L'effetto dei geni e dell'ambiente sullo spazio sociale di Drosophila melanogaster può essere quantificato attraverso un potente ma diretto paradigma analitico. Mostriamo qui diversi fattori che possono influenzare questo spazio sociale, e quindi devono essere presi in considerazione quando si progettano esperimenti in questo paradigma.
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Articolo metodologico
Condizioni che influiscono spazio sociale in
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il test spazio sociale qui descritto può essere utilizzato per quantificare le interazioni sociali di Drosophila melanogaste r - o di altri piccoli insetti - in modo semplice. Come abbiamo precedentemente dimostrato 1, in una camera a due dimensioni, abbiamo prima forza linea per formare un gruppo compatto, successivamente consentendo loro di loro distanza preferito l'uno dall'altro. Dopo che le mosche si sono stabiliti, si misura la distanza dal vicino più prossimo (o spazio sociale), l'elaborazione di un quadro statico con il software online gratuito (ImageJ). L'analisi della distanza del vicino più prossimo permette ai ricercatori di determinare gli effetti di fattori genetici e ambientali sulla interazione sociale, mentre il controllo di potenziali fattori di confondimento. Diversi fattori quali la capacità di arrampicata, l'ora del giorno, il sesso, e il numero di mosche, possono modificare la spaziatura sociale di mosche. Ci proponiamo quindi una serie di controlli sperimentali per mitigare questi effetti confondenti. Questo test puòessere utilizzato per almeno due scopi. In primo luogo, i ricercatori possono determinare in che modo il loro turno ambientale preferito (come l'isolamento, la temperatura, lo stress o tossine) avrà un impatto sociale, spaziatura 1,2. In secondo luogo, i ricercatori possono sezionare le basi genetiche e neurali di questa forma di base del comportamento sociale 1,3. In particolare, abbiamo usato come uno strumento diagnostico per studiare il ruolo dei geni ortologhi si ritiene siano coinvolti nel comportamento sociale in altri organismi, come i geni candidati per l'autismo negli esseri umani 4.
Introduzione
Le interazioni sociali sono fondamentali per il corretto sviluppo e la salute degli individui all'interno di un gruppo nel suo insieme, e possono essere osservati tra le numerose specie, dagli esseri umani (Homo sapiens) a organismi più semplici come i moscerini della frutta (Drosophila melanogaster) 5,6. Un individuo moscerino della frutta o di condivisione umana mezzi comuni per elaborare le informazioni sensoriali durante queste interazioni, che si tratti di: uditiva, visiva, olfattiva, tattile o gustation. Noi e gli altri ipotizzare che ci sia un neurocircuitry potenzialmente condivisa sottostante risposte comportamentali alle int....
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Protocollo
1. Attrezzature e reagenti creato in casa (vedi elenco dei materiali per gli Altri)
- Preparare un apparato di anestesia fredda Drosophila come descritto in precedenza 8.
- Preparare un aspiratore mosca come descritto in precedenza 13.
- Preparare camere spazio sociale e titolari.
- Ordinare o fare lastre di vetro e distanziali acrilico per creare le camere di spazio sociale. Ogni camera di spazio sociale è costituito da due lastre di vetro quadrati (17,6 cm per 17,6 cm, con uno spessore di 0,3 cm), due giusti distanziali triangolo acrilico (con un'altezza di 16,5 cm, una base di 8,9 cm, con uno spess....
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Risultati
La camera di spazio sociale può essere utilizzato come strumento per quantificare il comportamento sociale di Drosophila melanogaster. Distanziatori acrilico e vetri sono ritagliati insieme per formare un'arena triangolare interno che fornisce una superficie a due dimensioni in cui vola può formare gruppi stabili senza la presenza di molti spunti potenzialmente confondenti. Quando le mosche sono trasferiti per l'arena verticale, vengono sorpresi da essere sfruttato in giù, e rispondono con un comportame.......
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Discussione
In questo protocollo, una procedura dettagliata per la quantificazione dello spazio sociale è stato descritto. Alcuni passi cruciali per garantire l'esperimento è successo sono: 1) usare sempre i guanti durante la pulizia e messa in opera dell'apparecchiatura, per mantenere i propri oli e profumi fuori dalla camera interna dell'apparato, 2) garantire le mosche sono raccolti almeno un giorno prima l'esperimento per ridurre gli effetti potenziali di anestesia freddo, 3) 2 ore prima dell'esperimento for.......
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Dichiarazioni
Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari concorrenti.
Ringraziamenti
Gli autori desiderano ringraziare il Dr. Tadmiri Venkatesh per il suo incoraggiamento a preparare questo manoscritto, Dova Brenman e Selwyn Chui per i loro commenti costruttivi, Elyssa Burg e Wayne Rasband per aver progettato la macro in ImageJ per tutte le distanze di interfly e per le distanze più vicine. Gli autori desiderano inoltre ringraziare i revisori per i loro commenti costruttivi.
A.A.A, M.C.C. e A.F.S erano responsabili della progettazione della ricerca; S.N.J., A.A.A., M.N., Z.R. e A.J.M. hanno eseguito gli esperimenti. A.A.A, M.N., A.J.M. e M.C.C e A.F.S. hanno analizzato i dati; A.R.M. e A.F.S. hanno scritto il manoscritto.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Microscopio zoom stereoscopico | Nikon | SMZ-645 | Qualsiasi altro cannocchiale standard per la manipolazione delle mosche funzionerebbe |
| Piccoli pennelli | per spingere le mosche | ||
| Jazz-mix | Fisher | 33545 | qualsiasi altro cibo standard per drosophila funzionerebbe |
| Mini-Alarm Timer/Cronometro | |||
| Penne | |||
| Nastro | |||
| Clip per raccoglitori di medie dimensioni | Punti metallici | per tenere insieme le camere: clip medie da 1-1/4" (32 mm) con capacità di 5/8" | |
| piccoli SupportStands | Carolina | 707161 | per tenere le camere in orientamento verticale |
| Morsetti Buret | Carolina | 707362 | |
| Fotocamera digitale | Nikon | Coolpix S8000 | per scattare le foto fisse |
| Piccolo righello | per poter ridimensionare il | ||
| pannello a tre ante e la copertura | per fornire uno sfondo bianco e una luce omogenea. | ||
| martellante | Qualsiasi tappetino per mouse funziona. | ||
| Prisma 6 | GraphPad Software Inc. | Prism 6 per Mac OS X | Qualsiasi software di analisi statistica con t-test, unidirezionale e due ANOVA funzionerebbe |
Riferimenti
- Simon, A. F., et al. A simple assay to study social behavior in Drosophila.: measurement of social space within a group. Genes Brain Behav. 11, 243-252 (2012).
- Kaur, K., Simon, A. F., Chauhan, V., Chauhan, A.
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Ristampe e permessi
