Een eenvoudig apparaat om snel te bereiden Whole Bergen van de muis Darm
Summary
The use of a simple device to cut and ‘roll’ mouse intestines to rapidly prepare whole mount preparations is described.
Abstract
Voorbereiding whole mounts van de muis dunne darm en colon voor daaropvolgende analyse of kwantificatie kan tijdrovend en moeilijk. We beschrijven het gebruik van een eenvoudige inrichting te snijden en "roll" mouse darmen snel bereiden ganse berg preparaten van superieure en uniforme kwaliteit wat kan worden bereikt met de hand. De inrichting omvat een basis die 4 roestvrij stalen staaf en een top, waarin een zaaggeleider handelt houdt. De staven worden in de lumen van de dunne darm [onderverdeeld in drieën] en het colon. De staven en monsters worden vervolgens op een stuk filtreerpapier en kaart geplaatst in het bedrijf sleuven in de basis van de inrichting. De bovenkant van het apparaat wordt vervolgens geplaatst en dient als een snijgeleider. De twee schuine gedeelten in het midden van het bovenste stuk worden gebruikt om een mes of scalpel en snijden de darm longitudinaal aan de bovenzijde van de staven. Zodra de intestinale secties werden gesneden, wordt boven verwijderd en de kaart, tissUE en staven voorzichtig van het apparaat verwijderd en geplaatst op de bank. De staven worden vervolgens voorzichtig opzij gerold te vlakken en plak de intestinale segmenten op het onderliggende stuk filter papier of karton. Het uiteindelijke preparaat kan vervolgens worden onderzocht of vastgesteld en opgeslagen voor latere analyse. De preparaten zijn van onschatbare waarde voor de studie van intestinale veranderingen in normale of genetisch gemodificeerde muismodellen. De preparaten werden gebruikt voor de studie en kwantificering van de effecten van ontsteking (colitis), beschadiging, voorstadia van kanker (afwijkende crypt foci (ACFs) en mucine verarmd foci (MDF)) en poliepen of tumoren.
Introduction
De muis en de genetisch gemodificeerde muizen 1-3 zijn een waardevol model voor de studie van verschillende pathologieën met name kanker en zijn relatie met ontsteking in het maagdarmkanaal. Dit vereist vaak het bereiden van whole mounts van de dunne darm en / of colon.
De bereiding van whole mounts kan met een nauwkeurigheid paar van offset schaar maar kan ongeveer 20 minuten per muis 4 nemen. Dit is niet praktisch voor vergelijkende onderzoeken, die een aanzienlijke hoeveelheid muizen vereisen (zeg 10 per groep onderworpen aan statistische analyse). Bovendien is de tijd die het risico op weefselafbraak. Een poging om dit probleem te verminderen tot het proces van verschillende snij preparaat hulpmiddelen. De eerste was gebaseerd op een aantal metalen platen met scherpe bosjes, maar de platen verduisterd het weefsel en het snijden was derhalve moeilijk te controleren.
Een conventional zeskantige potlood eindelijk voorzien inspiratie voor de snij-inrichting, zoals we dan kon zien hoe een half potlood vorm een goede gids voor een scalpel (figuur 1) zou maken. Dit resulteerde in een ontwerp voor een frame met vier snij geleidingen 5. De doeltreffendheid van deze inrichting was dramatisch als preparaten in figuur 4 tonen het verschil tussen de schaar preparaat en het preparaat toestel.
De toppen van de oorspronkelijke apparaten werd opgebouwd uit verschillende stukken metaal, maar later degenen, en het huidige model werd gefreesd uit een massief stuk Duralumin. De basis werd gefreesd uit de hoogste kwaliteit high-density hars.
Het apparaat heeft bewezen van groot nut voor de bereiding van whole mounts muis darm als het aanzienlijk versnelt en verbetert de kwaliteit en consistentie van de preparaten, die een breed scala van toepassingen.
Protocol
Representative Results
Discussion
Het apparaat aanzienlijk versnelt het proces, zodat twee operators volledig kan autopsie een muis binnen 6 min. Dit omvat een visuele controle voor de hand liggende grove laesies en wegen en de vaststelling van de belangrijkste organen. Het zal het ook mogelijk de operatoren te spoelen, dep en wegen van de maag, blindedarm, dunne darm en dikke darm en de voorbereiding van de hele mounts. De afgeplatte weefsel kan snel worden vastgesteld en derhalve afbraak voorkomen artefacten.
Een van de gr…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
The evolution of the device started with somewhat different cutting prototype demonstrated at the Imperial Cancer Research Fund (ICRF) mouse club by Bass Hassan, following this there were several discussions with Rob Rudling and Nikki Mandir in the containment facility at ICRF Clare Hall. Jo Kitau of the mechanical workshop at ICRF constructed the initial versions and Andy Lucas designed and perfected the final model in the CRUK workshop in Oxford.
Materials
| Delrin | Ryan Plastics, Earls Barton, UK | N/A | High-density acetal resin similar material would suffice |
| Duralumin plate | Metal Supplies Ltd, Park Road,Dukinfield. SK16 5LP UK | N/A | Aluminium allow dating back to 1909 so alterative suppliers are available |
| Finished device(s) ready for use | Contact Dr Goodlad r.goodlad@imperial.ac.uk | N/A | Contact r.goodlad@imperial.ac.uk for supply details |
Riferimenti
- Goodlad, R. A., Alison, M. R. Cancer Handbook. , 243-262 (2007).
- Ward, J. M., Treuting, P. M. Rodent intestinal epithelial carcinogenesis: pathology and preclinical models. Toxicol Pathol. 42, 148-161 (2014).
- Sundberg, J. P., Hogenesch, H., Nikitin, A. Y., Treuting, P. M., Ward, J. M. Training mouse pathologists: ten years of workshops on the Pathology of Mouse Models of Human Disease. Toxicol Pathol. 40, 823-825 (2012).
- Wasan, H. S., Novelli, M., Bee, J., Bodmer, W. F. Dietary fat influences on polyp phenotype in multiple intestinal neoplasia mice. Proc Natl Acade Sci USA. 94, 3308-3313 (1997).
- Rudling, R., Hassan, A. B., Kitau, J., Mandir, N., Goodlad, R. A. A simple device to rapidly prepare whole mounts of murine intestine. Cell Prolif. 39, 415-420 (2006).
- Alferez, D., Goodlad, R. A. To best measure cell proliferation in samples from the intestine. Cell Prolif. 40, 231-240 (2007).
- Park, H. S., Goodlad, R. A., Wright, N. A. The incidence of aberrant crypt foci and colonic carcinoma in dimethylhydrazine-treated rats varies in a site-specific manner and depends on tumor histology. Cancer Res. 57, 4507-4510 (1997).
- Park, H. S., et al. Effects of epidermal growth factor and dimethylhydrazine on crypt size, cell proliferation, and crypt fission in the rat colon. Cell proliferation and crypt fission are controlled independently. Am J Pathol. 151, 843-852 (1997).
- Femia, A. P., Dolara, P., Caderni, G. Mucin-depleted foci (MDF) in the colon of rats treated with azoxymethane (AOM) are useful biomarkers for colon carcinogenesis. Carcinogenesis. 25, 277-281 (2004).
- Ruehl-Fehlert, C., et al. Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice–part 1. Exp Toxicol Pathol. 55, 91-106 (2003).
- Goodlad, R. A., et al. Inhibiting vascular endothelial growth factor receptor-2 signaling reduces tumor burden in the ApcMin/+ mouse model of early intestinal cancer. Carcinogenesis. 27, 2133-2139 (2006).
- Mandir, N., Englyst, H., Goodlad, R. A. Resistant carbohydrates stimulate cell proliferation and crypt fission in wild-type mice and in the Apc(Min/+) mouse model of intestinal cancer, association with enhanced polyp development. Br J Nutr. 100, 711-721 (2008).
