Nanoscaled sea-island surfaces composed of thermoresponsive block copolymers were fabricated by the Langmuir-Schaefer method for controlling spontaneous cell adhesion and detachment. Both the preparation of the surface and the adhesion and detachment of cells on the surface were visualized.
Thermoresponsive poly(N-isopropylacrylamide) (PIPAAm)-immobilized surfaces for controlling cell adhesion and detachment were fabricated by the Langmuir-Schaefer method. Amphiphilic block copolymers composed of polystyrene and PIPAAm (St-IPAAms) were synthesized by reversible addition-fragmentation chain transfer (RAFT) radical polymerization. A chloroform solution of St-IPAAm molecules was gently dropped into a Langmuir-trough apparatus, and both barriers of the apparatus were moved horizontally to compress the film to regulate its density. Then, the St-IPAAm Langmuir film was horizontally transferred onto a hydrophobically modified glass substrate by a surface-fixed device. Atomic force microscopy images clearly revealed nanoscale sea-island structures on the surface. The strength, rate, and quality of cell adhesion and detachment on the prepared surface were modulated by changes in temperature across the lower critical solution temperature range of PIPAAm molecules. In addition, a two-dimensional cell structure (cell sheet) was successfully recovered on the optimized surfaces. These unique PIPAAm surfaces may be useful for controlling the strength of cell adhesion and detachment.
Nanostrukturerade ytor har nyligen rönt stor uppmärksamhet på grund av deras olika potentiella tillämpningar, inklusive mönstring, cellodling, rengöring och yta växling. Till exempel, superhydrofoba ytor inspirerade av nanostruktur av lotusblad och andra mottagliga ytor kan reagera på yttre stimuli 1-4.
Langmuir filmen är en av de mest studerade polymerbeläggningar. En Langmuir film bildas genom att släppa amfifila molekyler på en luft-vatten gränsytan 5-8. Filmen kan sedan överföras till en fast yta genom fysisk eller kemisk adsorption, och molekylkonforma på en fast yta kan styras med hjälp av vertikala och horisontella överföringsmetoder 9-12. Densiteten för den Langmuir filmen kan regleras exakt genom att komprimera luft-vattengränsytan. Nyligen har metoden också visat sig effektiv för tillverkning nanoscaled havsö-structures genom att utnyttja amfifila segmentsampolymerer. De nanostrukturer är antas bestå av en kärna av hydrofoba segment och ett skal av hydrofila segment 13-17. Dessutom är antalet av nanostrukturer på en yta regleras genom att styra området per molekyl (A m) av segmentsampolymeren vid gränsytan.
Vi har fokuserat på ett original, unikt byggnadsställning fria tissue engineering strategi, cell ark teknik, med hjälp av en temperaturberoende odlingsytan. Den utvecklade tekniken har tillämpats på regenerativa terapier för olika organ 18. Ett temperatursvarande odlingsytan tillverkades genom att ympa poly (N -isopropylacrylamide) (PIPAAm), en temperaturkänslig molekyl, på en yta från 19 till 27. PIPAAm och dess sampolymerer uppvisar en lägre kritiska lösningstemperaturen (LCST) i vattenhaltiga medier vid temperaturer nära 32 ° C. Odlingsytan uppvisade också en temperaturkänslig Alternati på mellan hydrofobicitet och hydrofilicitet. Vid 37 ° C, den PIPAAm-ympade ytan blev hydrofob, och cellerna lätt fästas och prolifererade på ytan såväl som på konventionellt vävnadsodlings polystyren. När temperaturen sänktes till 20 ° C, ytan blev hydrofil, och cellerna spontant lossnar från ytan. Därför kunde odlade konfluenta celler på ytan skördas som en intakt ark genom att ändra temperaturen. Dessa cellvidhäftnings och lösgör egenskaper också visas av en yta tillverkas genom Langmuir filmbeläggning för laboratorie demonstration 26, 27. En Langmuir film av segmentsampolymerer bestående av polystyren (P (St)) och PIPAAm (St-IPAAm) tillverkades. Langmuir-film med en specifik A m skulle kunna horisontellt överföras till en hydrofobt modifierad glassubstratet. Dessutom har celladhesion på och borttagning från den behandlade ytan som svar på temperatur utvärderas.
_content "> Här beskriver vi protokoll för tillverkning av en nanostrukturerad Langmuir-film sammansatt av värmekänslig amfifila blocksampolymerer på ett glassubstrat. Vår metod kan ge en effektiv tillverkningstekniken för organiska nanofilms inom olika områden av ytan vetenskap och kan underlätta mer effektiv kontroll av celladhesion på och spontant lossnar från en yta.Ett temperatursvarande yta framställdes genom Langmuir-Schaefer-metoden och ytegenskaperna för celladhesion / lösgörande och cellarket återhämtning optimerades. Vid användning av denna metod för tillverkning av ytor, flera steg är kritiska. Den molekylära sammansättningen av St-IPAAm molekyler har en stor effekt på ytstrukturen och stabiliteten av ytan, och i förlängningen på celladhesion och avskildhet. Framför allt bör de St-IPAAm molekylerna har en snäv molekylviktsfördelning. I vår metod har två…
The authors have nothing to disclose.
This study was financially supported by the Creation of Innovation Centers for Advanced Interdisciplinary Research Program’s Project for Developing Innovation Systems “Cell Sheet Tissue Engineering Center (CSTEC)” of the Ministry of Education, Culture, Sports, Science and Technology (MEXT), Japan.
N-isopropylacrylamide | Kohjin | No catalog number | |
Azobis(4-cyanovaleric acid) | Wako Pure Chemicals | 016-19332 | |
Styrene | Sigma-Aldrich | S4972 | |
1,3,5-trioxane | Sigma-Aldrich | T81108 | |
1,4-Dioxane | Wako Pure Chemicals | 045-24491 | |
DMEM | Sigma | D6429 | |
PBS | Nakarai | 11482-15 | |
Streptomycin | GIBCO BRL | 15140-163 | |
Penicillin | GIBCO BRL | 15140-122 | |
Trypsin-EDTA | Sigma | T4174 | |
FBS | Japan Bioserum | JBS-11501 | |
BAECs | Health Science Reserch Resources Bank | JCRB0099 | |
Cover Glasses | Matsunami Glass Industry | C024501 | |
AFM NanoScope V | Veeco | ||
1H NMR INOVA 400 | Varian, Palo Alto | ||
ATR/FT-IR NICOLET 6700 | Thermo Scientific | ||
GPC HLC-8320GPC | Tosoh | ||
TSKgel Super AW2500, AW3000, AW4000 | Tosoh | ||
Langmuir-Blodgett Deposition Troughs | KSV Instruments | KN 2002 | KSV NIWA Midium trough |
Nikon ECLIPSE TE2000-U | Nikon |