Summary

등쪽 뿌리 신경절 모델 : 암성 신경 침략의 생체 외 모델링에서

Published: April 12, 2016
doi:

Summary

This video article shows the use of the dorsal root ganglia (DRG)/cancer cell model in pancreatic ductal adenocarcinoma.

Abstract

One way that solid tumors disseminate is through neural invasion. This route is well-known in cancers of the head and neck, prostate, and pancreas. These neurotropic cancer cells have a unique ability to migrate unidirectionally along nerves towards the central nervous system (CNS). The dorsal root ganglia (DRG)/cancer cell model is a three dimensional (3D) in vitro model frequently used for studying the interaction between neural stroma and cancer cells. In this model, mouse or human cancer cell lines are grown in ECM adjacent to preparations of freshly dissociated cultured DRG. In this article, the DRG isolation protocol from mice, and implantation in petri dishes for co-culturing with pancreatic cancer cells are demonstrated. Five days after implantation, the cancer cells made contact with the DRG neurites. Later, these cells formed bridgeheads to facilitate more extensive polarized, neurotropic migration of cancer cells.

Introduction

직접 침윤, 림프 확산 및 hematogenic 확산 : 고체 종양은 세 가지 방법으로 전파. 그러나, 자주 신경을 따라, 보급을 무시 암 확산의 제 4 수단이있다. 암성 신경 침윤 (CNI)는 특히 두경부 1 전립선 2, 3 및 췌장 암의 암 확산의 공지의 경로이다. 4-8 CNI 선도 췌장 선암 개인의 80 % 이상에서 발생 복강 신경절 신경을 통해 확산 복막 종양. 이러한 neurotropic 암 세포는 중추 신경계 (CNS) 방향으로 신경을 따라 일방향으로 이주 할 수있는 독특한 능력을 가지고있다. (9)이 결과는 신경초 미세이 악성 성장을 지원하는 인자를 제공하는, 암 세포에 의해 이용 될 수 있다는 것을 시사한다.

CNI 연구를위한 몇 체외 모델 중 하나는 후근 신경절 (DRG) / 암 세포 모델입니다. 이 모드엘 자주 갓 해리 배양 DRG의 준비에 인접한 세포 외 기질 (ECM)에서 재배되는이 모델, 마우스 또는 인간의 암 세포 라인에 신경 기질 암 세포 사이. 10-18 분비의 상호 작용을 연구하는 데 사용됩니다.

이 비디오 기사는 췌장 도관 선암에서 체외 CNI의 응용 프로그램을 보여줍니다.

Protocol

6 주 된 여성 C57BL / CJ 마우스에 네살 (할란은, 예루살렘, 이스라엘) 평가 및 실험 동물 관리 사양의 인증을위한 협회에 따르면 실험에 사용 하였다. 모든 실험 절차는 기관 동물 관리 및 사용위원회 농업 규정의 부에 따라 수행 하였다. 1. 수확 척수 공동이 챔버를 사용하여 마우스를 안락사. 이 전단력에 의한 신경절 뿌리에 손상을 줄 수 있습니다로 자궁 전위?…

Representative Results

비디오 현미경 영상을 사용하여, DRG는 암세포가 DRG에 대한 그들의 콜로니로부터 멀리 이주 동안 주입 후 신경 돌기 5-7 일간 발아 알 수있다. 이식 후 7 일째에 의해, 암 세포는 신경 돌기 (도 2)와 접촉. 이 프로토콜에서 사용되는 췌장암 세포의 전방 이동 지수는 다른 세포주 (QLL2, B16F) (도 3a)보다…

Discussion

이 문서에서는 신경 틈새에서 암의 미세 환경의 DRG 모델을 되풀이되었습니다 체외 모델을 제시한다. 비디오는 같은 마우스에서 DRG, 그 추출 및 ECM의 마지막으로, 그 배양으로 해부학 적 랜드 마크를 인식에서 시작하여 모든 단계를 보여줍니다. 공동 배양 암세포 나란히 DRG 또한 제공된다. 체외에서 신경초 틈새 미세 환경 연구를위한이 모델은 필수적 만드는 문헌에 기재된 체외</e…

Divulgazioni

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Edith Suss-Toby is thanked for her assistance in the time-lapse microscopy and image analysis. Nofar Rada is thanked for the artistic work.

Materials

Equipments:
Operating microscope Leica M205
Tiime Lapse System Zeiss
Forceps Sigma-Aldrich F4142 
Surgical blade Sigma-Aldrich Z309036
Scissors Sigma-Aldrich S3271
35mm petri dishes, glass bottom de groot 60-627860
Name Company  Catalog Number Comments
Materials:
70% ethanol sigma
Cold PBS Biological industries 02-023-1A
DMEM Biological industries 01-055-1A
FCS Rhenium 10108165
Penicillin and streptomycin Biological industries 01-031-1B
Sodium Pyruvate Biological industries 03-042-1B
L-Glutamine Biological industries 03-020-1B
Growth factor depleted matrigel Trevigen 3433-005-01

Riferimenti

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Citazione di questo articolo
Na’ara, S., Gil, Z., Amit, M. In Vitro Modeling of Cancerous Neural Invasion: The Dorsal Root Ganglion Model. J. Vis. Exp. (110), e52990, doi:10.3791/52990 (2016).

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