Закапывания и фиксация методы полезны в мышь легких исследования рака
Summary
Цель данной работы является описание простых методов, которые значительно помочь в настройке и анализа легких мышей с раком легких или других патологий. Мы представляем 3 протоколы просто и надежно выполнять инстилляций легких, фиксация и измерения объема легких.
Abstract
Возможность привить живые агенты, клетки, или химических веществ непосредственно в легких без ранили и убивали мышей является важным инструментом в исследовании рака легких. Хотя существует несколько методов, которые были опубликованы, показывающий, как интубации мыши для измерения функции легких, ни одна из них не потенциальных проблем для быстрого трахеи инстилляции в больших когортах мышей. В настоящей работе, простой и быстрый способ описан, что позволяет следователю для проведения таких инстилляций в эффективной манере. Метод не требует каких-либо специальных инструментов или освещение и могут быть извлечены с очень небольшой практики. Она включает в себя обезболивающее мышь, делая небольшой разрез на шее, чтобы визуализировать трахею, а затем вставить внутривенный катетер непосредственно. Небольшой разрез быстро закрыл с клеем ткани, и мыши могут восстановить. Квалифицированный студент или специалист может сделать инстилляций в среднем 2 мин / мышь. После того, как тОн рак установлено, существует потребность часто для количественного анализа гистологического легких. Традиционно патологи обычно не беспокоить, чтобы стандартизировать инфляции легких во время фиксации, и анализы часто основывается на балльной системе, что может быть весьма субъективным. Хотя это может иногда быть достаточно адекватными для грубых оценок размера опухоли легких, любой собственный стереологического количественное структуры легких или клеток требует воспроизводимый процедуру фиксации и последующего измерения объема легких. Здесь мы опишем простые надежные процедуры и фиксации легкие под давлением, а затем точного измерения фиксированного объема легких. Единственное требование состоит в лабораторных весах с точностью, что это в диапазоне от 1 мг-300 г. Процедуры, представленные здесь, таким образом, может значительно улучшить способность создавать, рассматривать и анализировать рак легких у мышей.
Introduction
Для ряда причин, рак легких не был широко изучен в мыши. Одной из причин этого является то, что доступ к легких очень трудно в естественных условиях, и количественный анализ основных легких обычно не делается. Методы, описанные в этой статье, предназначены для исправления этой ситуации. В данном Цели описать простые методы, которые значительно помочь в настройке и анализа легких мышей с раком легких или других патологий. В то время как ни один из этих подходов не совершенно новые, они не были представлены вместе в виде отдельных методов в упрощенном виде как описано здесь.
Там было несколько рукописей, которые, описанных методов для интубации легких мышей в первую очередь с целью ведения повтора функции легких или бронхоальвеолярного лаважа в отдельных мышей в продольных исследованиях. С этого оригинальной статье, было несколько других документов, которые описаны различные подходы к МОВе интубация 1 -9. В то время как все эти методы могут быть с успехом использованы, они обычно требуют значительной подготовки, и часто не без нетривиального отказов. Кроме того, для того, чтобы проводить измерения функции легких, канюля должна соответствовать трахею достаточно плотно, так что нет утечки воздуха. Тем не менее, другой практическое применение интубации является предоставление конкретных агентов (раковые клетки или другие оскорбления) или терапевтических лекарственных средств непосредственно в легкие. Такая процедура не требует плотно прилегающую канюли ни какой-либо сложный функцию оборудование легких. Роман особенность этого способа, показанного здесь включает в себя незначительные хирургические процедуры, что позволяет интубации без возможности канюли, входящего в пищевод. Этот простой подход позволяет успешно интубации с относительно небольшим подготовки или опыта. Целых 30 мышей / час можно лечить с помощью этого подхода с отказов к нулю.
После того, как тон мышей готовы принести в жертву, поврежденные или раковые легкие могут быть удалены для гистологического и патологического анализа. Тем не менее, для того, чтобы должным образом количественно любые гистологические переменные для сравнения с другими легких, важно, чтобы стандартизировать процедуры фиксации и правильно количественно фиксированный объем легких 10. Эта статья подробно описывает простые процедуры, позволяющие стандартизированных процедур фиксации, а также способ измерения фиксированного объема легких. Объем является важным метрики в количественной оценке гистологии, так как без такого определения объемной, только относительные плотности может быть измерена 10. После того, как объем легких Известно, однако, абсолютные измерения клеток и других структурных измерений в легких может быть количественно.
Protocol
Representative Results
Discussion
Процедуры, описанные здесь, имеют несколько преимуществ. Во-первых необходимое оборудование является простым и недорогим. Во-вторых, интубации может быть быстро сделано с небольшим количеством ошибок. В-третьих, возможность устранить легкие при постоянном давлении, а затем измерить ф?…
Materials
| Laboratory Balance | Ohaus | Adventurer Pro Model AV 313 | Other balances can be used if they have a range of 1 – 300g |
| 20 g Luer intravenous catheter | Insylte | Several other possible vendors, e.g., Jelco Optiva | |
| 500 mL laboratory bottle | Various | Several other possible vendors |
Riferimenti
- Brown, R. H., Walters, D. M., Greenberg, R. S., Mitzner, W. A method of endotracheal intubation and pulmonary functional assessment for repeated studies in mice. J Appl Physiol. 87, 2362-2365 (1999).
- Walters, D. M., Wills-Karp, M., Mitzner, W. Assessment of cellular profile and lung function with repeated bronchoalveolar lavage in individual mice. Physiol Genomics. 2, 29-36 (2000).
- Hamacher, J., et al. Microscopic wire guide-based orotracheal mouse intubation: description, evaluation and comparison with transillumination. Laboratory animals. 42, 222-230 (2008).
- Spoelstra, E. N., et al. A novel and simple method for endotracheal intubation of mice. Laboratory. 41, 128-135 (2007).
- Zhao, X., et al. A technique for retrograde intubation in mice. Lab animal. 35, 39-42 (2006).
- Rivera, B., Miller, S., Brown, E., Price, R. A novel method for endotracheal intubation of mice and rats used in imaging studies. Contemporary topics in laboratory animal science / American Association for Laboratory Animal Science. 44, 52-55 (2005).
- Vergari, A., et al. A new method of orotracheal intubation in mice. European review for medical and pharmacological sciences. 8, 103-106 (2004).
- Vergari, A., Polito, A., Musumeci, M., Palazzesi, S., Marano, G. Video-assisted orotracheal intubation in mice. Laboratory animals. 37, 204-206 (2003).
- Hastings, R. H., Summers-Torres, D. Direct Laryngoscopy in Mice. Contemporary topics in laboratory animal science / American Association for Laboratory Animal Science. 38, 33-35 (1999).
- Hsia, C. C., Hyde, D. M., Ochs, M., Weibel, E. R. An official research policy statement of the American Thoracic Society/European Respiratory Society: standards for quantitative assessment of lung structure. Am J Respir Crit Care Med. 181, 394-418 (2010).
- Foster, W. M., Walters, D. M., Longphre, M., Macri, K., Miller, L. M. Methodology for the measurement of mucociliary function in the mouse by scintigraphy. J Appl Physiol. 90, 1111-1117 (2001).
- Cai, Y., Kimura, S. Noninvasive intratracheal intubation to study the pathology and physiology of mouse lung. Journal of visualized experiments : JoVE. , e50601 (2013).
- Das, S., Macdonald, K., Chang, H. Y., Mitzner, W. A simple method of mouse lung intubation. Journal of visualized experiments : JoVE. , (2013).
- MacDonald, K. D., Chang, H. Y., Mitzner, W. An improved simple method of mouse lung intubation. J Appl Physiol. 106, 984-987 (2009).
- Lum, H., Mitzner, W. Effects of 10% formalin fixation on fixed lung volume and lung tissue shrinkage. American Reveiw of Respiratory Diseases. 132, 1078-1083 (1985).
- Bishai, J., Fields, M. J., Mitzner, W. Comparison of Mouse Lung Volumes Inflated with Air and Instilled Fixatives. Proc Am Thorac Soc. 3, A549 (2006).
- Mitzner, W., Brown, R., Lee, W. In vivo measurement of lung volumes in mice. Physiol Genomics. 4, 215-221 (2001).
