Questa applicazione semplificata della microscopia intravitale delle vene mesenterarie nei topi può essere utilizzata in diversi modelli di infiammazione per osservare le interazioni leucociti-endoteliali e piastrine-leucociti.
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Articolo metodologico
Interazioni intravitale Microscopia di leucociti-endoteliali e piastrine-leucociti in Mesenterial Vene Mice
In questo articolo
Sommario
Abstract
Microscopia intravitale è un metodo che può essere utilizzato per studiare processi diversi in diverse regioni e vasi negli animali viventi. In questo protocollo, si descrive la microscopia intravitale delle vene mesentere. Questo può essere eseguito in un breve periodo di tempo con risultati riproducibili mostrano interazioni leucociti-endotelio in vivo. Descriviamo un ambiente infiammatorio dopo LPS sfida dell'endotelio. Ma in questo modello si può applicare diversi tipi di patologie infiammatorie, come batteri, chimica o biologica e indagare la somministrazione di farmaci e dei loro effetti diretti sul animale vivente e il suo impatto sul reclutamento dei leucociti. Questo protocollo è stato applicato con successo per un certo numero di diversi trattamenti di topi ei loro effetti sulla risposta infiammatoria nei vasi. Qui, si descrive la visualizzazione dei leucociti e piastrine etichettando fluorescente questi con rodamina 6G. Inoltre, qualsiasi immagini specifico può essere performed utilizzando mirati molecole fluorescente.
Introduzione
Lo scopo di questo protocollo è quello di descrivere una tecnica semplificata della microscopia intravitale delle vene mesentere in topi viventi per l'osservazione diretta di interazioni leucociti-endoteliale e leucociti-piastrine in condizioni infiammatorie.
Microscopia intravitale è stato sviluppato per studiare le interazioni leucociti-endotelio in vivo in condizioni infiammatorie 1,2, che non è banale, ma importante per la comprensione infiammatorio reclutamento e la funzione dei leucociti. Il metodo che descriviamo in questo protocollo è stato sviluppato sulla base di pubblicazioni precedentemente pubblicati. ....
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Protocollo
Tutti gli esperimenti sugli animali sono stati eseguiti in conformità alla legge sulla protezione degli animali tedesca (TierSchG). I topi sono stati alloggiati e trattati in conformità alle buone pratiche di origine animale come definito da FELASA (www.felasa.eu/guidelines.php) e il corpo al benessere degli animali nazionale GV-SOLAS (www.gv-solas.de/index.html). Il comitato benessere degli animali dell'Università di Friburgo, così come le autorità locali (Regierungspräsidium Freiburg) ha approvato tutti gli esperimenti su animali.
1. Animal Handling, Preparazione e induzione di infiammazione
- Utilizzare 4-6 settimane di et....
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Risultati
Una panoramica dell'impostazione sperimentale descritto in questo protocollo è mostrato in Figura 1. Essa mostra un mouse con un ileo-loop esteriorizzato e sue navi, che può essere osservata in microscopia intravitale. Figura 2 mostra certo grado di attivazione in animali non trattati a causa la procedura stessa. Ma non c'è quasi rotolamento lento o ferma adesione dei leucociti, rispetto ai topi LPS-trattati. La figura 2 mostra anche i diversi risultati della mi.......
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Discussione
Qui si descrive la preparazione e l'esecuzione di microscopia intravitale delle vene mesentere di topi in vivo. Questo metodo ci dà l'opportunità di osservare le interazioni leucociti-endotelio e piastrine-endotelio 11 direttamente nell'organismo vivente.
Come risposta precoce alla infiammazione dell'endotelio viene attivato e interagisce con leucociti e piastrine con conseguente rotolamento, aderenza e la trasmigrazione 12. Ma leucociti interag.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto dalla Deutsche Forschungsgemeinschaft (DU 1190/3-1).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Rodamina 6G | Sigma-Aldrich | 989-38-8 | |
| Lipopolisaccaridi da Escherichia coli 055:B5 | Sigma-Aldrich | L2637 |
Riferimenti
- Lehr, H. A., Vollmar, B., Vajkoczy, P., Menger, M. D. Intravital fluorescence microscopy for the study of leukocyte interaction with platelets and endothelial cells. Methods in enzymology. 300, 462-481 (1999).
- Atherton, A., Born, G. V.
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Ristampe e permessi
