Rosa Bengala Photothrombosis da confocale Optical Imaging In Vivo: Un modello di singolo vaso Stroke

Summary

Qui, descriviamo un approccio di microscopia ottica semi-invasiva per l'induzione di un coagulo fototrombotico di Rose Bengal nella corteccia somatosensoriale di un topo in vivo. Vengono descritti gli aspetti tecnici della procedura di imaging, dall'induzione di un evento fototrombotico all'applicazione e alla raccolta dei dati.

Abstract

Le tecniche di imaging in vivo sono aumentate nell'utilizzo a causa dei recenti progressi nei coloranti di imaging e nelle tecnologie ottiche, consentendo la capacità di visualizzare eventi cellulari in un animale intatto. Inoltre, la capacità di indurre stati patologici fisiologici come l'ictus in vivo ne aumenta l'utilità. La tecnica qui descritta consente la valutazione fisiologica delle risposte cellulari all'interno del SNC a seguito di un ictus e può essere adattata ad altre condizioni patologiche in fase di studio. La tecnica presentata utilizza l'eccitazione laser del colorante fotosensibile Rose Bengal in vivo per indurre un evento ischemico focale in un singolo vaso sanguigno.

Il protocollo video dimostra la preparazione di una finestra cranica sottile sopra la corteccia somatosensoriale in un topo per l'induzione di un evento fototrombotico di Rose Bengal, mantenendo al minimo il danno alla dura materia sottostante e al cervello. La preparazione chirurgica viene inizialmente eseguita sotto un microscopio da dissezione con una piattaforma chirurgica/di imaging su misura, che viene poi trasferita a un microscopio confocale dotato di un adattatore per obiettivo invertito. Vengono presentate immagini rappresentative acquisite utilizzando questo protocollo e sequenze time-lapse dell'induzione dell'ictus. Questa tecnica è potente in quanto la stessa area può essere visualizzata ripetutamente nei giorni successivi, facilitando gli studi longitudinali in vivo dei processi patologici successivi all'ictus.

Introduction

La tecnica descritta consente la visualizzazione delle risposte cellulari in vivo subito dopo l'induzione di Rosa Bengala photothrombosis in un mouse intatto. Rosa Bengala (4,5,6,7-tetracloro-2 ', 4', 5 ', 7'-tetraiodofluorescein) è un colorante fotosensibile usato per indurre ictus ischemico in modelli animali (topo e ratto). A seguito di una iniezione in bolo di RB attraverso la vena della coda e la successiva illuminazione attraverso un cranio diluito con una luce laser 564 nm, un trombo è indotta causando un ictus fisiologica ^1. Il metodo è stato originariamente descritto da Rosenblum e El-Sabban nel 1977, ed è stato succes....

Protocol

Nota: Tutte le procedure sugli animali sono state approvate dalla cura e l'uso degli animali Comitato Istituzionale della University of Texas Health Science Center di San Antonio e sono stati coerenti con le linee guida arrivano.

1. anestetizzante per corticale Preparazione

1. Posizionare il mouse in una camera di induzione con 2-3% isofluorano mescolato con l'ossigeno per indurre anestesia. Osservare il calo tasso di respirazione come il mouse è indotta. Stringere la zampa del mouse per determinare se il mouse è pronto per passare al cono. Nota: il livello di anestesia è un passo fondamentale in qualsiasi preparazione

Results

Lo scopo di questo metodo è di indurre un ictus ischemico in modelli animali (topo e ratto) a seguito di un bolo di RB attraverso la vena della coda e successiva illuminazione di un cranio diluito con una luce laser 561 nm. Le immagini in Figura 4 mostrano la progressione della formazione del coagulo in un unico recipiente dopo irradiazione dell'area a 0, 1, 1,5 e 2 min. Prima di formazione di coaguli l'intero vaso è bianco a causa di flusso libero Rosa Bengala. Dopo l'induzione di irradiazione della na.......

Discussion

La capacità di tradurre sperimentale corsa fisiopatologia da animale ad applicazione umana è stata colpita con il fallimento. Tuttavia, l'utilizzo di modelli animali, come il modello photothrombosis, permette una migliore comprensione di ictus fisiopatologia e l'esplorazione di nuovi approcci terapeutici per fornire neuroprotezione a seguito di un ictus. Piccoli colpi corticali e microinfarctions prodotte dal modello photothrombotic sono clinicamente rilevanti per subcliniche o "silenzioso" colpo ^.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Reagenti
Rose Bengal	Sigma	330000
Isoflurano Anestetico	MWI Fornitura Veterinaria	088-076
Vetbond	1469SB	1469SB
aCSF	126 mM di NaCl, 2,5 mM di KCl, 1,25 mM di NaH2PO4, 2 mM di MgCl2, 2 mM di CaCl2, 10 mM di glucosio e 26 mM di NaHCO3 (pH 7,4).
[header]
Forbici
da dissezione	bioindustriali	500-410
Forbici operative 14 cm	Prodotti bioindustriali	12-055
Pinze Dumont High Tech #5 style, prodotti	bioindustriali	TWZ-301.22
LabJack 132X80	Optosigma Co	123-6670
Piattaforma per Labjack 8X 8	Optosigma Co	145-1110
Supporto per barra auricolare da configurazione stereotassica	Stoelting/Cyborg	51654
Dispomed Labvent Macchina per anestesia per roditori	DRE, Inc.	15001
Tech IV Vaporizzatore di isoflurano	DRE, Inc.	34001
F Bomboletta d'aria	DRE, Inc	80120
Tubo di respirazione del circuito del bain	DRE, Inc	86111B
Adattatore per roditori per tubo del bain	DRE, Inc	891000
Regolatore O2 per serbatoi di ossigeno	DRE, Inc	CE001E
Camera di induzione per roditori	DRE, Inc	15004C
Ethicon Silk 6-0; 18 pollici con ago P-3	Suture Express	1639G
Obiettivo inverter Adattatore ottico Tecnologie	LSM Trapano
a doppio voltaggio 110/120	Foro	134,53
Meisinger Punta da trapano da 3,9 mm	Meisinger		(Ref#310 104 001 001 009)