Un metodo è descritto qui per la determinazione dell'associazione e della competizione inter-regno (batterica e fungina) per l'adesione ai monostrati di cellule HeLa infettate da virus. Questo protocollo può essere esteso a più combinazioni di procarioti, eucarioti e virus.
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Articolo metodologico
Determinazione del biofilm iniziazione su cellule infettate da virus da batteri e funghi
In questo articolo
Sommario
Abstract
Lo studio delle interazioni polimicrobiche attraverso i regni tassonomici che includono funghi, batteri e virus non sono stati precedentemente esaminati rispetto a come i membri virali del microbiome influenzano le successive interazioni microbo con queste cellule ospiti infettate da virus. La convivenza virus con batteri e funghi è principalmente presente sulle superfici mucose della cavità orale e genitale. le cellule delle mucose, in particolare quelli con infezioni virali latenti croniche o persistenti persistenti, potrebbero avere un impatto significativo sulla membri della microbiome attraverso l'alterazione del virus in numero e tipo di recettori espressi. Modifiche nell'architettura membrana della cellula ospite comporterebbe capacità alterato di successivi componenti della flora normale e patogeni opportunisti di avviare il primo passo nella formazione di biofilm, cioè, l'aderenza. Questo studio descrive un metodo per la quantificazione e esame visivo effetto di HSV sulla apertura di Biofilformazione m (aderenza) di S. aureus e C. albicans.
Introduzione
Il microbioma umano comprende diversi organismi da più regni tassonomici che condividono aree geografiche nel corpo. L'adesione alla superficie delle cellule è un primo passo essenziale nella formazione di biofilm, che è parte del processo microbiome colonizzazione. Incluso nel microbiome può essere virus che causano infezioni croniche e persistenti. L'infezione cronica a cellule da questi virus può causare un'alterazione putativo disponibilità del recettore. 1,2 Inoltre, l'ingresso delle cellule da patogeni intracellulari potrebbe anche influenzare la fluidità di membrana host / idrofobia che a loro volta possono alterare l'attac....
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Protocollo
1. HSV ceppi e Manipolazione
Nota: ricombinante non diffondere HSV-1 (KOS) gL86 e HSV-2 (KOS) 333gJ - con l'attività reporter di beta-galattosidasi utilizzati sono stati forniti da V. Twiari 36,37.
- Utilizzare virus da un singolo lotto e conservare a -80 ° C in un rapporto 1: 1 di mezzo di Dulbecco modificato Eagle (DMEM) con siero fetale bovino 20% (FBS) e latte scremato fino al momento dell'uso. Prima stoccaggio lot virale, determinare la concentrazione di virus o -nitrophenyl-β-D-galattopiranoside (ONPG) e 5-bromo-4-cloro-3-indolil-β-D-galattopiranoside (X-Gal) dosaggio.
- Determinare la vitalità vir....
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Risultati
Il livello di solidità dei dati ottenibili da sistema descritto in questa relazione è illustrata nella Figura 2 af 38. Attraverso l'utilizzo di questo sistema di modulazione di interazione stafilococco e funghi con le cellule infettate da virus e il loro effetto sulla reciproca aderenza può essere delineata. Questi tipi di studi richiedono esame microscopico dell'interazione come mostrato nelle figure 3 e 4, 38
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Discussione
Al momento non sono disponibili informazioni sulle interazioni complesse tra permanente ai membri semi-permanenti del microbiome host che attraversano più domini tassonomici, vale a dire, procarioti, eucarioti e virali. Perciò abbiamo sviluppato un nuovo sistema modello in vitro per lo studio del biofilm iniziazione da S. aureus e C. albicans on HSV-1 oppure HSV-2 infettato 229 cellule HeLa 38 (HeLa). Il sistema modello cellule HeLa presenta un vantaggio u.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Questo progetto è stato supportato dalla Midwestern University, dall'IL Office of Research and Sponsored Programs (ORSP) e dal Midwestern University College of Dental Medicine-Illinois (CDMI).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| C.albicans | |||
| BBL Sabouraud Destrosio | BD | 211584 | |
| Fungisel Agar | Dot Scientific | 7205A | |
| S.aureus | |||
| Mannitol Salt Agar | Troy Biologicals | 7143B | |
| Sangue di pecora agar | Troy Biologicals | 221239 | |
| Hela cells | |||
| 1x DMEM (Dubelcco's Modified Eagle Medium, con 4,5 g/L di glucosio e L-glutammina, senza piruvato di sodio | Corning | 10-017-CM | |
| Gentamicin 50 mg/ml | Sigma | 1397 | 50 µ g/ml concentrazione finale nel DMEM completo |
| Tripsina EDTA (0,05% tripsina, 0,53 M EDTA)Soluzione 1x | Corning | 25-052-CI | |
| Siero fetale bovino | Atlanta Biologicals | S11150 | 10% concentrazione finale nel DMEM |
| strong>Other medium and reagents | |||
| ONPG | Thermo Scientific | 34055 | |
| Ultra-Pure X gal | Invitrogen | 15520-018 | |
| 1x HBSS (Soluzione salina bilanciata di Hanks) | Corning | 20-021-CV | |
| 1x PBS | Dot Scientific | 30042-500 | |
| RIPA Lysis | Life Technologies | 89901 | |
| Staining | |||
| Methanol | Fisher Scientific | A433P-4 | |
| HSV 1& 2, specifico per gD | ViroStat | 196 | |
| DAPI | SIGMA | D8417-5MG | |
| Gram Crystal Violet | Troy Biologicals | 212527 | |
| Supplies | |||
| Petri dish 100 x 15 | Dot Scientific | 229693 | |
| Piastra di Petri 150 x 15 | Kord Valmark | 2902 | |
| Piastre a 96 pozzetti | Evergreen Scientific | 222-8030-01F | |
| Piastre a 24 pozzetti | Evergreen Scientific | 222-8044-01F | |
| Provette per coltura 100 x 13 | Thomas Scientific | 9187L61 | |
| Cerchi di copertura, 12 mm | Deckglaser | CB00120RA1 |
Riferimenti
- Palu, G., et al. Effects of herpes-simplex virus type-1 infection on the plasma-membrane and related functions of HeLa S3 cells. J Gen Virol. 75, 3337-3344 (1994).
- Vitiello, G., et al.
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Ristampe e permessi
