Gli aumenti legati all'età della rigidità del cristallino sono legati alla presbiopia. Questo protocollo descrive un metodo semplice ed economico per misurare la rigidità delle lenti del mouse. Le lenti dei topi, come quelle umane, diventano più rigide con l'età. Questo metodo è preciso e può essere adattato per lenti di animali più grandi.
È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Articolo metodologico
Sequenziale Applicazione di vetrini di vetro per valutare la compressione Rigidità della lente Mouse: Strain e morfometriche analisi
In questo articolo
Sommario
Abstract
La lente occhio è un organo trasparente che rifrange e si concentra la luce per formare una chiara immagine sulla retina. Negli esseri umani, contratto di muscoli ciliari deformare la lente, portando ad un aumento della potenza ottica della lente di concentrarsi su oggetti vicini, un processo noto come alloggio. Cambiamenti legati all'età in rigidità lente sono stati collegati a presbiopia, una riduzione nella lente 'possibilità di ospitare, e, per estensione, la necessità di occhiali da lettura. Anche se le lenti del mouse non ospitare o sviluppare presbiopia, modelli di mouse in grado di fornire uno strumento genetico prezioso per patologie lenti comprensione, e l'invecchiamento accelerato osservato nei topi permette lo studio dei cambiamenti legati all'età nella lente. Questo protocollo dimostra un metodo semplice, preciso e conveniente per determinare la rigidità della lente del mouse, utilizzando vetrini da applicare in sequenza crescente carichi di compressione sulla lente. Dati rappresentativi confermano che le lenti del mouse diventano più rigidi con l'età, comelenti umani. Questo metodo è altamente riproducibile e può potenzialmente essere scalata fino a meccanicamente le lenti di prova da animali più grandi.
Introduzione
Il cristallino è un organo trasparente e avascolare nella camera anteriore dell'occhio che è responsabile della focalizzazione fine della luce sulla retina. Una membrana basale trasparente, chiamata capsula del cristallino, circonda una massa di cellule fibrose allungate ricoperte da un monostrato anteriore di cellule epiteliali1,2. La crescita permanente del cristallino dipende dalla continua proliferazione e differenziazione delle cellule epiteliali all'equatore del cristallino in nuove cellule fibrose che vengono aggiunte alle precedenti generazioni di cellule fibrose in modo concentrico2. Nel tempo, le cellule delle fibre del cristallino subi....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Protocollo
Tutte le procedure sugli animali sono stati eseguiti in conformità con le raccomandazioni della Guida per la cura e l'uso di animali da laboratorio dal National Institutes of Health e sotto un protocollo approvato dal Comitato Istituzionale cura e l'uso degli animali al The Scripps Research Institute.
1. Obiettivo dissezione
- Euthanize topi in base alle raccomandazioni del National Institutes of Health "Guida per la cura e l'uso di animali da laboratorio" e approvati utilizzano protocolli istituzione animali.
- Enucleate l'occhio da topo, utilizzando pinze curve. Premere il tessuto intorno l'occhio co....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Risultati
La rigidità e dimensioni di 2, 4 e 8 mesi di età lenti di topo sono stati misurati. I topi sono stati tutti gli animali wild-type su un puro C57BL6 ceppo sfondo ottenuto dal Fondo Allevamento TSRI degli animali, e ogni obiettivo è stato caricato con da 1 a 10 lamelle. I ceppi assiali ed equatoriali sono stati calcolati in funzione del carico applicato misurando assiale e diametri equatoriale della lente dopo l'aggiunta di ciascun vetrino, quindi normalizzare ogni variazione di diamet.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Discussione
Ci sono diverse considerazioni importanti quando si utilizza questo metodo per misurare la rigidità della lente. Innanzitutto, i coprioggetti sono applicati alla lente con un angolo leggermente obliqua (8 - 8,5 °) rispetto al fondo della camera (θ). Questo si applica una piccola componente del carico equatoriale piuttosto che assialmente. Tuttavia, questo carico equatoriale è considerata trascurabile, perché il peccato θ ≈ 0.1 19. Se questo metodo è adattato per lenti più grandi, l'angolo delle copriogget.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato supportato dal National Eye Institute Grant R01 EY017724 (VMF) e dal National Institute of Arthritis and Musculoskeletal and Skin Diseases Grant K99 AR066534 (DSG).
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Pinza dritta a punta fine | Fine Scientific Tools | 11252-40 | |
| Forbici per microdissezione, lama dritta | Fine Scientific Tools | 15000-00 | |
| Pinza curva | Fine Scientific Tools | 11272-40 | |
| Pinza da presa | Hammacher | HSC 702-93 | Piatto di |
| dissezione | Fisher Scientific | 12565154 | |
| Piastra di Petri da 60 mm | Fisher Scientific | 0875713A | |
| 1x soluzione salina tamponata con fosfato (PBS) | Life Technologies | 14190 | |
| Vetrini coprioggetti in vetro 18 x 18 mm | Fisher Scientific | 12-542A | |
| Camera di misura con fori per contenere le lenti | Su misura (vedi Figura 1 | ||
| )Specchio ad angolo retto | Edmund Optics | 45-591 | |
| Sorgente luminosa | Schott/Fostec | 8375 | |
| Microscopio da dissezione illuminato | Olympus | SZX-ILLD100 | Con fototubo SZ-PT |
| Fotocamera digitale | Nikon | Coolpix 990 |
Riferimenti
- Lovicu, F. J., Robinson, M. L. Development of the ocular lens. , Cambridge University Press. (2004).
- Piatigorsky, J. Lens differentiation in vertebrates. A review of cellular and molecular features. Differentiation. 19 (3), 134-153 (1981).
- Glasser, A.
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Ristampe e permessi
