الكلى الفئران زرع تقنية
Summary
The goal of this manuscript is to describe the steps required to perform a kidney transplant in a mouse, paying particular attention to the details of the arterial anastomosis.
Abstract
The first mouse kidney transplant technique was published in 19731 by the Russell laboratory. Although it took some years for other labs to become proficient in and utilize this technique, it is now widely used by many laboratories around the world. A significant refinement to the original technique using the donor aorta to form the arterial anastomosis instead of the renal artery was developed and reported in 1993 by Kalina and Mottram 2 with a further advancement coming from the same laboratory in 1999 3. While one can become proficient in this model, a search of the literature reveals that many labs still experience a high proportion of graft loss due to arterial thrombosis. We describe here a technique that was devised in our laboratory that vastly reduces the arterial thrombus reported by others 4,5. This is achieved by forming a heel-and-toe cuff of the donor infra-renal aorta that facilitates a larger anastomosis and straighter blood flow into the kidney.
Introduction
منذ عام 1973 كان نموذج زرع الكلى في الفئران أداة بحث قيمة، ولكن أعاقت المسائل التقنية استخدامه على نطاق واسع. على مر السنين العديد من الصحف قد نشرت تفصيل التحسينات / التحسينات على هذا الإجراء. كنموذج للأوعية دموية في المقام الأول زرع الأعضاء الصلبة هذا الإجراء هو على الارجح في المرتبة الثانية بعد منتبذ نموذج زرع القلب الذي ابتكر أيضا من قبل المختبر روسيل في 1973 6. كلا النموذجين تصلح للبحث في الاستجابات رفض خيفي، وتطوير وظيفة الكسب غير المشروع تأخر وإصابة نقص التروية ضخه.
واحدة من القضايا الأكثر شيوعا ليتم الإبلاغ مع زرع الكلى هي معدلات عالية نسبيا من تخثر الشرايين 4،5،7 التي مررنا بها أيضا في مختبرنا. لذلك شرعنا في إجراء استعراض أدبيات تشكيل خثرة وربما العثور على سبب هذه المشكلة التقنية ووضع أيضاحل ممكن. السبب الأكثر احتمالا لتجلط الدم هو مسار متعرج إلى حد ما يأخذ الدم من الشريان الأورطي المتلقي، في الشريان الأورطي الكلوي المانحة ثم إلى الشريان الكلوي المانحة. هذا المسار يسبب اضطرابات في الشريان الكلوي الذي يمكن أن يؤدي إلى تنشيط صفائح الدم وتشكيل خثرة. استنادا إلى الملاحظات الأخيرة والبحث من المؤلفات ذات الصلة 8-14 توصلنا مع تقنية جديدة التي قللت تجلط الدم إلى 0٪.
تقنية الموضحة هنا تختلف من التقنيات ذكرت سابقا في تشكيل الشرايين الكعب والقدم صفعة المرافق التي تحسن تدفق الدم ويقلل بشكل ملحوظ تشكيل خثرة. وشكلت صفعة بقسمة الشريان الأورطي الأشعة تحت الكلى في وجه الفوهة الشرايين الكلوية في زاوية أقل من 45 درجة إلى المحور الطولي من الشريان الأبهر (الشكل 1A و 1B). هذه النتائج في الكفة تقريبا 2mm و في الطول. يتم تشكيل كاريل التصحيح وريدي من قبل transecting صالوريد ENAL في IVC وبالتالي زيادة قطر الكفة. والأشعة تحت الكلى المانحة البطن الشريان الأورطي الكعب والقدم صفعة هو anastomosed نهاية إلى الجانب إلى الشريان الأورطي البطني المستفيدة والوريد الكلوي المانحة / IVC التصحيح هو anastomosed نهاية إلى الجانب إلى المستلم في البطن الأجوف السفلي الأجوف (IVC) . ثم يتم عرض الحالب إلى ويرتكز إلى المثانة كما وصفها هان وآخرون 3.
لهذه الدراسة زراعة غير المعالجة مع أوقات نقص التروية الدافئ فقط (أي، لا نقص التروية الباردة) ومقارنة. في هذه الحالة يشير نقص التروية الدافئ إلى الوقت من وقف تدفق الدم عبر الكلى المانحة (الخطوة 1.11 أدناه) وضخه من الكسب غير المشروع في المتلقي (الخطوة 2.11 أدناه). يشير نقص التروية الباردة إلى الوقت الذي الكلى لا perfused ويتم الاحتفاظ في التخزين البارد حتى بداية إجراء عملية الزرع.
Protocol
Representative Results
Discussion
اتقان هذه التقنية زرع أمر صعب، ولكن بمجرد إنجازه وإنما هي أداة بحث قوية جدا. سوف يكافأ الجراح المريض / الباحث عن طريق الاهتمام بأدق التفاصيل واتساق التقنية، والذي هو المفتاح لإتقان أي عملية جراحية، حتى أكثر من ذلك في النماذج الحيوانية الصغيرة. الصعوبات التقنية لاتقا?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد هذا العمل في جزء من 1R03DK096151.
Materials
| Instrument | Roboz # | Fine Science Tools # | Arosurgical # |
| Straight micro-dissecting forcep #5 | RS-5015 | 11295-51 | |
| Curved micro-dissecting forcep #7 | RS-5047 | 11297-00 | |
| Curved serrated forcep | RS-5137 | 11052-10 | |
| Vannas micro-dissecting scissors, short | RS-5610 | 09.140.08 | |
| Micro-dissecting scissors, straight, sharp, long | 11.602.11 | ||
| Micro spring handle needle holder | 11.549.15 | ||
| Straight mosquito forcep | 91308-12 | ||
| Micro-dissecting scissors, straight, blunt | RS-5962 | 14078-10 | |
| Micro-dissecting scissors, curved, blunt | RS-5981 | 14079-10 | |
| Micro retractor | RS-6540 | ||
| Instrument tray, 10” x 6 ½” x ¾” | RT-1350S | ||
| Silk suture, 5/0, 22.5m spool | 18020-50 | ||
| Suture | |||
| 10/0 nylon | T4A10Q07 | ||
| 5/0 silk | E19A05N | ||
| Gloves | Drapes | ||
| Biogel from Medex Supply | Precept, #64-9012-9 | ||
| Syringes | Cotton applicators | ||
| B-D 1cc insulin, #329424 | Fisher-brand, #23-400-100 | ||
| Povidone-Iodine swabs | |||
| PDI, #B40600 | |||
| 4/0 Cotton ties | |||
| Domestic cotton autoclaved with instruments | |||
Riferimenti
- Skoskiewicz, M., Chase, C., Winn, H. J., Russell, P. S. Kidney transplants between mice of graded immunogenetic diversity. Transplant Proc. 5 (1), 721-725 (1973).
- Kalina, S. L., Mottram, P. L. A microsurgical technique for renal transplantation in mice. Aust N Z J Surg. 63 (3), 213-216 (1993).
- Han, W. R., Murray-Segal, L. J., Mottram, P. L. Modified technique for kidney transplantation in mice. Microsurgery. 19 (6), 272-274 (1999).
- Ge, F., Gong, W. Strategies for successfully establishing a kidney transplant in a mouse model. Exp Clin Transplant. 9 (5), 287-294 (2011).
- Martins, P. N. Learning curve, surgical results and operative complications for kidney transplantation in mice. Microsurgery. 26 (8), 590-593 (2006).
- Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. Primarily vascularized allografts of hearts in mice. The role of H-2D, H-2K, and non-H-2 antigens in rejection. Transplantation. 16 (4), 343-350 (1973).
- Zhang, Z., Chen, H., Qian, S. Kidney Transplantation in Mice. Experimental Organ Transplantation. , 45-64 (2013).
- Zhang, L., Moskovitz, M., Piscatelli, S., Longaker, M. T., Siebert, J. W. Hemodynamic study of different angled end-to-side anastomoses. Microsurgery. 16 (2), 114-117 (1995).
- Liu, Q., Mirc, D., Fu, B. M. Mechanical mechanisms of thrombosis in intact bent microvessels of rat mesentery. J Biomech. 41 (12), 2726-2734 (2008).
- Chesnutt, J. K., Han, H. C. Tortuosity triggers platelet activation and thrombus formation in microvessels. J Biomech Eng. 133 (12), 121004 (2011).
- Han, H. C. Blood vessel buckling within soft surrounding tissue generates tortuosity. J Biomech. 42 (16), 2797-2801 (2009).
- Gutierrez-Diaz, J. A., et al. Intraluminal thrombus and neointimal hyperplasia after microvascular surgery. Surg Neurol. 24 (2), 153-159 (1985).
- Khouri, R. K., Cooley, B. C., Kenna, D. M., Edstrom, L. E. Thrombosis of microvascular anastomoses in traumatized vessels: fibrin versus platelets. Plast Reconstr Surg. 86 (1), 110-117 (1990).
- Johnson, P. C., et al. Initial platelet deposition at the human microvascular anastomosis: effect on downstream platelet deposition to intact and injured vessels. Plast Reconstr Surg. 90 (4), 650-658 (1992).
