Questo manoscritto descrive i protocolli per la prostata micro-dissezione e la castrazione chirurgica nel topo di laboratorio. Noi raffiguriamo anche risultati rappresentativi prodotti da questi protocolli. Infine, si discute i vantaggi e l'utilizzo di questi protocolli.
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Articolo metodologico
Murino della prostata Micro-dissezione e la castrazione chirurgica
In questo articolo
Sommario
Abstract
I modelli murini sono ampiamente utilizzati per studiare il cancro alla prostata e altre malattie. Il topo è un modello eccellente con cui studiare la prostata ed è stato utilizzato come surrogato per le scoperte nello sviluppo e nella malattia della prostata umana. La microdissezione prostatica consente uno studio coerente dell'anatomia, dell'istologia e delle caratteristiche cellulari della prostata specifiche del lobo in assenza di contaminazione di altri tessuti. Il testosterone influisce sullo sviluppo della prostata e sulla malattia. La terapia di deprivazione androgenica è un trattamento comune per i pazienti con cancro alla prostata, ma molti tumori della prostata diventano resistenti alla castrazione. La castrazione chirurgica di modelli murini consente lo studio della resistenza alla castrazione e di altri aspetti della biologia ormonale sulla prostata. Questa procedura può essere abbinata alla reintroduzione del testosterone o alla rigenerazione ormonale della prostata, un metodo potente per studiare le linee di cellule staminali nella prostata. Insieme, la microdissezione prostatica e la castrazione chirurgica aprono una moltitudine di opportunità per una ricerca solida e coerente sullo sviluppo e la malattia della prostata. Questo manoscritto descrive i protocolli per la micro-dissezione prostatica e la castrazione chirurgica nel topo da laboratorio.
Introduzione
La prostata è il sito più comune di cancro negli uomini negli Stati Uniti. Quasi 220.000 uomini ogni anno saranno con diagnosi di cancro alla prostata, e circa 27.000 uomini soccombere alla loro malattia 1. Gli uomini hanno un rischio 1 a 7 vita di una diagnosi di cancro alla prostata negli Stati Uniti 1. Iperplasia prostatica benigna (BPH), un noncancerous ingrandimento legata all'età della prostata, è anche una condizione molto diffusa, che colpisce oltre l'80% degli uomini oltre 80 2. In quanto tale, la prostata è al centro di molte ricerche.
Modelli di topo sono stati utilizzati ampiamente per ....
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Protocollo
Questo protocollo incontra e segue le linee guida stabilite dal Comitato Istituzionale cura degli animali e Usa Johns Hopkins University.
1. Micro-dissezione una prostata mouse
- Eutanasia il mouse per asfissia anidride carbonica o un metodo approvato alternativo in conformità con le linee guida per la cura degli animali e uso istituzionale.
- Pin il mouse nella posizione supina ad una tavola di dissezione mettendo un perno attraverso ciascuno dei quattro zampe.
- Spruzzare la addome con etanolo al 70%.
- Tenere la pelle del basso addome con una pinza, e usare le forbici per tagliare attraverso la pelle e peritoneo circa 1 cm ....
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Risultati
Tutti i sei lobi della prostata sono stati rimossi da un mouse via prostata micro-dissezione (Figura 1). Il tratto urogenitale completa (UGT) è composta da tutti i lobi della prostata, della vescica, vescicole seminali, e l'uretra (Figura 1A). I vasi deferenti attribuisce al uretra, ma non è necessaria per la prostata micro-dissezione, e possono quindi essere staccati prima della rimozione della UGT tagliando l'uretra (Figura 1b-1c).
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Discussione
Prostate micro-dissezione consente di sperimentazione specifici lobi e analisi della prostata mouse (Figura 1). Nei modelli di topo geneticamente, fenotipi possono essere visti in un lobo che non si vede in altri. Inoltre, per l'analisi istologica, questo protocollo assicura che la massima quantità di tessuto prostatico puro può essere sezionato e macchiato, senza altri tessuti del tratto urogenitale presenti nella sezione. Infine, per gli esperimenti a cella singola, questo protocollo permette per .......
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Dichiarazioni
Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari concorrenti.
Ringraziamenti
Alcune delle figure in questo manoscritto sono stati generosamente fornito dal laboratorio di Bart O. Williams. Gli autori sono supportati dal National Cancer Institute concede U54CA143803, CA163124, CA093900, CA143055 E.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Strumenti chirurgici | Roboz | Vari | |
| Formaldeide | Sigma | F8775 | |
| OCT medio | VWR | 25608-930 | Deve essere posto su ghiaccio secco per congelare e conservato a -80 ° C |
| PBS | Life Technologies | 10010 | |
| Isoflurano | Johns Hopkins | Disponibile anche presso i fornitori online | |
| Cautery Pen | Medline | ESCT002 | |
| Sutura in seta | AD Surgical | M-S330R19 | |
| Clip per ferite chirurgiche | Roboz | RS-9265 |
Riferimenti
- Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. Cancer statistics. CA Cancer J Clin. 65 (1), 5-29 (2015).
- Roehrborn, C. G. Pathology of benign prostatic hyperplasia. Int J Impot Res. 20 (suppl 3), 11-18 (2008).
- Valkenburg, K. C., Williams, B. O.
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Ristampe e permessi
