माउस रिब Resecting के लिए एक शल्य प्रक्रिया: बड़े पैमाने पर लंबी हड्डी मरम्मत के लिए एक मॉडल
Summary
The overall goal of this procedure is to successfully resect a portion of bone from the rib of a mouse. The procedure was developed as a model to study large-scale long bone repair.
Abstract
इस प्रोटोकॉल माउस पसली का उपयोग बड़े पैमाने पर हड्डी की मरम्मत के लिए एक नया मॉडल के लिए शोधकर्ताओं का परिचय। आसपास के पसलियों के बीच मांसपेशियों से वांछित पसली उजागर, वक्ष शरीर दीवार खोलने एक वातिलवक्ष उत्प्रेरण बिना पसली के वांछित अनुभाग excising, और चीरों बंद करने, सर्जरी के लिए पशु की तैयारी: प्रक्रिया निम्नलिखित विवरण। उपांत्रीय कंकाल की हड्डियों की तुलना में, पसलियों अत्यधिक सुलभ हैं। आसन्न पसलियों एक प्राकृतिक निर्धारण उपलब्ध कराने के बाद से इसके अलावा, कोई आंतरिक या बाह्य fixator आवश्यक है। शल्य चिकित्सा, व्यावसायिक रूप से उपलब्ध आपूर्ति का उपयोग करता है जानने के लिए सीधी, और जानवर द्वारा अच्छी तरह से सहन है। प्रक्रिया के साथ या आसपास के periosteum हटाने के बिना बाहर किया जा सकता है, और इसलिए मरम्मत करने के लिए periosteum के योगदान का आकलन किया जा सकता है। 2 महीने – परिणाम periosteum बनाए रखा है, तो मजबूत मरम्मत 1 में होता है कि संकेत मिलता है। हम करेंगे इस प्रोटोकॉल का उपयोग करें कि उम्मीदपसली की मरम्मत में अनुसंधान को प्रोत्साहित और निष्कर्षों को शरीर के चारों ओर अन्य स्थानों में हड्डी की मरम्मत को प्रोत्साहित करने के लिए नए तरीके के विकास की सुविधा होगी कि।
Introduction
कंकाल चोट, जीर्ण पुराने ऑस्टियोआर्थराइटिस दुर्बल, और पुनर्निर्माण सर्जरी के साथ जुड़े गंभीर समस्याओं आर्थिक उत्पादकता, परिवार को अच्छी तरह से किया जा रहा है, और जीवन की गुणवत्ता को प्रभावित। छोटे टूटता है और घावों काफी अच्छी तरह से ठीक कर सकता है, वहीं मनुष्य की संरचना और समारोह को बहाल करने के लिए पुनर्निर्माण की प्रक्रिया पर भरोसा करना होगा इसलिए बड़े दोषों की मरम्मत और करने में सक्षम नहीं हैं। पुनर्निर्माण अल्लोजीनिक या heterogeneic ग्राफ्ट, morcellized हड्डी, प्रत्यारोपित scaffolds के, या व्याकुलता अस्थिजनन शामिल हो सकता है। दुर्भाग्य से, न केवल इन उपचार लेकिन मरम्मत की हड्डी की मूल ताकत शायद ही कभी उपलब्ध हो जाता है के साथ जुड़े लगातार रुग्णता कारक हैं। इस प्रकार, नई नैदानिक दृष्टिकोण की जरूरत है।
कमानी दोष के इलाज के लिए नए तरीके विकसित करने के लिए एक तरह से बड़े पैमाने पर मरम्मत स्वाभाविक रूप से होता है जिसमें स्थितियों का अध्ययन है। स्तनधारियों वीं में सीमित माना जाता है, जबकि उभयचर मशहूर कंकाल तत्वों पुनर्जीवित कर सकते हैंकी क्षमता है। हालांकि, 20 वीं सदी के प्रारंभिक भाग के बाद से, मानव पसली में उत्थान के कुछ रिपोर्टों मनुष्य इतना 1-4 सीमित नहीं किया जा सकता है, सुझाव है कि प्रकाशित किया गया है। वर्तमान में इस घटना का सबसे अच्छा जबड़ा, चेहरा और कान पुनर्निर्माण के लिए पसली सामग्री का उपयोग करने वाले प्लास्टिक सर्जनों से जाना जाता है, लेकिन इसे और अधिक मोटे तौर पर 5 सराहना नहीं कर रहा है। और अधिक विस्तार में इस की मरम्मत का अध्ययन करने के क्रम में, हम माउस का उपयोग कर एक शल्य मॉडल विकसित किया है। इस प्रोटोकॉल का प्रयोग, शोधकर्ताओं शामिल जन्मजात कारकों की पहचान और अन्य स्थानों में कंकाल चिकित्सा की सुविधा के लिए इस जानकारी का उपयोग कर सकते हैं।
कंकाल की मरम्मत के अध्ययन के लिए एक मॉडल के रूप में पसलियों का उपयोग करने के कई फायदे हैं। (फीमर 6,7 की लकीर की तुलना में) पहले, आसपास के पसलियों एक प्राकृतिक fixator प्रदान करते हैं। यह आंतरिक और बाहरी fixators की रुग्णता जोखिम कम हो जाती है और शल्य चिकित्सा की प्रक्रिया सरल करता है। छाती वा के दूसरे, पतली मांसपेशियों परतेंआसान उपयोग और calvarial resections 8 की सुविधा के लिए परख तुलनीय बनाने के लिए जो उत्कृष्ट दृश्यता के लिए प्रदान करेंगे। तीसरा, intramembranous हड्डी बन जाना, endochondral हड्डी बन जाना द्वारा पसलियों रूप से फार्म और एक केंद्रीय diaphysis के दोनों छोर पर स्थित विकास प्लेटों में विस्तार के माध्यम से लंबाई में बढ़ने जो calvariae के विपरीत। इसलिए, पसलियों की मरम्मत उपांत्रीय कंकाल की लंबी हड्डियों की मरम्मत करने के लिए और अधिक तुलनीय हो सकता है। इसके अलावा, हम फीमर की तुलना में, पसली की periosteum गहरा हो जाता है और अधिक आसानी से छेड़छाड़ की जा सकती है कि मिल गया है। इस प्रकार, periosteum अध्ययन या सेल चिकित्सा, औषधीय एजेंटों का परीक्षण, और / या ऊतक scaffolds के प्रयोजन के लिए हड्डी की मरम्मत परख करना चाहते हैं जो जांचकर्ताओं को इस शल्य चिकित्सा मॉडल उपयोगी मिल सकता है। सारांश में, इस रिब लकीर मॉडल सामान्य उपयोग में ऐसी कोई मॉडल वर्तमान में मौजूद है के रूप में स्तनधारियों में प्राकृतिक बड़े पैमाने पर हड्डी की मरम्मत करने के लिए अध्ययन के भीतर जो एक संदर्भ प्रदान करता है।
Protocol
Representative Results
Discussion
पहली बार इस प्रोटोकॉल सीखने करते हैं, जहां चुनौतीपूर्ण हो सकता प्रारंभिक चीरा पता लगाने के लिए निर्धारित करने। हालांकि, euthanized चूहों पर अभ्यास सर्जन प्रारंभिक चीरा जगह और resected होने के लिए वांछित रिब को बे?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
We thank members of the Mariani lab for critical reading of the manuscript. Our funding sources were: the Baxter Medical Scholar Research Fellowship (to M.K.S.), USC undergraduate fellowships and the Provost, Dean Joan M. Schaeffer, and Rose Hills Fellowships, (to M.K.S.). We also acknowledge a CIRM BRIDGES fellowship through Pasadena City College (to T.T.T). and the James H. Zumberge Research and Innovation Fund, the USC Regenerative Medicine Initiative, and the NIAMS NIH under Award Number R21AR064462 (to F.V.M).
Materials
| Name of Reagent/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| Medium sized micro-dissection scissors (Vannas-Tübingen Spring Scissors 5 mm) | Fine Science Tools | 15003-08 | |
| Fine micro-dissection scissors (Vannas Spring Scissors – 2mm Cutting Edge) | Fine Science Tools | 15000-04 | curved tip is beneficial |
| Micro-scalpel 5.0 mm | Fine Science Tools | 10315-12 | other fine scalpels can be substituted |
| Dumont 55 forceps | Fine Science Tools | 11295-51 | |
| Retractor | Fine Science Tools | 17004-05 | adjustability is convenient |
| Micro-needle holders | Fine Science Tools | 12060-01 | |
| 9.0 nylon sutures (Ethilon), taper point best | Ethicon | 2819G or similar | taper point best but reverse cutting is also good |
| 7.0 prolene sutures (Prolene) | Ethicon | 8700H or similar | 6-0 can be used too, needle point can vary |
| Large forceps (Adson Forceps) | Fine Science Tools | 11006-12 | other brands are fine |
| Lubricant Eye Ointment (Akwa Tears) | Akorn | 17478-062-35 | |
| Suture glue (GLUture Topical Tissue Adhesive) | Abbot | 32046-01 | has excellent working time |
| Shaver | Wahl | 9918-6171 or similar | |
| Clamp lamp | Zoo Med | LF-5 | |
| Infrared Bulb, 75W | Zoo Med | RS-75 | |
| RC2 Rodent Anesthesia System | VetEquip | 922100 | |
| IsoFlo (Isoflurane) | Abbot | 05260-05 | |
| Buprenorphine (Buprenex) | Reckitt Benckiser | 12496-0757-1 | |
| Betadine | Purdue Frederick | 67618015017 | |
| Flavored Gelatin, raspberry | Jell-O | B000E1FYL0 | made up firm, to the consistency of 'jigglers' |
Riferimenti
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