The chick chorioallantoic membrane (CAM) is immunodeficient and highly vascularized, making it a natural in vivo model of tumor growth and angiogenesis. In this protocol, we describe a reliable method of growing three-dimensional, vascularized hepatocellular carcinoma (HCC) tumors using the CAM assay.
लड़की chorioallantoic झिल्ली (सीएएम) सीएएम यह ट्यूमर आरोपण के लिए एक आदर्श व्यवस्था कर रही है, स्वाभाविक रूप से immunodeficient और अत्यधिक vascularized है निषेचन के बाद दिन 7 से विकसित करने के लिए शुरू होता है और 12 दिन से परिपक्व होती है। इसके अलावा, सीएएम यह ट्यूमर आक्रमण और मेटास्टेसिस अध्ययन करने के लिए एक आकर्षक मॉडल बनाने ऐसे फ़ाइब्रोनेक्टिन, laminin, मज्जा, इंटीग्रिन अल्फा (v) beta3, और एमएमपी 2 के रूप में बाह्य मैट्रिक्स प्रोटीन, शामिल हैं। वैज्ञानिकों ने लंबे angiogenesis की एक मॉडल के रूप में उपयोग करके सीएएम के शरीर क्रिया विज्ञान का लाभ ले लिया है। हाल ही में, सीएएम परख बुनियादी इन विट्रो काम और अधिक जटिल जानवर कैंसर मॉडलों के बीच की खाई को पाटने कि विभिन्न तरह के कैंसर के लिए एक इन विवो जेनोग्राफ्ट मॉडल प्रणाली के रूप में काम करने के लिए संशोधित किया गया है। सीएएम परख लागत और समय प्रभावी है कि दोनों एक जैविक रूप से प्रासंगिक प्रणाली में ट्यूमर के विकास, विरोधी ट्यूमर चिकित्सा, और समर्थक ट्यूमर आणविक रास्ते के अध्ययन के लिए अनुमति देता है। यहाँ, हम सीएएम एक्सईएन के विकास का वर्णनअप करने के लिए 93% की भ्रूण जीवित रहने की दरों और विश्वसनीय ट्यूमर के साथ हेपैटोसेलुलर कार्सिनोमा (एचसीसी) की ograft मॉडल तीन आयामी, vascularized ट्यूमर के विकास के लिए अग्रणी ले।
हेपैटोसेलुलर कार्सिनोमा (एचसीसी) दुनिया एक में कैंसर से मृत्यु के 3 प्रमुख कारण है। वर्तमान में एचसीसी रोगियों का केवल 30% संभावित उपचारात्मक शल्य चिकित्सा उपचार 2 के लिए पात्र हैं, और प्रणालीगत कीमोथेरपी 3 प्रभावशाली नहीं है। इसलिए, उपन्यास एचसीसी उपचार के लिए एक दबाने unmet नैदानिक जरूरत है, और नए एजेंटों की कुशल परीक्षण के लिए उपयुक्त मॉडल प्रणाली का विकास है। लड़की chorioallantoic झिल्ली (सीएएम) परख विवो में संभावित विरोधी ट्यूमर दवाओं के परीक्षण के एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने, लागत प्रभावी है, और मध्यम तेज throughput विधि प्रदान करता है।
सीएएम परख angiogenesis 4 अध्ययन करने के लिए बड़े पैमाने पर इस्तेमाल किया गया है। यह भी सफलतापूर्वक ग्लियोब्लास्टोमा 5, अग्नाशय के कैंसर के 6, मेलेनोमा 7-9, और osteosarcoma 10-11 सहित कैंसर की एक ट्यूमर जेनोग्राफ्ट मॉडल के रूप में विकसित किया गया है। दोनों ओवो 12 और पूर्व ओवो में13 तकनीक प्रोटोकॉल से प्रोटोकॉल के लिए अलग-अलग विवरण के साथ, साहित्य में उपयोग किया गया है। 50 प्रतिशत 11-14 – सीएएम जेनोग्राफ्ट मॉडल के लिए एक बड़ी चुनौती 25 से लेकर प्रकाशित लड़की भ्रूण मृत्यु दर के साथ, अंडे के हेरफेर के बाद भ्रूण मौत के अपेक्षाकृत उच्च घटना है।
इस अनुच्छेद में, हम मज़बूती से histologically अविभाजित एचसीसी जैसे लगते हैं कि तीन आयामी, vascularized ट्यूमर के विकास को पैदा करता है कि एचसीसी की जेनोग्राफ्ट मॉडल ओवो एक में के विकास का वर्णन है। हम पहले Ossowski एट अल। 14 द्वारा वर्णित एक प्रोटोकॉल ढाल लिया है और अत्यंत उच्च ट्यूमर engraftment के साथ अप करने के लिए 93% की लड़की भ्रूण जीवित रहने की दर हासिल की है।
इस प्रोटोकॉल में कई महत्वपूर्ण कदम की संभावना सबसे अधिक सुधार भ्रूण अस्तित्व के साथ ही ट्यूमर के विकास की वृद्धि की विश्वसनीयता के लिए खाते। हवा की थैली का कश लगाने से दूर खोल से सीएएम गिराने (अंडा, कुं?…
The authors have nothing to disclose.
A.S. was partially supported by grants from the National Institutes of Health (NIH) National Institute of Dental and Craniofacial Research (5R03DE021741-02) and the National Cancer Institute (1K08CA154963-01A1).
The Howard Hughes Medical Institute provided funding for M.L. through the HHMI Medical Research Fellows Program.
Name of Reagent/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
Premium incubated eggs | Charles River | N/A | http://www.criver.com/files/pdfs/avian/av_c_spf_egg_price_list.aspx |
Egg incubators | GQF | Hova-Bator 2362N | |
Rotating egg trays | GQF | 1611 Automatic Egg Turner | |
Egg candler | Lyon | Hi-Power 950-070 | |
Dremel 100 rotary tool with 15/16 cut-off wheel | Dremel | 100-N/7 | |
Sterile forceps, push pin, dissection scissors, Scotch tape | |||
Matrigel | BD Biosciences | 356234 | |
Cryogenic vials, external thread with silicone washer | Corning | 430659 | |
Collagenase from Clostridium histolyticum | Sigma | C9891 |