Cortex, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus-, laterale del setto Nucleus- e Striatum specifici<em&gt; In Utero</em&gt; Elettroporazione in C57BL / 6 del mouse

Jan Baumgart; Nadine Baumgart

doi:10.3791/53303

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Articolo metodologico

Cortex, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus-, laterale del setto Nucleus- e Striatum specifici

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DOI:

10.3791/53303

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18 gennaio 2016

Jan Baumgart¹ , Nadine Baumgart¹

¹TARC (Translational Animal Research Center), University Medical Center, JGU Mainz

In questo articolo

Sommario

Questo protocollo descrive in dettaglio come trasfettare in modo specifico diverse regioni del sistema nervoso centrale C57BL/6 tramite elettroporazione in utero. Incluso in questo protocollo ci sono istruzioni dettagliate per le trasfezioni delle regioni che si sviluppano nella corteccia, nell'ippocampo, nel talamo, nell'ipotalamo, nel nucleo del setto laterale e nello striato.

Abstract

L'elettroporazione in utero è una tecnica ampiamente utilizzata per la manipolazione spazio-temporale rapida ed efficiente di vari geni nel sistema nervoso centrale dei roditori. La sovraespressione dei geni desiderati è possibile tanto quanto gli studi sulla perdita di funzione mediata da shRNA. Pertanto offre un'ampia gamma di applicazioni. La possibilità di indirizzare particolari cellule in un'area distinta aumenta ulteriormente la gamma di potenziali applicazioni di questo metodo molto utile. Per indirizzare in modo efficiente regioni specifiche, è indispensabile conoscere le sottigliezze, come lo stadio embrionale, la tensione da applicare e, soprattutto, la posizione degli elettrodi.

Qui, forniamo un protocollo dettagliato che consente l'elettroporazione in utero specifica ed efficiente di diverse regioni del sistema nervoso centrale del topo C57BL/6. In particolare viene mostrato come trasfettare le regioni che si sviluppano nella corteccia retrospleniale, nella corteccia motoria, nella corteccia somatosensoriale, nella corteccia piriforme, nel cornu ammonis 1-3, nel giro dentato, nello striato, nel nucleo del setto laterale, nel talamo e nell'ipotalamo. Per queste informazioni sullo stadio embrionale appropriato, viene fornita la tensione appropriata per lo stadio embrionale corrispondente. Soprattutto è raffigurata una mappa angolare, che indica la posizione appropriata del polo positivo. Questo protocollo standardizzato aiuta a facilitare un'efficiente elettroporazione in utero, che potrebbe anche portare a una riduzione del numero di animali.

Introduzione

Dalla prima descrizione nel 2001 da tre gruppi indipendenti ^1-3 i n utero elettroporazione è diventato uno strumento standard ampiamente utilizzato per analizzare l'espressione genica nel sistema nervoso centrale dei roditori. Rispetto alla generazione di topi knockout, che è, nonostante le tecniche di continuo miglioramento, ancora di tempo e denaro che consumano, i ricorsi in utero elettroporazione a causa della sua semplicità. Così, in utero elettroporazione consente GAIN- veloce ed efficiente e la perdita di funzione studi ^4.

Per trasfettare le regioni cerebrali, l....