Murin Böbrek nakli Tekniği
Summary
The goal of this manuscript is to describe the steps required to perform a kidney transplant in a mouse, paying particular attention to the details of the arterial anastomosis.
Abstract
The first mouse kidney transplant technique was published in 19731 by the Russell laboratory. Although it took some years for other labs to become proficient in and utilize this technique, it is now widely used by many laboratories around the world. A significant refinement to the original technique using the donor aorta to form the arterial anastomosis instead of the renal artery was developed and reported in 1993 by Kalina and Mottram 2 with a further advancement coming from the same laboratory in 1999 3. While one can become proficient in this model, a search of the literature reveals that many labs still experience a high proportion of graft loss due to arterial thrombosis. We describe here a technique that was devised in our laboratory that vastly reduces the arterial thrombus reported by others 4,5. This is achieved by forming a heel-and-toe cuff of the donor infra-renal aorta that facilitates a larger anastomosis and straighter blood flow into the kidney.
Introduction
1973 yılından bu yana farelerde böbrek nakli modeli değerli bir araştırma aracı olmuştur, ama teknik sorunlar yaygın kullanımını engellemiştir. Yıllar boyunca birçok kağıtları yayınlanan bu prosedüre iyileştirmeler / iyileştirmeler ayrıntılarıyla oylandı. Öncelikle vaskülarize solid organ transplantasyonu bir model olarak bu prosedür sadece, aynı zamanda 1973 6 Russell laboratuvar tarafından icat edildi heterotopik kalp nakli modeli muhtemelen ikinci. Her iki model de allojenik ret yanıtları, gecikmiş greft fonksiyonu gelişimi içine araştırma kendilerini ödünç ve iskemi reperfüzyon hasarı.
Böbrek nakli ile rapor edilecek en yaygın konulardan biri de laboratuvarda yaşanan arteriyel tromboz 4,5,7 nispeten yüksek insidansı. Bu nedenle trombüs oluşumunun bir literatür taraması gerçekleştirmek ve muhtemelen bu teknik sorunun nedenini bulmak için yola ve aynı zamanda hazırlamak içinolası çözüm. Tromboz en muhtemel nedeni kan bağışı renal artere daha sonra donör böbrek aorta içine alıcı aortadan alır biraz dolambaçlı yoldur. Bu yol, trombosit aktivasyonu ve trombus oluşumuna neden olabilir renal arter türbülans neden olur. Son gözlemler ve literatür 8-14 bir arama dayanarak% 0 tromboz azalttı yeni bir teknik ile geldi.
Burada açıklanan teknik imkanları kan akışını geliştirilmiş bir arteriyel topuk-ve-ayak manşet oluşumunda önceden bildirilen teknikler arasında değişir ve anlamlı trombüs oluşumunu azaltır. Manşon az 45 ° aort (Şekil 1A ve 1B) uzunlamasına eksenine belirli bir açıda renal arter ostiyum yüzeyi boyunca alt böbrek aort bölünmesi ile meydana getirilir. Bu uzunluğu yaklaşık 2mm bir manşet ile sonuçlanır. Bir venöz Carrel yama r bölücü oluşturulmuşturIVC içine enal ven böylece manşet çapı artar. Kızıl-böbrek verici abdominal aorta topuk-and-toe manşet uç-yan alıcı abdominal aort ve donör renal venin anastomoz olduğunu / IVC yama (IVC) uç-yan alıcı karın inferior vena kava anastomoz olduğunu . Üreter sonra içine ve Han ve ark 3 tarafından açıklandığı gibi mesane bağlanır.
Bu çalışmada sadece sıcak iskemi süresi ile tedavi edilmemiş nakli için (yani., Soğuk iskemi) karşılaştırılır. Bu durumda sıcak iskemi verici böbrek yoluyla kan akımının kesilmesinden zaman anlamına gelir (aşağıda 1.11 adıma) ve alıcı (aşağıda adım 2.11) 'de greft reperfüzyon. Soğuk iskemi böbrek perfüze değildir ve implant prosedürünün başına kadar soğuk hava depolarında muhafaza edilir zaman anlamına gelir.
Protocol
Representative Results
Discussion
Bu nakli tekniği Mastering zordur, ancak başarılı kez çok güçlü bir araştırma aracı. Hasta cerrah / araştırmacı detay ve küçük hayvan modellerinde daha çok herhangi bir cerrahi işlem mastering için anahtar olduğunu tekniğin, tutarlılık dikkat tarafından ödüllendirilir. Fare böbrek nakli mastering teknik zorluklar birçok kıvrımlar vardır ve diğer küçük hayvan nakli modellerinde deneyimi bu yordamı mücadelede önce kazanılan gerektiğini kuvvetle muhtemeldir.
<p class="jove_conte…Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu çalışma 1R03DK096151 tarafından kısmen desteklenmiştir.
Materials
| Instrument | Roboz # | Fine Science Tools # | Arosurgical # |
| Straight micro-dissecting forcep #5 | RS-5015 | 11295-51 | |
| Curved micro-dissecting forcep #7 | RS-5047 | 11297-00 | |
| Curved serrated forcep | RS-5137 | 11052-10 | |
| Vannas micro-dissecting scissors, short | RS-5610 | 09.140.08 | |
| Micro-dissecting scissors, straight, sharp, long | 11.602.11 | ||
| Micro spring handle needle holder | 11.549.15 | ||
| Straight mosquito forcep | 91308-12 | ||
| Micro-dissecting scissors, straight, blunt | RS-5962 | 14078-10 | |
| Micro-dissecting scissors, curved, blunt | RS-5981 | 14079-10 | |
| Micro retractor | RS-6540 | ||
| Instrument tray, 10” x 6 ½” x ¾” | RT-1350S | ||
| Silk suture, 5/0, 22.5m spool | 18020-50 | ||
| Suture | |||
| 10/0 nylon | T4A10Q07 | ||
| 5/0 silk | E19A05N | ||
| Gloves | Drapes | ||
| Biogel from Medex Supply | Precept, #64-9012-9 | ||
| Syringes | Cotton applicators | ||
| B-D 1cc insulin, #329424 | Fisher-brand, #23-400-100 | ||
| Povidone-Iodine swabs | |||
| PDI, #B40600 | |||
| 4/0 Cotton ties | |||
| Domestic cotton autoclaved with instruments | |||
Riferimenti
- Skoskiewicz, M., Chase, C., Winn, H. J., Russell, P. S. Kidney transplants between mice of graded immunogenetic diversity. Transplant Proc. 5 (1), 721-725 (1973).
- Kalina, S. L., Mottram, P. L. A microsurgical technique for renal transplantation in mice. Aust N Z J Surg. 63 (3), 213-216 (1993).
- Han, W. R., Murray-Segal, L. J., Mottram, P. L. Modified technique for kidney transplantation in mice. Microsurgery. 19 (6), 272-274 (1999).
- Ge, F., Gong, W. Strategies for successfully establishing a kidney transplant in a mouse model. Exp Clin Transplant. 9 (5), 287-294 (2011).
- Martins, P. N. Learning curve, surgical results and operative complications for kidney transplantation in mice. Microsurgery. 26 (8), 590-593 (2006).
- Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. Primarily vascularized allografts of hearts in mice. The role of H-2D, H-2K, and non-H-2 antigens in rejection. Transplantation. 16 (4), 343-350 (1973).
- Zhang, Z., Chen, H., Qian, S. Kidney Transplantation in Mice. Experimental Organ Transplantation. , 45-64 (2013).
- Zhang, L., Moskovitz, M., Piscatelli, S., Longaker, M. T., Siebert, J. W. Hemodynamic study of different angled end-to-side anastomoses. Microsurgery. 16 (2), 114-117 (1995).
- Liu, Q., Mirc, D., Fu, B. M. Mechanical mechanisms of thrombosis in intact bent microvessels of rat mesentery. J Biomech. 41 (12), 2726-2734 (2008).
- Chesnutt, J. K., Han, H. C. Tortuosity triggers platelet activation and thrombus formation in microvessels. J Biomech Eng. 133 (12), 121004 (2011).
- Han, H. C. Blood vessel buckling within soft surrounding tissue generates tortuosity. J Biomech. 42 (16), 2797-2801 (2009).
- Gutierrez-Diaz, J. A., et al. Intraluminal thrombus and neointimal hyperplasia after microvascular surgery. Surg Neurol. 24 (2), 153-159 (1985).
- Khouri, R. K., Cooley, B. C., Kenna, D. M., Edstrom, L. E. Thrombosis of microvascular anastomoses in traumatized vessels: fibrin versus platelets. Plast Reconstr Surg. 86 (1), 110-117 (1990).
- Johnson, P. C., et al. Initial platelet deposition at the human microvascular anastomosis: effect on downstream platelet deposition to intact and injured vessels. Plast Reconstr Surg. 90 (4), 650-658 (1992).
