Ткань Характеристика после нового метода Дезагрегирование для кожи Micro-трансплантатов поколения
Summary
Протокол описывает новый метод дезагрегации тканей человека и создать аутологичных микро-трансплантаты, которые, в сочетании с коллагеном губок, порождающие человека био-комплексов, готовых к использованию в лечении поражений кожи. Кроме того, эта система сохраняет жизнеспособность клеток микро-трансплантатов в разное время после механической дезагрегации.
Abstract
Несколько новых методов были разработаны в области биотехнологии для получения аутологичных клеточных суспензий во время операции, с тем чтобы обеспечить еще один этап лечения острых и хронических кожных поражений. Кроме того, управление хронических, но и острых ран в результате травмы, диабета, инфекций и других причин, остается сложной. В этом исследовании мы описываем новый метод для создания аутологичных микро-трансплантаты из кожной ткани одного пациента и их клинического применения. Кроме того, в пробирке биологическая характеристика кожной ткани , полученной из кожи, де-epidermized дермы (DED) и дермы полиорганной и / или доноров нескольких тканей также была проведена. Все ткани были разбиты по этим новым протоколом, что позволяет нам получить жизнеспособные микро-трансплантатов. В частности, мы сообщали, что этот инновационный протокол способен создать био-комплексы, составленные аутологичных микро-трансплантатов и коллагеновых губок, готовых наносить на кожных поражений. Клиникал применение аутологичных биологических комплексов на поражения ног также сообщалось, показывая улучшение как процесса повторного epitalization и мягкости поражения. Кроме того, наша модель в пробирке показали , что жизнеспособность клеток после механического разукрупнения с этой системой поддерживается в течение долгого времени до семи (7) дней культуры. Мы также наблюдали, с помощью проточной цитометрии, что пул клеток, полученных из дезагрегации состоит из нескольких типов клеток, в том числе мезенхимальные стволовые клетки, которые оказывают ключевую роль в процессах регенерации и восстановления тканей, для их высокой регенеративного потенциала. Наконец, мы продемонстрировали в пробирке , что эта процедура сохраняет стерильность микро-трансплантатов при культивировании в чашки с агаром. Таким образом, мы приходим к выводу, что этот новый регенеративный подход может быть перспективным инструментом для врачей, чтобы получить в одну стадию жизнеспособного, стерильный и готов к использованию микро-трансплантаты, которые могут быть применены по отдельности или в сочетании с наиболее распространенным биологическим scaffoLDS.
Introduction
В последние годы несколько новых методов были разработаны в области биотехнологии для получения аутологичных клеточных суспензий во время операции, с тем чтобы обеспечить один шаг лечения острых и хронических кожных поражений. Кроме того, управление острыми, но в основном хронических ран в результате травмы, диабета, инфекций и других причин, остается сложной. Существует свидетельств того, что хронические раны стали серьезной глобальной проблемой здравоохранения, в результате чего огромное финансовое бремя на системы здравоохранения во всем мире 1.
Чтобы увеличить скорость успеха в лечении поражений кожи, отсутствие обширной манипуляции (в том числе сотовой усиления) и поддержание стерильных условий необходимы для того, чтобы создать клеточную суспензию, которую может быть выполнено немедленно на поврежденный участок пациентов, что позволит избежать более длительного обработки в чистых помещениях, таких как мобильные заводы. улицаarting из небольших биопсий кожи, шлифовка, центрифугирования и других методов разделения (например, ферментативным или механические), которые часто используются для получения суспензии клеток, которые могут быть выращены в среде для роста. Все эти методы обычно требуют длительного времени выполнения, подчеркивая клеточных структур, а также приводит к снижению жизнеспособности клеток. Другим важным аспектом является получение аутологичных клеточной суспензии готов к использованию клиницистами, например, для ремонта поврежденных участков. Кроме того, хорошо известно , что трансплантаты аутологичных ткани выживают процедуры передачи , чтобы в конечном итоге выжить в месте реципиента принципами индукции и проводимости 2, 3. Идеальная трансплантат ткани должны быть легко доступны и имеют низкую антигенность и доноров сайта заболеваемости 4.
На основании этих доказательств, первая цель данного исследования состояла в том, чтобы создать аутологичных био-комплексы, пригодные дляклиническое применение в восстановлении тканей. Для этой цели мы описываем новый метод для получения аутологичных микро-трансплантаты, начиная от кожных тканей, которые были с разбивкой по этому протоколу. Случай презентации также описано здесь в качестве клинического применения аутологичных микро-трансплантатов, полученных этим протоколом в сочетании с коллагеном губок. Такой подход уже сообщалось , чтобы быть эффективными в механической дезагрегации тканей человека 5 и он был использован в клинике для трансплантатов и регенерации тканей дермы 6,7, а также для регенеративной терапии соединительной ткани в полости рта челюстно – лицевой хирургии 8-10 ,
Кроме того, второй целью данного исследования было биологическая характеристика кожных тканей после того, как их дезагрегации по этому протоколу. С этой целью различные гомологичные образцы кожной ткани происходит от области ствола различных полиорганнойи / или доноры нескольких тканей были обработаны в соответствии с национальными правилами по заготовке, переработке и распределению тканей для трансплантации (НСТ 2013) на Эмилия-Романья Региональный Skin Bank.
История болезни:
A 35-летний пациентка показывает сложную травму из-за автомобильной аварии был принят в отделении интенсивной терапии больницы Анконы. Пациент показал инфекцию на ноге из-за открытой раны и сложный перелом, стабилизированный внешней фиксации. Два радикала санацию были выполнены и когда рана стала чистой после отрицательной Прессотерапия (VAC терапия) и надкостницы выглядели здоровыми, мы применили протокол по истечении двух месяцев с момента восстановления. После дезагрегации с этой системой, микро-трансплантаты, полученные были использованы для создания био-комплексы с коллагеновой губки, которые впоследствии были имплантированы для того, чтобы исследовать их эффективность по ремонту повреждений.
Protocol
Representative Results
Discussion
Это предварительное исследование показало , что микро-трансплантаты , полученные с помощью этого протокола можно комбинировать с коллагеновыми губками, как уже сообщалось в других клинических применениях, для оптимизации эффективности микро-трансплантаты имплантатов 9, 10. В час…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Авторы выражают благодарности доктору Федерика Zanzottera за вклад в исследования, выполняющего проточной цитометрии анализа.
Materials
| Rigenera Machine | Human Brain Wave | 79210R | |
| Rigeneracons | Human Brain Wave | 79450S | |
| MTT | Roche Diagnostic GmbH | 11465007001 | |
| RPMI medium | PBI International | 733-2292 | |
| DMEM medium | PBI International | F 0415 | |
| Antibiotics | Biological Industries PBI | 03-038-1 | |
| Antibodies for FACS Analysis | eBiosciences | code 12-1469 for CD146-P; code 17-0349 for CD34-APC | |
| Columbia agar | BioMerieux Company | 43041 | |
| Condress® | Abiogen Pharma | collagen sponge used for bio-complexes | |
| DMSO | Bioniche Pharma USA LLC, Lake Forest, IL | ||
| NaCl solution | Fresenius Kabi, Bad Homburg, Germany | ||
| Xylene | Carlo Erba |
Riferimenti
- Sen, C. K., et al. Human skin wounds: a major and snowballing threat to public health and the economy. Wound Repair Regen. 17, 763-771 (2009).
- Ellis, E., Sinn, D. Use of homologous bone grafts in maxillofacial surgery. J Oral Maxillofac Surg. 51, 1181-1193 (1993).
- Nguyen, A., Pasyk, K. A., Bouvier, T. N., Hassett, C. A., Argenta, L. C. Comparative study of survival of autologous adipose tissue taken and transplanted by different techniques. Plast Reconstr Sur. 85, 378-389 (1990).
- Abuzeni, P. Z., Alexander, R. W. Enhancement of Autologous Fat Transplantation With Platelet Rich Plasma. AJCS. 18 (2), 59-70 (2001).
- Trovato, L., et al. A New Medical Device Rigeneracons Allows to Obtain Viable Micro-Grafts from Mechanical Disaggregation of Human Tissues. J Cell Physiol. , (2015).
- Zanzottera, F., Lavezzari, E., Trovato, L., Icardi, A., Graziano, A. Adipose Derived Stem Cells and Growth Factors Applied on Hair Transplantation Follow-Up of Clinical Outcome. JCDSA. 4 (4), 268-274 (2014).
- Giaccone, M., Brunetti, M., Camandona, M., Trovato, L., Graziano, A. A New Medical Device, Based on Rigenera Protocol in the Management of Complex Wounds. J Stem Cells Res, Rev & Rep. 1 (3), 3 (2014).
- Aimetti, M., Ferrarotti, F., Cricenti, L., Mariani, G. M., Romano, F. Autologous dental pulp stem cells in periodontal regeneration: a case report. Int J Periodontics Restorative Dent. 34 (3), s27-s33 (2014).
- Graziano, A., Carinci, F., Scolaro, S., D’Aquino, R. Periodontal tissue generation using autologous dental ligament micro-grafts: case report with 6 months follow-up. AOMS. 1 (2), 20 (2013).
- Brunelli, G., Motroni, A., Graziano, A., D’Aquino, R., et al. Sinus lift tissue engineering using autologous pulp micro-grafts: A case report of bone density evaluation. J Indian Soc Periodontol. 17 (5), 644-647 (2013).
- Ellner, P. D., Stoessel, C. J., Drakeford, E., Vasi, F. A new culture medium for medical bacteriology. Am J Clin Pathol. 45, 502-504 (1966).
