테스트를위한 병아리 심장 침략 분석 암 세포의 침윤과 잠재적 안티 침략 화합물의 활동
Summary
여기서는 입체적 정상 조직 절편에 살아있는 종양 세포의 침윤을 연구 프로토콜을 제시한다. 이 기관 배양 기술은 주로 시험 관내에서 잠재적으로 항 – 침습 약물을 시험에 적용된다.
Abstract
병아리 심장 분석의 목적은 입체적 종양 침윤을 연구하는 중요한 장기 배양 방법을 제공하는 것이다. 분석은 침습적 및 비 침습적 세포를 구별하고, 종양 침윤에 대한 시험 화합물의 효과에 대한 연구를 가능하게 할 수있다. 암 세포 – 중 집계 또는 단일 세포로 – 배아 병아리 마음의 조각에 직면하고 있습니다. 며칠 또는 몇 주 동안 정지에서 기관 배양 후 직면 문화는 고정 및 조직 학적 분석을 위해 파라핀에 포함. 암세포 및 정상 조직 사이의 입체적인 상호 작용은 다음 헤 마톡 실린 – 에오신으로 또는 심장 조직의 에피토프 또는 대향하는 암 세포에 대한 면역 조직 화학 염색을 한 후 염색 직렬 섹션에서 재구성된다. 분석은 암세포 침윤이 암세포 및 그들의 이웃 기질 호스트 소자 (근육 섬유 모세포, endoth 분자 사이의 상호 작용의 결과 인 것으로 최근의 개념과 일치elial 세포, 세포 외 매트릭스 성분 등). 여기서,이 기질은 환경 생체 조직 절편 같은 암세포에 제공된다. 분석의 관련성에 대한 지원은 여러 양태이다. 프로그레시브 직업 및 교체 시간과 숙주 조직의 공간 및 침입과 대향 세포의 생체 내에서 비 – 침입 일반적 분석의 결과와 상관 관계 : 분석에서 내습 암 침윤의 기준에 따른다. 또한, 생체 내에서 세포의 침입 패턴은 병리학 자에 의해 정의 된 바와 같이, 분석에서 조직 학적 이미지에 반영된다. 많은 잠재적으로 항 – 침습 유기 동족체 화합물과 얻어진 결과의 정량 구조 – 활성 관계 (QSAR) 분석은 임상에서 사용되는 플라보노이드 및 칼콘, 공지 된 항 – 전이성 약물 구조 – 활성 관계 (예를 들어, 미세 소관 억제제의 연구를 허용 )뿐만 아니라 분석에서 침입을 억제한다. HoweveR, 분석은 암 침공 계정 면역 학적 기여를 고려하지 않습니다.
Introduction
침략은 악성 종양의 특징이다. 이 활동은 주변 조직의 파괴에 이르게뿐만 아니라 전이 형성에 연루되어 아닙니다. 암 환자가 침윤 및 전이, 효율적인 안티 침습적 치료법으로 사망 때문에 여전히 종양 세포의 침윤이 개발되었다 모방 부족한 실험실 분석이다. 병아리 심장 분석의 목적은 입체적 종양 침윤을 연구하는 중요한 장기 배양 방법을 제공하는 것이다. 분석은 침습적 및 비 침습적 세포를 구별하고, 종양 침윤에 대한 시험 화합물의 효과를 연구 할 수있다.
분석의 사용 배후의 이론적 근거는 종양은 종양 세포가 지속적으로 기질 (숙주 세포 및 세포 외 기질)과 상호 작용 생태계 있다는 실제적인 개념이며, 이들 분자 상호 침입 통해 그 미세 조정 (1)이다. 그래서, 분석에서 종양 세포 livi 직면종양 세포에 의해 침윤 용 기판으로서, 또한 간질 세포와 행렬 요소의 다른 유형의 소스로서 역할뿐만 NG 병아리 배아 심장 단편 2. 병아리 심장 근육 세포, 섬유 아세포 및 내피 세포를 포함하고, 세포 외 매트릭스는 라미닌, 피브로넥틴 및 콜라겐의 상이한 유형으로 구성된다. 이와 같이, 삼차원 기관 배양 기술은 환자의 종양 침윤에 관련 많은 세포와 분자의 상호 작용을 포함한다.
병아리 심장 분석의 주요 장점은 간질 효과를 구현 한 것이다. 이 측면은 기저막 3 간질 매트릭스 4 분자 구성이 아닌 생활 젤로 종양 세포 침공을 기반으로 체외에서 다른 침략 분석보다 더 완료됩니다. 장기 배양 실험에서 발견 된 바와 같이, 종양 세포 및 정상 생활 숙주 조직 사이의 대결의 개념은 여러 가지로 도입 된독일 7 울프와 슈나이더 프랑스 5, 영국 6 Easty과 Easty 및 Schleich을 포함하여 저자. 위에 인용 된 방법 병아리 심장 침윤 분석의 기술적 장점은 두 조각의 양이 용이하게 표준화 될 수 있도록, 그들은 기관 배양 물 중에 기능적 무결성 모니터링을 허용 수축성 남아 있다는 것이다. 그들은 쉽게 계란의 멸균 콘텐츠 해부 될 수 있기 때문에 또한, 조류 배아 바람직하다. 분석은 종양 세포로 둘러싸 복잡한 기질을 제공하여 병아리 chorioallantois 막 세이 8 컨셉 유사성을 갖는다.
분석은 성공적 9 및 HCT-8 (결장) 10 세포주 패밀리 MCF-7 (유방)과 같은 인간의 종양 침입 및 비 침습성 세포 변형을 구별하기 위해 적용되어왔다. 기술뿐만 아니라 잠재적으로 항 – 침습 화합물을 테스트하는 데 유용 <suP> (11, 12). 상기 한 바와 같이, 그것은 작은 유기 분자의 구조 – 활성 관계의 확립을 위해 사용될 수있다. 분석은, 그러나, 계정으로 암 침공에 면역 세포의 기여를 고려하지 않습니다. 이는 기술이 때문에 조작의 높은 번호, 분석 런 제한된 숫자 (최대 30 배양)과 긴 턴어라운드 시간 (약 1 개월)의, 높은 처리량 분석 시스템으로 간주 될 수 없다는 것을 강조한다.
Protocol
Representative Results
Discussion
PHFs의 제조 동안, 단편 현탁액에 체류하지 않을 수도 있지만, 혈관 벽에 부착; 이는 배양액의 부피를 증가시킴으로써 극복 될 수있다. PHFs 수가 너무 낮고, 그 크기가 너무 큰 경우, 배양액의 부피를 감소시킨다. 집계 테스트 세포의 실패는 온도 나 미생물 감염에 변동 때문일 수 있습니다. 또한, 집계 무능력 세포의 고유 한 특성 일 수있다. PHF에 골재의 부착 동안에, 접착 불량은 반고체 한천 배지 ?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
We thank Marleen De Meulemeester for demonstrating the assay technique in the video film. B. I. R. is a Postdoctoral Research Fellow of the Research Foundation – Flanders (FWO – Vlaanderen). L.M.M. is a recipient of an Emmanuel van der Schueren grant from the Flemish League against Cancer (Vlaamse Liga tegen Kanker).
Materials
| Ringer's salt solution | Braun | CEO123 | |
| Bacto-agar | Becton Dickinson | 214010 | |
| Tris-(hydroxymethyl)-aminomethaan Analar | VWR | 103157P | |
| BSA : albumin from bovine serum, cohn V fract. | Sigma | A4503-500G | |
| MEM-Rega 3 | Life Technologies | 19993013 | |
| Gyrotory shakers | New Brunswick Scientific | G10 and G33 | |
| Erlenmeyer flasks 50 ml | Novolab | 92717 | |
| Glass Petri dishes | Novolab | 68516 | |
| Iridectomy scissors | Rumex | 11-0625 | |
| Macroscope with calibrated ocular grid | Wild | 157702 | |
| Paraffin wax | International Medical products | 8599956 | |
| Eosin Y | Sigma | 230251-25g | |
| Harris' hematoxylin | Sigma | HHS32-1L | |
| Coverslipping resin (Tissue-Tek) | Sakura | 4494 | |
| Paraffin melting apparatus | GFL | 1052 | |
| Microtome for paraffin sectioning | Reichert | ||
| Stppers for Erlemeyer flasks with gas in- and outlets | Novolab | 2602421 and 260243 | |
| Diaminobenzidine | Sigma | D8001 | |
| REAX rocking table | Heidolph | 54131 | |
| 24-well tissue dishes | VWR | NUNC142475 | |
| Ophtalmological enucleation spoon | Rumex | 16-060 | |
| Sharp forceps | Rumex | 4-111T | |
| Blunt forceps | Nickel-Electro LTD | 7112 | |
| Erlenmeyer flasks 5 ml | Novolab | 211901 | |
| Microscope slides washed and degreased | International Medical products | 8613908 |
Riferimenti
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