번역 상 암 연구를위한 인체 조직에 대한 작업
Summary
Translational cancer research is dependent on extraction of human tissues. Much work has gone into optimizing extraction methods for ex vivo analysis. Here, we describe tissue processing methods allowing for maximal data output from limited samples.
Abstract
Medical research for human benefit is greatly impeded by the necessity for human tissues and subjects. However, upon obtaining consent for human specimens, precious samples must be handled with the greatest care in order to ensure integrity of organs, tissues, and cells to the highest degree. Unfortunately, tissue processing by definition requires extraction of tissues from the host, a change which can cause great cellular stress and have major repercussions on subsequent analyses. These stresses could result in the specimen being no longer representative of the site from which it was retrieved. Therefore, a strict protocol must be adhered to while processing these specimens to ensure representativeness. The desired assay(s) must also be taken into consideration in order to ensure that an optimal technique is used for sample processing. Outlined here is a protocol for tissue retrieval, processing and various analyses which may be performed on processed tissue in order to maximize downstream production from limited tissue samples.
Introduction
의학 연구는 인간 세포주 및 동물 모델 모두 연구 막대한 이득이다. 세포주 나은 시스템의 구성 요소의 제어뿐만 아니라, 적절한 유기체의 세포의 사용을 허용한다. 세포주는 응답 (1)에 영향을 미칠 수있는 다른 세포, 기질 구성 요소 및 기관의 영향을 요점을 되풀이하지 않을 수 있기 때문에, 더 대표하면서, 건강과 질병에 대한 책임을 질 수 있습니다 메커니즘을 획기적으로 단순화 된 스냅 샷을 제공, 인간 세포에 대한 작업. 반면에, 동물 모델은 인간의 질병 및 유전 적 이질성 재생 전적으로 정확하지 않지만, 대부분의 모델 동물 2,3-에서 전체 시스템의 입력을 허용함으로써 추가 통찰력을 제공.
단점은 제쳐 놓고, 두 방법은 자신의 장점을 가지고 상호 보완 적이다. 그러나, 주요 목표는 전신, 멀티 기관 시스템에서 인간의 세포와 기관, 연구 남아있다. 따라서, 중개 연구는 탁을 가지고더 나은 메커니즘을 기저 질환을 파악하기 위해, 인간의 기관 및 환자에서 추출한 조직의 연구를 촉진 장족의 발전 갖추고 있습니다. 중개 연구함으로써, 몸 전체에서 적절한 세포에서 치료 및 질환의 연구 결과와 동물 세포 일 (4) 사이 모두의 장점을 제공하는 이점을 제공한다.
중개 연구는 결함없이도 없습니다. 인간의 환자에서 수확 표본, 호스트로부터 제거시 즉시 허혈하고 그렇지 않으면 보호 될 수있는 다른 외부 요인을 실시한다. 이 스트레스 유발 분자 유전 학적 변화가 발생하고, 이후의 연구에서 편견의 원인이 될 수 있습니다. 따라서, 많은 노력이 가장 하류 연구 5 장기 및 세포의 무결성을 유지하기 위해 엄격한 방법으로 조직을 추출하고 처리에 투입되었다. 방법 (을)를 선택했을 때 중요한 것은, 미래의 응용 프로그램은 밀접하게 고려되어야한다F 특정 방법은 세포 성분에 유해 할 수 있으므로, 인간의 샘플을 처리하고 다른 사람을 살려주는 동안 신호 전달 경로.
인체 조직을 포함하는 모든 연구, 규제 문제를 해결해야합니다. 터스 키기과 벨몬트 보고서 이후, 생물 의학 연구는 고유의 위험은 종종 피할 수없는 윤리적 딜레마 (6)의 결과와 관련되었다는 사실의 성장 수용이 있었다. 국가 표준의 필요성을 인식하고, 연방 정부는 벨몬트 보고서의 원칙을 유지 (명, 선행, 정의에 대한 존중)하는 수단으로 임상 시험 심사 보드 (IRBs를) 만들었습니다.
모든 기관의 IRB는 연구 참가자를 보호 할 책임이 있습니다 의사, 연구자 및 지역 사회 구성원의위원회이다. 그것은 자발적 동의는 생물 의학 연구의 모든 연구 참가자를 얻을 수 있어야하고,이 동의는 동의 FO에 설명하는 것이 RM. 동의서 프로세스 정보 결정은 연구에 등록 또는 가입 상태를 유지할지 여부에 제조 될 수 있도록 참가자에게 적절한 정보를 제공하는 것을 목적으로한다. 이와 관련, 동의서 문서는 좋은 가독성이 있어야 쉽게 표적 집단에 의해 (6 일 ~ 8 학년 읽기 수준) 이해 될 수있다 언어로 작성되어야한다. 강압 또는 부당한 영향의 가능성을 최소화 할 수 있어야하고, 피사체가 참여를 고려할 충분한 시간이 주어져야한다. 참가자는 처벌하지 않고 연구의 과정에서 모든 단계에서 동의를 철회 할 수있는 권리를 행사할 수 있어야합니다. 자발적인 동의서는 연구 주체의 참여를위한 필수 전제 조건이며 또한 7 법적으로 유효하다.
인간의 보호를위한 규정에 따라 과목 21 CFR 50.25 (/45cfr46.html">http://www.hhs.gov/ohrp/humansubjects/guidance/45cfr46.html 8), 연구 참가자는 연구의 목적을 통보해야하며, 연구에 참여 절차 참여에 대한 대안, 사회에 대한 가능성이 개인에게 연구의 모든 예측 가능한 위험과 불편 (뿐만 아니라 신체적 상해뿐만 아니라 수, 심리적, 사회적, 경제적 피해, 불편 함, 또는 불편 포함), 혜택, 피사체가 참여 할 것으로 예상되는 시간의 길이, 사람은 참여가 자발적임을 나타내는 문, 질문에 대한 또는 연구 관련 부상이나 응급 상황에 대한 답을 문의하고 참여하는 것을 거부는 정기적으로 임상 치료에 타협으로 어떤 결과 또는 혜택을 상실하지 않습니다 참가자가 다른 권리가 있음을 기밀성과에서 철수하는 오른쪽에있는 피사체의 권리에 관한 마지막으로 문을 그 / 그녀의 진단의 결과로 수신하고어떤 결과없이 언제든지 연구. 연구의 과정에서 동의를 철회 참가자의 조직 표본 뱅크해서는 안 즉시 소진해야합니다. 동의서의 하나 또는 그 이상의 요소의 면제는 실질적으로 필요한 요소 또는 필수 요소가 적용되지 않습니다 연구에 대한 변경없이 할 수없는 몇 가지 연구 프로젝트에 대한 IRB에서 얻을 수있다. 큰 관심은 데이터의 기밀성을 보장하기 위해주의해야합니다. 건강 보험 양도 및 책임에 관한 법률 (HIPAA)을 사용하거나 참가자의 서면 동의없이 "보호 된 건강 정보"(PHI)를 공개 방지 연방법입니다. PHI 포함하지만 의료 정보 전송되거나 유지 어떠한 형태 또는 매체와 9 개인을 식별하는 데 사용될 수있는 필드들에 한정되지 않는다.
이 작품을 통해 우리는 tissu 과정에서 지켜야하는 프로토콜을 간략하게 설명하는 것을 목표로전자 처리 – 조달을 포함하고, 저장하고 조직 추출시에받는 응력으로 인해 발생할 수 편향을 최소화하기 위하여 이러한 엄격한 가이드 라인을 다음의 중요성을 강조한다. 독자가 무엇을 분석 (들)에 가장 적합한 자신의 요구에 자격을 갖춘 판단을 할 수 있도록 우리는 또한 다운 스트림 분석 또는 표본에 대해 수행 할 수있는 분석 (그림 1)에 대한 간략한 개요를 제공하기 위해 노력하고 있습니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
궁극적으로, 처리의 방법은 원하는 가설에 의해 결정 (그림 1)을 수행 할 기술적 분석을 예상해야합니다. 다음 섹션에서는 조직 섹션에서 수행 할 수있는 잠재적 인 분석을 설명하는 개요 역할을한다. 그것은 결코 완전한 개요를 의미하지만, 기술을 설명하고 자신의 강점과 약점을 나열하여 가이드 샘플 처리 방법 및 다운 스트림 분석의 선택에 도움을주기위한 것입니다으로하지 않?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 존 G. 마리 스텔라 케네디 기념 재단 (보조금 # 0727033)과 흑색 종 연구 얼라이언스의 자선 기부금에 의해 지원되었다. 저자는 박사 이그나시오 Wistuba 박사 빅터 Prieto의 MD 앤더슨 암 센터의 부서뿐만 아니라, 조직 분포 및 수집을 조정 및 중개 연구를 용이하게하기 위해 텍사스 MD 앤더슨 암 센터 기관 조직 은행 (ITB)의 대학 감사드립니다 병리학 및 흑색 종 달 총 프로그램. 마지막으로, 저자는 흑색 종에 의해 영향을받는 모든 환자와 가족을 인정하고 싶습니다.
Materials
| Needles | BD | 305167 | |
| Stainless steel disposable scalpels | Miltex | 4-410 | |
| Tissue culture dish | Corning | 353003 | |
| Biopsy Cassettes | Thermo Fisher | 58931 | |
| RNA-stabilizing solution | Ambion | AM7021 | |
| 1.5ml Eppendorf tubes | Phenix | MAX-815 | |
| 50ml tubes | Corning | 430290 | |
| 10% Neutral Buffered Formalin | StatLab Medical Products | 28600-5 | |
| Formalin Containers | Fisher Scientific | 23-032-059 | |
| Optimal cutting temperature solution (OCT) | Sakura Finetek | 4583 | |
| Tissue-Tek Cryomold | Sakura Finetek | 4557 | |
| Dnase I | Roche | 10104159001 | |
| Collagenase I | Roche | 11088793001 | |
| 70μm cell strainers | BD Bioscience | 352350 | |
| 96 well round bottom plates | Corning | 3799 | |
| Live/Dead stain solution | Life Technologies | L34957 |
Riferimenti
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