Tissue Characterization efter en ny Disaggregation metod för Skin Micro-Grafts Generation

Summary

Protokollet beskriver en ny metod för att dela upp mänskliga vävnader och skapa autologa mikro transplantat som, i kombination med kollagen tvättsvamp, ger upphov till bio-komplex mänskliga redo att använda vid behandling av hudskador. Vidare bevarar detta system cellviabilitet mikro transplantat vid olika tidpunkter efter mekanisk uppdelning.

Abstract

Flera nya metoder har utvecklats inom bioteknik för att få autologa cellulära suspensioner under operation, för att ge ett steg behandlingar för akuta och kroniska hudskador. Dessutom förvaltningen av kroniska men också akuta sår till följd av trauma, diabetes, infektioner och andra orsaker, förblir utmanande. I denna studie beskriver vi en ny metod för att skapa autologa mikro transplantat från kutan vävnad av en patient och deras kliniska tillämpning. Dessutom in vitro biologisk karaktärisering av kutan vävnad som härrör från huden, de-epidermized dermis (Ded) och dermis av flera organ och / eller flera vävnadsdonatorer utfördes också. Alla vävnader uppdelat efter denna nya protokollet, vilket tillåter oss att få livskraftiga mikro transplantat. I synnerhet rapporterade vi att denna innovativa protokoll kan skapa bio-komplex som består av autologa mikro transplantat och kollagensvampar redo att appliceras på hudskador. den Clinical tillämpning av autologa biologiska komplex på ett ben skada rapporterades också, visar en förbättring av både åter epitalization process och mjukhet av skadan. Dessutom, vår in vitro-modell visade att cellviabiliteten efter mekanisk uppdelning med detta system bibehålls över tid för upp till sju (7) dagars odling. Vi observerade också, genom flödescytometrianalys, att poolen av celler erhållna från uppdelning består av flera celltyper, inklusive mesenkymala stamceller, som utövar en nyckelroll i processerna för vävnadsregenerering och reparation, för sin höga regenerativ potential. Slutligen är vi demonstreras in vitro att detta förfarande bibehåller steriliteten hos mikro transplantat när de odlas i agar rätter. Sammanfattningsvis, vi dra slutsatsen att den nya regenerativ metod kan vara ett lovande verktyg för kliniker för att få i ett steg livskraftig, steril och redo att använda mikro-transplantat som kan användas separat eller i kombination med de vanligaste biologiska scaffoLDS.

Introduction

Under de senaste åren har flera nya metoder utvecklats inom bioteknik för att få autologa cellulära suspensioner under operationen för att tillhandahålla ett steg behandlingar för akuta och kroniska hudskador. Dessutom behandling av akuta men främst kroniska sår till följd av trauma, diabetes, infektioner, och andra orsaker, förblir utmanande. Det finns bevis för att kroniska sår har blivit ett allvarligt globalt hälsoproblem, som orsakar en enorm ekonomisk börda för hälso- och sjukvårdssystemen i hela världen ^en.

För att öka graden av framgång vid behandling av hudskador, avsaknad av omfattande manipulation (inbegripet cell förbättring) och upprätthållande av sterila förhållanden är viktigt för att skapa en cellulär suspension som omedelbart kan tillämpas på det skadade området av patienter på så sätt undvika en längre behandling i renrum som cellfabriker. stArting från små hudbiopsier, slipning, centrifugering och andra separationsmetoder (t.ex. enzymatisk eller mekanisk), används ofta för att erhålla en cellulär suspension, som kan odlas i ett tillväxtmedium. Alla dessa metoder kräver i allmänhet en lång tid för utförande, betonar de cellstrukturer, och leder till en minskning av cellviabilitet. En annan viktig aspekt är att erhålla en autolog cellulär suspension redo att användas av läkare, till exempel för att reparera skadade områden. Dessutom är det väl etablerat att autologa vävnadstransplantat överleva överföringsförfaranden för att så småningom överleva i mottagarens sida av principerna om induktion och ledning ^{2, 3.} Bör Den ideala transplantatvävnad vara lätt tillgängliga och har låg antigenicitet och tagstället sjuklighet ^4.

På grundval av dessa bevis, det första målet med denna studie var att skapa autologa bio-komplex som är lämpliga förklinisk tillämpning i vävnadsreparation. För detta ändamål beskriver vi en ny metod för att få autologa mikro transplantat från och kutana vävnader som uppdelade efter detta protokoll. Ett fall presentation också häri beskrivas som en klinisk tillämpning av autologa mikro transplantat som erhålls genom detta protokoll i kombination med kollagensvampar. Detta tillvägagångssätt har redan rapporterats vara effektiv i den mekaniska uppdelning av mänskliga vävnader ⁵ och det har använts kliniskt för transplantat och regenerering av dermala vävnader ^6,7 samt regenerativa terapier av bindväv i oral-käkkirurgi ^8-10 .

Dessutom andra syftet med denna studie var den biologiska karakteriseringen av de kutana vävnader efter sin uppdelning av detta protokoll. För detta syfte, olika homologa prover av kutan vävnad härledd från stammen område med olika många organoch / eller flera vävnadsdonatorer bearbetades efter nationella regler om avverkning, bearbetning och distribution av vävnader för transplantation (CNT 2013) på Emilia Romagna regionala Skin Bank.

CASE PRESENTATION:

En 35-årig kvinnlig patient som visar en komplex trauma på grund av bilolycka medgavs till intensivvårdsavdelning Ancona sjukhus. Patienten visade en infektion i benet på grund av ett öppet sår och en sammansatt fraktur stabiliserad med extern fixering. Två radikal debridering utfördes och när såret blev ren efter undertryck terapi (VAC terapi) och benhinnan verkade frisk, tillämpade vi protokollet efter två månader från återhämtning. Efter uppdelning med detta system var mikro transplantat erhållna används för att skapa bio-komplex med en kollagensvamp som därefter implanterades i syfte att undersöka deras effekt på den skada reparation.

Protocol

Etik uttalande: eftersom den kliniska tillämpningen av protokollet kräver användning av kutan autolog vävnad hos patienten, dess karakterisering in vitro utfördes innan klinisk användning på homolog kutan vävnad vid Emilia Romagna regionala Skin Bank följer riktlinjerna av nationella bestämmelser om avverkning, bearbetning och distribuera vävnader för transplantation (CNT 2013). 1. Bio-komplex byggnad för klinisk tillämpning OBS: Detta protok…

Representative Results

I denna förstudie, det första målet var att undersöka förmågan hos humana autologa mikro transplantat i kombination med ett biologiskt stöd, såsom kollagen, för att producera bio-komplex redo att använda. Dessa bio-komplex implanterades i en patient med ett ben skada som orsakas av en bilolycka (figur 2A) och en fullständig återepitelisation i samband med vävnadsreparation efter 30 dagar (figur 2B) observe…

Discussion

Denna förstudie visade att mikro transplantat som erhålls genom detta protokoll kan kombineras med kollagen tvättsvamp, som redan rapporterats i andra kliniska tillämpningar, för att optimera effekten av mikro transplantat implantat ^{9, 10.} I synnerhet, rapporterade studien kapacitet bio -complexes, utgörs av mikro transplantat och kollagensvampar, till adjuvant sårläkningen av ett ben skada efter 30 dagar från klinisk tillämpning. Dessutom in vitro resultat ger bevis om effektiviteten av de…

Materials

Rigenera Machine	Human Brain Wave	79210R
Rigeneracons	Human Brain Wave	79450S
MTT	Roche Diagnostic GmbH	11465007001
RPMI medium	PBI International	733-2292
DMEM medium	PBI International	F 0415
Antibiotics	Biological Industries PBI	03-038-1
Antibodies for FACS Analysis	eBiosciences	code 12-1469 for CD146-P; code 17-0349  for CD34-APC
Columbia agar	BioMerieux Company	43041
Condress®	Abiogen Pharma		collagen sponge used for bio-complexes
DMSO	Bioniche Pharma USA LLC, Lake Forest, IL
NaCl solution	Fresenius Kabi, Bad Homburg, Germany
Xylene	Carlo Erba