마우스 폐 암 연구에 유용한 점안 및 고정 방법
Summary
이 논문의 목적은 크게 폐암 또는 다른 병리와 설정 및 마우스 폐의 분석에 도움이 될 간단한 방법을 설명하는 것입니다. 우리는 간단하고 확실하게 폐 instillations, 정착, 폐 용적 측정을 수행하는데 3 프로토콜을 제시한다.
Abstract
부상 또는 쥐를 죽이지 않고 직접 폐로 라이브 제제, 세포, 또는 화학 물질을 주입하는 능력은 폐암 연구에서 중요한 도구이다. 폐 기능 측정을 위해 마우스를 삽관하는 방법을 보여주는 게시 된 많은 방법이 있지만, 아무도는 마우스의 큰 동료의 급격한 기관 점안에 대한 잠재적 인 문제없이 없습니다. 본 논문에서는 간단하고 빠른 방법은 효율적인 방식으로 이러한 instillations을 수행하는 연구자있게 것이 기재되어있다. 이 방법은 특별한 도구 나 조명을 필요로하지 않고 약간의 연습을 배울 수 있습니다. 또한, 마우스를 마취 기관을 시각화 목에 작은 절개를 제작 한 후 직접 정맥 카테터를 삽입하는 것을 포함한다. 작은 절개 빠르게 조직 접착제로 폐쇄하고, 마우스를 복구 할 수있다. 숙련 된 학생 또는 기술자는 2 분 / 마우스의 평균 속도로 instillations을 수행 할 수 있습니다. T 일단암이 확립 그는, 폐의 조직 학적 정량 분석에 대한 요구가 빈번하다. 전통적으로 고정하는 동안 폐 인플레이션을 표준화 귀찮게하지 않습니다 일반적으로 병리학 및 분석은 종종 매우 주관적 일 수있는 평가 시스템을 기반으로합니다. 이 언젠가 폐 종양의 크기의 추정을위한 총 충분히 적합 할 수 있지만, 폐 세포 구조 또는 임의의 적절한 stereological 정량화 재현성 정착 과정 및 후속 폐 량 측정을 필요로한다. 여기에서 우리는 모두 압력 폐를 고정하고 정확하게 고정 폐 용적을 측정하는 간단한 신뢰할 수있는 절차에 대해 설명합니다. 유일한 요구 사항은 MG-1 300 g의 범위에 걸쳐 정확한 실험 실용 저울이다. 그러므로 여기에 제시된 절차는 크게 마우스에서 폐암을 생성 처리, 및 분석 할 수있는 능력을 향상시킬 수있다.
Introduction
여러 가지 이유로, 폐암 널리 마우스에서 연구되지 않았다. 그 이유 중 하나는 폐에 대한 액세스가 생체 내에서 매우 곤란하며, 고정 된 폐의 정량 분석은 일반적으로 수행되지 않는다는 것이다. 이 문서에서 설명하는 방법은이 상황을 해결하기 위해 설계되었습니다. 목표는 여기에 크게 폐암 또는 다른 병리와 설정 및 마우스 폐의 분석에 도움이 될 간단한 방법을 설명한다. 이러한 방법 중 어느 것도 완전히 새로운 없지만, 그들은 여기에 설명 된대로 단순화 된 방식으로 독립 실행 형 방법으로 함께 제시되지 않았다.
주로 길이 연구에서 개별 마우스에서 반복 폐 기능 또는 기관지 세척을하는 목적 마우스 폐 삽관 용 방법을 설명 하였다 원고있어왔다. 그 원래의 종이 때문에, MOUS에 다른 접근 방식을 설명했다 몇 가지 다른 논문이 있었다전자 삽관 1 -9. 이들 방법 모두가 성공적으로 사용될 수 있지만, 그들은 일반적으로 상당한 훈련이 필요하며, 사소 실패율없이 종종있다. 또한, 폐 기능의 측정을 수행하기 위해, 캐 뉼러는 공기 누설이 없도록 충분히 밀접 기관 적합해야한다. 그러나, 삽관 용 다른 실용적인 사용은 폐에 직접 특정 에이전트 (암세포 또는 기타 욕설) 또는 치료제를 제공하는 것이다. 이러한 절차는 꽉 피팅 정맥이나 정교한 폐 기능의 장비를 필요로하지 않습니다. 여기에 도시 된 본 방법의 특징은 신규 한 식도를 입력 뉼러의 가능성없이 삽관을 허용 작은 외과 수술을 포함한다. 이 간단한 방법은 비교적 적은 훈련이나 경험이 성공적인 삽관을 할 수 있습니다. 30 개의 마우스 / 시간은 제로에 접근 실패율이 방법을 사용하여 처리 될 수있다.
T 일단그는 마우스는 부상 또는 암의 폐 후 조직 학적 및 병리학 적 분석을 위해 제거 할 수 있습니다, 희생 할 준비가되어 있습니다. 그러나, 적절하게 다른 폐과의 비교를 위해 모든 조직 학적 변수를 정량화하기 위해서, 정착 과정을 표준화하고 적절히 고정 폐 용적 (10)을 정량화하는 것이 필수적이다. 이 논문은 상세히 표준화 정착 절차뿐만 아니라 고정 폐 용적을 측정 할 수있는 방법을 허용 간단한 절차를 설명한다. 이러한 체적 측정없이, 단지 상대 밀도가 10을 측정 할 수 있기 때문에, 부피가 조직학의 정량화에 필수적인 메트릭이다. 폐 용적이 알려지면, 그러나, 세포 및 폐의 다른 구조적 측정의 절대 측정은 다음 정량화 할 수있다.
Protocol
Representative Results
Discussion
여기에 설명 된 절차는 여러 가지 장점이있다. 먼저 필요한 장비는 간단하고 저렴하다. 둘째, 삽관 빠르게 거의 오류없이 수행 할 수있다. 셋째로, 고정 폐 용적을 일정한 압력으로 폐를 고정하고 측정하는 능력은 폐 (10)의 구조 또는 셀의 적절한 정량을 허용한다.
삽관에 한 가지 단점은 작은 수술이다. 이것은 2 차 점적 주입이 필요한 경우의 절차를 반복 할 …
Materials
| Laboratory Balance | Ohaus | Adventurer Pro Model AV 313 | Other balances can be used if they have a range of 1 – 300g |
| 20 g Luer intravenous catheter | Insylte | Several other possible vendors, e.g., Jelco Optiva | |
| 500 mL laboratory bottle | Various | Several other possible vendors |
Riferimenti
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