쥐에서 동소 이식 간세포 암의 국소 치료에 대한 종양 살상 바이러스의 간동맥 관리

Summary

Oncolytic virotherapies are under development as novel therapeutics for the treatment of hepatocellular carcinoma (HCC). Here we describe a method for locoregional therapy of HCC via hepatic arterial administration of oncolytic virus.

Abstract

Hepatocellular carcinoma (HCC) is a disease with limited treatment options and poor prognosis. In recent years, oncolytic virotherapies have proven themselves to be potentially powerful tools to fight malignancy. Due to the unique dual blood supply in the liver, it is possible to apply therapies locally to orthotopic liver tumors, which are predominantly fed by arterial blood flow. We have previously demonstrated that hepatic arterial delivery of oncolytic viruses results in safe and efficient transduction efficiency of multifocal HCC lesions, resulting in significant prolongation of survival in immune competent rats. This procedure closely mimics the application of transarterial embolization in patients, which is the standard palliative care provided to many HCC patients. The ability to administer tumor therapies through the hepatic artery in rats allows for a highly sophisticated preclinical model for evaluating novel viral vectors under development. Here we describe the detailed protocol for microdissection of the hepatic artery for infusion of oncolytic virus vectors to treat orthotopic HCC.

Introduction

간세포 암 (HCC)은 전 세계적으로 다섯 번째 가장 일반적인 암, 그리고 중요한 건강 문제 ^1,2하고 암 관련 사망의 세 번째 주요 원인이다. 색전술 (TAE) 또는 화학 색전술 (TACE)을 포함하는 종양 절제술, 또는 그 기다리고 간 이식, 국소 치료를받을 수없는 환자의 표준 완화 의료 ^3,4으로 적용됩니다. 주변 간 간문맥 ^{5,6-로부터} 혈액 공급의 대부분을 수신하면서 이들 치료법은 종양 간 동맥 혈류가 거의 독점적으로 공급되고, 이에 의해 간에서 이중 혈액 공급의 고유 기능을 이용한다.

HCC에 대한 설립 치료의 매우 제한된 효능으로 인해 종양 살상 바이러스는 유망한 대체 치료제로 등장했다. JX-594는 최근 Pexa-VEC 이름을 변경하는 티미 딘 키나제 삭제 된 우두 벡터, 과립구-m로 무장이다HCC ^7의 II 상 임상 시험이 완료된 acrophage 콜로니 자극 인자 (GM-CSF). 최근 인간 인터페론 – 베타를 발현하는 재조합 수 포성 구내염 바이러스 벡터 (VSV)는 sorafenib-내화 HCC (NCT01628640)에 대한 상 임상 시험을 체결했다. 종양 살상 바이러스가 가까운 환자에서 간세포 암종에 대한 임상 응용 프로그램에 대한 승인을 얻기로 이동함에 따라, 효과적인 투여 경로에 대한 필요성은 다 초점 질병이 분명하다 목표로한다. 전신적 전달로 인해 비효율적 종양 전달에 크게 효과가 있지만, 애플리케이션은 종양 질환 진행에 민감 uninjectable 미세한 병변을 떠나는 주입 종양 치료의 효능을 제한 할 수있다.

우리는 소성을 HCC를 대상으로하는 국소 방식으로 콜리 틱 바이러스 치료를 관리하는 쥐의 간 동맥을 분리하는 방법을 설립했다. 우리는 증명이 안전하고 효과적인 광고에서이 투여 경로 결과면역 능력이 쥐 ^8-10에서 중요한 생존 연장의 결과로, 다 초점 HCC 결절의 전달을했습니다. 여기서는, 액세스 해부 및 쥐의 간동맥에 주입하는 방법을 설명한다. 절차의 방식은도 1에 도시된다 (이전 ^{9 공개)}

Protocol

주 : 다음 단계는 우리 기관의 지침과 바바리아, 독일의 지방 정부에 따라 수행되고있다. 지역 동물 관리 및 사용위원회에 의해 결정으로이 프로토콜을 재현하는 모든 시도는 동물의 인도적인 처리를위한 로컬 가이드 라인 준수에해야합니다. 예를 들어, 많은 기관은 멸균 장갑 설치류 수술 중 착용 할 것을 요구하고 있습니다. 또한, 바이러스와 작품은 개인과 환경 안전을위한주의하면서 현지 규?…

Representative Results

경험 (동맥 성공적 해부 주입 한 동물이 수술을 살아되었음을 의미 함)이 거의 100 % 성공률을 달성 할 수있다. 그러나, (기타 종양 부담 정도 기본적인 간 기능) 수술 전에 래트의 상태 분명 수술 개입의 결과에 중요한 역할을한다. 수술 후, 래트를 단독 버퍼해도 바이러스없이 주입하고, 일시적인 체중 감량과 간 효소의 약간의 일시적인 상승이 발생할 것으로 예상 ?…

Discussion

Although direct intratumoral injection is undoubtedly the simplest method to result in efficient tumor transduction of a single tumor nodule, hepatic arterial infusion represents an ideal administration route to target multifocal, orthotopic HCC. This method has proven to be both safe and effective for treating HCC in immune competent rats with oncolytic viruses. Furthermore, since HCC patients are routinely treated by transarterial application of chemoembolization, the method described here is readily translatable to …

Materials

Veterinary clippers	Aesculap	GT415	Small, cordless trimmer ideal for removing fur from surgical area
Stereomicroscope	Zeiss	Stemi SV6
30G Needles	Braun	4656300	30G x ½”
1ml syringes	Braun	9161406V	Tuberculin syringe
Disposable scalpel	Feather	2975#15	#15 blade
Standard surgical scissors	Fine Science Tools	14001-13	Sharp/blunt, for opening skin and muscle
Adson forcep	Fine Science Tools	1101-12	With teeth, for grasping skin and muscle
Alm retractor	Fine Science Tools	17008-07	With blunt teeth, for spreading abdominal cavity open during surgery
Gauze swabs	Lohmann & Rauscher	18504	7.5 x 7.5 cm, should be autoclaved prior to use
Cotton-tipped applicator swabs	Lohmann & Rauscher	11970	Sterile
Fine-tipped foreceps	Fine Science Tools	11063-07	0.4mm, angled tip, for dissecting hepatic artery
Vannas spring scissors	Fine Science Tools	91500-09	For delicate cutting
Micro-needle holder	Fine Science Tools	12076-12	For ligating gastroduodenal artery
Needle holder	Fine Science Tools	12005-15	Tungsten carbide jaws
7-0 Prolene sutures	Ethicon	8648H	Polypropylene suture with curved needle, for ligating gastroduodenal artery
4-0 Vicryl sutures	Ethicon	V3040H	With curved needle attached
Infrared warming lamp	Beurer	IL11	For maintaining body temperature post-operatively