Sigma-Aldrich | HT501128 | Può utilizzare qualsiasi marca |
| NAPCO NapFlow 1200 Classe II A/B3 Biosicurezza Microbiologica Armadio di sicurezza (cappa per colture cellulari) | NAPCO | Modello utilizzato non attualmente disponibile | Può utilizzare qualsiasi marca |
| Thermo Fisher Scientific Precision Heated Water Bath Fisher | Modello scientifico | utilizzato non attualmente disponibile | Può utilizzare qualsiasi marca |
| [header] | |||
| Reichert Bright-line Hemacytometer | Sigma-Aldrich | Z359629 | Può utilizzare qualsiasi marca |
| Typhoon Trio BioAnalyzer | Modello GE Healthcare Life Sciences | utilizzato non attualmente disponibile | Può utilizzare qualsiasi lettore di piastre a fluorescenza |
| Tecan Safire2 Lettore di micropiastre a rilevamento multiplo | Modello Tecan | usato non attualmente disponibile | Può utilizzare qualsiasi lettore di piastre a fluorescenza |
| Centrifuga da banco Allegra 6R | Beckman Coulter | 366816 | Può utilizzare qualsiasi marca |
| Macchina per anestesia da tavolo | VetEquip | Modello utilizzato non attualmente disponibile | Può utilizzare qualsiasi marca, deve essere portatile |
| Wahl Peanut Mini Clippers | Wahl | Può utilizzare qualsiasi marca di piccoli clipper | |
| Siringhe da insulina 29 G x 1/2', 0,3 mL | BD | 329464 | Può utilizzare qualsiasi marca. Si consigliano siringhe da insulina in quanto facilitano le iniezioni attraverso il ratto" s pelle dura. |
| Tamponi di cotone | MedPro | 018-425 | Può utilizzare qualsiasi marca |
| Forbici da dissezione a punta affilata | Fisher Scientific | 8940 | Può utilizzare qualsiasi marca |
| Pinze per tessuti da dissezione | Fisher Scientific | 13-812-41 | Può utilizzare qualsiasi marca |
Riferimenti
- Cervantes-Garcia, D., Ortiz-Lopez, R., Mayek-Perez, N., Rojas-Martinez, A. Oncolytic virotherapy. Ann Hepatol. 7 (1), 34-45 (2008).
- Vaha-Koskela, M. J., Heikkila, J. E., Hinkkanen, A. E. Oncolytic viruses in cancer therapy. Cancer Lett. 254 (2), 178-216 (2007).
- Abril, C., et al.
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