La ricerca traslazionale sul cancro dipende dall'estrazione di tessuti umani. Molto lavoro è stato dedicato all'ottimizzazione dei metodi di estrazione per l'analisi ex vivo. Qui, descriviamo i metodi di lavorazione dei tessuti che consentono di ottenere la massima produzione di dati da campioni limitati.
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Articolo metodologico
Lavorare con tessuti umani per Translational Cancer Research
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
La ricerca medica a beneficio dell'uomo è fortemente ostacolata dalla necessità di tessuti e soggetti umani. Tuttavia, dopo aver ottenuto il consenso per i campioni umani, i campioni preziosi devono essere maneggiati con la massima cura al fine di garantire l'integrità di organi, tessuti e cellule al massimo grado. Purtroppo, il processamento tissutale richiede per definizione l'estrazione di tessuti dall'ospite, un cambiamento che può causare un grande stress cellulare e avere importanti ripercussioni sulle analisi successive. Queste sollecitazioni potrebbero far sì che il campione non sia più rappresentativo del sito da cui è stato recuperato. Pertanto, è necessario rispettare un protocollo rigoroso durante l'elaborazione di questi campioni per garantire la rappresentatività. Anche il saggio o i saggi desiderati devono essere presi in considerazione al fine di garantire che venga utilizzata una tecnica ottimale per l'elaborazione dei campioni. Di seguito viene descritto un protocollo per il recupero dei tessuti, l'elaborazione e varie analisi che possono essere eseguite su tessuti lavorati al fine di massimizzare la produzione a valle da campioni di tessuto limitati.
Introduzione
La ricerca medica ha beneficiato immensamente dallo studio di entrambe le linee cellulari umane e modelli animali. Linee cellulari consentono un migliore controllo dei componenti in un sistema, così come l'uso di cellule dalla corretta organismo. Lavorare con le cellule umane, mentre più rappresentativo, presenta un'istantanea drasticamente semplificata di meccanismi che potrebbero essere responsabili per la salute e la malattia, perché le linee di cellule non potrebbero riassumere l'impatto di altre cellule, componenti stromali e gli organi che possono influenzare le risposte 1. D'altra parte, i modelli animali, anche se non del tutto accu....
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Protocollo
Dichiarazione Etica: Questo protocollo è approvato dalla University of Texas MD Anderson Cancer Center.
1. Procurement campioni
- Raccogliere campioni di tessuto tumorale ricerca da surplus e relativo tessuto normale 10-12. Conservare i campioni sul ghiaccio bagnato per evitare autolisi.
- Invia tutti i tessuti, dispositivi medici e corpi estranei rimossi durante una procedura chirurgica per il Dipartimento di Patologia all'esame necessario per facilitare una diagnosi patologica.
- Maniglia tessuto assegnato per la ricerca in conformità con la ricerca applicabili e le politiche bancarie dei tessuti e delle procedure.
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Risultati
I risultati visualizzati rappresentano il flusso di strategia citometria gating per un'ampia fenotipizzazione immunitario un tumore melanoma trattati. Il giorno di colorazione, campione di tessuto è stato digerito con collagenasi e omogeneizzato I e DNasi I incubazione per 60 min a 37 ° C sotto 225 rotazione RPM. A seguito di digestione, sospensione cellulare è stata filtrata attraverso un colino cella 70 micron per eliminare i detriti e le cellule sono state colorate con il flusso di fluorescenza marcata cito.......
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Discussione
Infine, i metodi di lavorazione devono essere dettate dalla ipotesi desiderata e previsti saggi tecnici da eseguire (Figura 1). La sezione seguente serve come una panoramica di descrivere eventuali saggi che possono essere eseguite su tali sezioni di tessuto. E non è affatto un quadro esaustivo, ma ha lo scopo di aiutare i metodi di lavorazione campione di guida e scelta di saggi a valle con tecniche descrivere ed elencare i loro punti di forza e di debolezza.
Citometria a f.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno conflitti di interesse da rivelare.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto dai contributi filantropici della John G. e Marie Stella Kenedy Memorial Foundation (Grant # 0.727.033) e il Melanoma Research Alliance. Gli autori desiderano ringraziare l'Università del Tissue Texas MD Anderson Cancer Center Institutional Bank (ITB) di coordinare la distribuzione di tessuti e di raccolta e facilitare la ricerca traslazionale, così come il dottor Ignacio Wistuba, il dottor Victor Prieto, il Dipartimento MD Anderson Cancer Center di Patologia e il Programma di Tiro Melanoma Luna. Infine, gli autori desiderano ringraziare tutti i pazienti e le famiglie colpite da melanoma.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Aghi | BD | 305167 | |
| Bisturi monouso in acciaio inox | Miltex | 4-410 | |
| Piatto per coltura tissutale | Cassette per | biopsia | |
| Thermo Fisher | 58931 | ||
| Soluzione stabilizzante dell'RNA | Ambion | AM7021 | |
| Provette Eppendorf da 1,5 ml | Phenix | MAX-815 | |
| Provette da 50 ml | Corning | 430290 | |
| Formalina tamponata neutra al 10% | StatLab Medical Products | 28600-5 | |
| Contenitori in formalina | Fisher Scientific | 23-032-059 | |
| Soluzione ottimale per la temperatura di taglio (OCT) | Sakura Finetek | 4583 | |
| Tissue-Tek Cryomold | Sakura Finetek | 4557 | |
| Dnase I | Roche | 10104159001 | |
| Collagenase I | Roche | 11088793001 | |
| 70μ filtri cellulari m | BD Bioscience | 352350 | |
| piastre a fondo rotondo a 96 pozzetti | Corning | 3799 | |
| Soluzione di colorazione viva/morta | Life Technologies | L34957 |
Riferimenti
- Lorsch, J. R., Collins, F. S., Lippincott-Schwartz, J. Cell Biology. Fixing problems with cell lines. Science. 346, 1452-1453 (2014).
- van der Worp, H. B., et al. Can animal models of disease reliably inform human studies. , PLoS Med. 7, e1000245 (2010).
- McCabe, P. M., et al.
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Ristampe e permessi
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