Heterotopic col de l'utérus chez la souris Transplantation cardiaque

Summary

The cuff technique shortens and facilitates the model of heterotopic cervical heart transplantation in mice by avoiding technically challenging suture anastomoses of small vessels. The technical details shown in this video paper should allow researches to establish this model in their laboratories.

Abstract

The heterotopic cervical heart transplantation in mice is a valuable tool in transplant and cardiovascular research. The cuff technique greatly simplifies this model by avoiding challenging suture anastomoses of small vessels thereby reducing warm ischemia time. In comparison to abdominal graft implantation the cervical model is less invasive and the implanted graft is easily accessible for further follow-up examinations. Anastomoses are performed by pulling the ascending aorta of the graft over the cuff with the recipient’s common carotid artery and by pulling the main pulmonary artery over the cuff with the external jugular vein. Selection of appropriate cuff size and complete mobilization of the vessels are important for successful revascularization. Ischemia-reperfusion (I/R) injury can be minimized by perfusing the graft with a cardioplegic solution and by hypothermia. In this article, we provide technical details for a simplified and improved cuff technique, which should allow surgeons with basic microsurgical skills to perform the procedure with a high success rate.

Introduction

Le modèle de la transplantation cardiaque est fréquemment utilisé pour enquêter sur I / R-blessure, le rejet d'allogreffe, la vasculopathie post-transplantation et l'efficacité des agents immunomodulateurs. Des modèles de souris combinent de nombreux avantages comme le immunologique connu et origines génétiques, la disponibilité de nombreuses souches consanguines et transgéniques expérimentales et les coûts relativement faibles.

En 1973, une technique de abdominale transplantation cardiaque chez la souris a été décrite par Corry et al ^1. Dans ce modèle greffons sont revascularisés par anastomoses de l'aorte ascendante à l'aorte abdominale du destinataire et de l'artère pulmonaire principale à la veine cave inférieure end-to-côté. En 1991, une technique de suture du col pour une transplantation cardiaque chez la souris a été décrit par Chen et al ^deux. Dans ce modèle, une perfusion de l'artère coronaire rétrograde est établie par anastomose de l'artère carotide du bénéficiaire de l'aorte ascendante du grarrière. Les drains veineux via le sinus coronaire de sang dans l'oreillette droite, le ventricule droit et est éjecté par l'artère pulmonaire dans le receveur veine jugulaire externe (Figure 1). Par rapport à la greffe implantation abdominale le modèle col de l'utérus est moins invasive et l'emplacement superficiel de la greffe permet une accessibilité très facile pour les examens de suivi supplémentaires (par exemple, la palpation, l'échocardiographie, la microscopie à fluorescence intravitale) ^3,4.

Malgré les améliorations techniques ^5,6, une utilisation plus généralisée de ce modèle a été limitée en raison de difficultés techniques pour réaliser des anastomoses suturées de petits navires avec une incidence élevée de fuite de l'anastomose et la thrombose. En 1991, Matsuura et al. introduit la technique de manchon dans lequel la paroi du vaisseau est éversée sur un cylindre synthétique, ce qui facilite grandement le modèle de transplantation cardiaque du col ^7. La technique était fucomplémen adopté pour différents modèles de transplantation expérimentales dont ⁸ rénale, pancréatique ^9, branche ^{10, 11,12} hépatique, du poumon et de la transplantation ^13,14 vasculaire ^15. Par rapport à la technique de suture de la durée requise pour anastomoses et, par conséquent, le temps d'ischémie chaude est plus courte et il ya des complications vasculaires beaucoup moins en utilisant la technique de la coiffe ^16. En outre, il permet aux chirurgiens avec peu de formation en microchirurgie pour effectuer l'opération avec un taux de réussite élevé. Un inconvénient de la technique du brassard est la ligature préalable de l'artère carotide commune, ce qui peut modifier la perfusion cérébrale.

Dans ce papier, nous présentons une vidéo technique de brassard améliorée et simplifiée pour cervicale transplantation cardiaque chez la souris.

Protocol

Toutes les expériences ont été approuvés par l'Allemand Coeur Centre de Munich et le gouvernement de Bavière, Allemagne (Gz. 55.2-1-54-2532.3-17-13). Les animaux ont été logés dans un établissement exempt d'organismes pathogènes spécifiques et ont reçu des soins humaine en conformité avec les «Principes de laboratoire Animal Care" formulées par la Société nationale pour la recherche médicale et le «Guide pour le soin et l'utilisation des animaux de laboratoire" fournies par la Na…

Representative Results

Notre équipe pourrait effectuer avec succès la technique décrite après environ 20 chirurgies de formation. La partie la plus difficile est de retourner la paroi de la cuve de l'artère carotide sur le brassard, parce qu'il retourne facilement en arrière et de multiples tentatives peut conduire à la déchirure de la paroi. Après la période de formation, le temps opératoire total moyen était de 60 ± 8 min. Environ 20 minutes sont nécessaires pour la récolte des donateurs, 25 min pour la préparation d…

Discussion

Nous avons réalisé plus de 200 greffes cardiaques avec un taux de réussite de plus de 90% dans divers paramètres expérimentaux. Avec la technique décrite ici, la procédure complète peut être effectuée dans les 60 minutes par un chirurgien expérimenté. En préparant les vaisseaux cervicaux avant le prélèvement d'organes, le temps total greffon ischémie peut être limité à 20 min. Le temps d'implantation (temps d'ischémie chaude) est significativement plus courte en utilisant la technique de …

Materials

Forceps JFC-7.2	S&T	P-00036	Curved tip 0.20 mm
Vessel dilatator D-5a	S&T	S-00124
Adventita scissor	S&T	S-00102
Vascular clamp B-1V	S&T	S-00396
Yasargil Clip	Peter Lazic	65,097	3.5 mm lenght
Bipolar forceps	Micromed	148-100-011	tip 0.25 mm
Polyimide tubes	River Tech Medical		19-24 gauge
8.0 silk ligatures	Catgut
Custodiol HTK solution	Essential Pharmaceuticals