Questo manoscritto descrive in dettaglio un metodo utilizzato per generare xenotrapianti derivati da pazienti affetti da cancro alla prostata (PDX) da cellule tumorali circolanti (CTC). La generazione di modelli PDX da CTC fornisce un modello sperimentale alternativo per studiare il cancro alla prostata; il tumore più comunemente diagnosticato e una frequente causa di morte per cancro negli uomini.
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Articolo metodologico
Generazione di cancro alla prostata del paziente Derivato modelli di xenotrapianto di cellule tumorali circolanti
In questo articolo
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Sommario
Abstract
I modelli di xenotrapianto derivati da pazienti (PDX) stanno guadagnando popolarità nella ricerca sul cancro e vengono utilizzati per la valutazione preclinica dei farmaci, l'identificazione di biomarcatori, gli studi biologici e le strategie di medicina personalizzata. Le cellule tumorali circolanti (CTC) svolgono un ruolo critico nelle metastasi tumorali e sono state isolate da pazienti con diversi tipi di tumore. Recentemente, le CTC sono state utilizzate per generare modelli sperimentali PDX di cancro al seno e alla prostata. Questo manoscritto descrive in dettaglio il metodo per la generazione di modelli PDX di cancro alla prostata da CTC sviluppati dal nostro gruppo. I vantaggi di questo metodo rispetto ai modelli PDX convenzionali includono l'indipendenza dalla raccolta chirurgica dei campioni e la generazione di modelli sperimentali in vari stadi della malattia. La centrifugazione in gradiente di densità seguita da lisi dei globuli rossi e deplezione con citometria a flusso di cellule mononucleate CD45 positive viene utilizzata per arricchire le CTC da campioni di sangue periferico raccolti da pazienti con malattia metastatica. Le CTC vengono quindi iniettate in topi immunocompromessi; Gli xenotrapianti generati successivamente possono essere utilizzati per studi funzionali o raccolti per la caratterizzazione molecolare. Il limite principale di questo metodo è il metodo di selezione negativa utilizzato per l'arricchimento CTC. Nonostante questa limitazione, la generazione di modelli PDX da CTC fornisce un nuovo modello sperimentale da applicare alla ricerca sul cancro alla prostata.
Introduzione
Paziente xenotrapianti derivati sono modelli sperimentali sempre più popolari utilizzati per la ricerca sul cancro. Essi possono essere utilizzati per la caratterizzazione di biomarcatori e percorsi biologici, valutazione preclinica di efficacia dei farmaci, e la creazione di avatar per terapie antitumorali personalizzate 1,2. In precedenza, altri gruppi di ricerca hanno sviluppato modelli PDX o impiantando o iniettando sospensioni di cellule tumorali singole o espianti intero tumore in topi immunocompromessi 1. Questi PDX modelli richiedono raccolta chirurgica del tumore solido fresco, ascite maligna o versamento pleurico d....
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Protocollo
Questo protocollo è stato condotto presso il nostro istituto con l'approvazione del comitato etico della ricerca istituzionale ed è in conformità con tutte le linee guida istituzionali, nazionali e internazionali per il benessere umano.
1. Raccolta di sangue periferico di pazienti affetti da cancro alla prostata avanzato
Nota: Selezionare i pazienti con carcinoma della prostata metastatico. Ottenere il consenso scritto del paziente e registrare le caratteristiche cliniche dei pazienti, tra cui l'età di isolamento e la chemioterapia precedente e trattamenti ormonali. I pazienti con malattia metastatica sa....
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Risultati
Questo protocollo porterà alla generazione di modelli PDX da isolati CD45 prostata negativo CTC cancro. Sulla base del metodo di selezione negativa utilizzata nel nostro protocollo è necessario escludere le cellule morte mediante colorazione DAPI. La percentuale di cellule CD45 negative rilevata mediante citometria di flusso è variabile e dipende dal carico tumorale del paziente (Figura 1A). Immunofluorescenza di cellule CD45 e non ordinati utilizzando DAPI (per identificare nuclei cellulari) rivela cel.......
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Discussione
Questo manoscritto descrive un metodo per la generazione di cancro della prostata modelli PDX da CTC. L'uso di CTC per la generazione di PDX modelli ha diversi vantaggi potenziali importanti rispetto ai metodi esistenti. Innanzitutto, raccolta accessibile delle CTC dal sangue periferico consente la generazione di modelli sperimentali dallo stesso paziente a diversi stadi della malattia. In secondo luogo, la raccolta di sangue rappresenta un metodo sicuro ed economico per isolare le cellule tumoral.......
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Dichiarazioni
Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari concorrenti.
Ringraziamenti
Ringraziamo il Dr. Jordi Ochando del Flow Cytometry Shared Resources presso il Mount Sinai Medical Center per la loro assistenza nell'analisi della citometria a flusso. Ringraziamo la dottoressa Rumana Huq della Microscopy Shared Resource Facility presso il Mount Sinai Medical Center per la loro assistenza all'imaging. Gli autori ringraziano la Fondazione TJ Martell per il suo sostegno in questo progetto.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 | Gibco Life Technologies | 11875-093 | |
| Siero fetale bovino (FBS) | Gibco Life Technologies | 10437-028 | |
| Penicillina Streptomicina | Gibco Life Technologies | 15140-122 | |
| Soluzione salina tamponata con fosfato (PBS) | Corning Cell Gro | 21-031-CM | |
| 35 µ m Cell Strainer | BD Falcon | 352340 | |
| Provetta conica in polistirene da 50 ml | Crystalgen | 23-2263 | |
| Tampone per lisi di globuli rossi | Sigma | R7757 | |
| DAPI | Invitrogen | d3571 | |
| Ficoll-Paque Plus | GE Healthcare | 17-1440 | |
| Provette in polistirene da 12 mm x 75 mm con tappo per filtro cellulare | BD Falcon | Provette per | |
| la raccolta del sangue alla lavanda 352235 BD Vacutainer con EDTA | |||
| BD Set per la raccolta del sangue alato con ago di ritrazione a pulsante Calibro | |||
| BD Vacutainer Porta | |||
| Laccio emostatico | |||
| Guanti | |||
| in lattice o non in latticetamponi imbevuti di | |||
| 2 x 2 garze | |||
| Benda | |||
| ago | |||
| siringa |
Riferimenti
- Hidalgo, M., et al. Patient-derived xenograft models: an emerging platform for translational cancer research. Cancer discovery. 4, 998-1013 (2014).
- Siolas, D., Hannon, G. J. Patient-derived tumor xenografts: transforming clinica....
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Ristampe e permessi
Errata corrige
Formal Correction: Erratum: Generation of Prostate Cancer Patient Derived Xenograft Models from Circulating Tumor Cells
Posted by JoVE Editors on 12/01/2015. Citeable Link.
A correction was made to Generation of Prostate Cancer Patient Derived Xenograft Models from Circulating Tumor Cells. There was a spelling error in one of the authors' surname. The author's name was corrected from:
Veronica Rodriquez-Bravo
to:
Veronica Rodriguez-Bravo
