विलिस के माउस सर्किल के लिए अलग प्रोटोकॉल
Summary
We describe here a reproducible protocol for isolating the mouse circle of Willis.
Abstract
प्रमस्तिष्क धमनी वृत्त (Circulus धमनी प्रमस्तिष्क) या विलिस (गाय) का चक्र एक संचार ऑप्टिक chiasma और हाइपोथेलेमस कि मस्तिष्क और आसपास के ढांचे को रक्त की आपूर्ति आसपास के सम्मिलन है। यह मस्तिष्क amyloid वाहिकारुग्णता (सीएए) -associated vasculopathies, intracranial atherosclerosis और intracranial aneurysms सहित कई cerebrovascular विकारों में फंसाया गया है। उनकी रोकथाम के लिए दवा उपन्यास लक्ष्यों की पहचान के लिए इन रोगों अंतर्निहित आणविक तंत्र का अध्ययन पशु मॉडल की आवश्यकता है। इन मॉडलों में से कुछ, ट्रांसजेनिक हो सकता है, जबकि दूसरों Cerebro-वाहिका के अलगाव, यहाँ वर्णित विधि CoW.The किसी भी माउस वंश में गाय अलगाव के लिए उपयुक्त है और स्क्रीनिंग (जीन, प्रोटीन के उत्पादन की अभिव्यक्ति के लिए काफी क्षमता है सहित शामिल होगी, posttranslational प्रोटीन संशोधनों, secretome विश्लेषण, आदि) माउस cerebro- के बड़े जहाजों पर अध्ययनवाहिका। यह भी पूर्व vivo अध्ययन के लिए इस्तेमाल किया जा सकता अंग स्नान पृथक माउस घ्राण धमनियों लिए प्रणाली विकसित की आदत डाल द्वारा।
Introduction
प्रमस्तिष्क धमनी वृत्त (Circulus धमनी प्रमस्तिष्क), भी विलिस (गाय), Willisor विलिस बहुभुज के पाश के चक्र के रूप में जाना जाता है) ने 1664 में पहली बार थॉमस विलिस द्वारा वर्णित किया गया था यह एक संचार ऑप्टिक chiasma और हाइपोथेलेमस कर सकते हैं कि आसपास स्थित सम्मिलन है मस्तिष्क और आसपास के ढांचे को रक्त की आपूर्ति करने के लिए एक केंद्रीय हब के रूप में माना जाता है। रक्त आंतरिक मन्या और कशेरुका धमनियों के माध्यम से इस संरचना में प्रवेश करती है और यह आंतरिक मध्य और पीछे मस्तिष्क धमनियों के माध्यम से चक्र से बाहर बहती है। इन धमनियों के प्रत्येक चक्र के दोनों तरफ छोड़ दिया और शाखाओं का अधिकार है। आधारी, पोस्ट संप्रेषण, और (चित्रा 1 और चित्रा 2) पूर्वकाल पूरा धमनियों संवाद स्थापित वृत्त। बहिर्वाह धमनियों में से किसी में बिगड़ा रक्त के प्रवाह का खतरा, मन्या और मस्तिष्क धमनियों से चक्र में प्रवेश जिससे गारंटी है कि पर्याप्त रक्त बी करने के लिए आपूर्ति की है खून के विलय से कम से कम हैबारिश। इस संरचना भी आंतरिक मन्या धमनी के गंभीर ओक्लूसिव रोगों में जमानत के लिए रक्त के प्रवाह के लिए मुख्य मार्ग के रूप में कार्य करता है।
cerebrovascular विकारों के कई प्रकार गाय में अपने मूल है। सबसे आम मस्तिष्क amyloid वाहिकारुग्णता (सीएए) -associated vasculopathies, intracranial atherosclerosis और intracranial aneurysms कर रहे हैं। 1, 2, 3 इन विकारों hypoperfusion को वैसोडायलेटेशन के कारण पैदा हो सकती है, और इन्ट्रासेरेब्रल और / या subarachnoid हेमोरेज अंततः इस्कीमिक या रक्तस्रावी स्ट्रोक या में अनुवाद पर सबसे अच्छा, एक क्षणिक ischemic हमले। न्यूरोइमेजिंग, संभवतः एंजियोग्राफी के साथ संयुक्त सहित नैदानिक प्रक्रियाओं, हाल के अग्रिमों में, एक मस्तिष्क बायोप्सी के लिए आवश्यकता के बिना यह संभव इन प्रमुख cerebrovascular रोग चिकित्सकीय निदान करने के लिए बनाया है। फिर भी, प्रभावी और विशिष्ट उपचार (औषधीय या endovascular) वर्तमान में कमी कर रहे हैं और वहाँ इसलिए नए को परिभाषित करने की जरूरत हैआणविक लक्ष्य।
मानव में इन बीमारियों की रोकथाम के लिए दवा उपन्यास लक्ष्यों की पहचान पशु मॉडल और गाय सहित Cerebro-वाहिका को अलग-थलग करने के तरीकों की आवश्यकता होगी। इस तरह के मॉडल, भड़काऊ परिवर्तन सहित विशिष्ट परिवर्तन, के सबूत और सुराग प्रदान करना चाहिए intracranial धमनी धमनीविस्फार, CAA या intracranial atherosclerosis के पशु मॉडल में बड़े जहाजों की दीवारों में होने वाली। 4, 5, 6
हम इस तरह के रूप में CAA (ई) और संबंधित रोगों अल्जाइमर रोग में पोत सूजन के अध्ययन की सुविधा के लिए माउस गाय अलगाव के लिए एक विधि की स्थापना की है। माउस गाय को अलग-थलग करने के लिए इस विधि रोग प्रगति के दौरान भड़काऊ cerebrovascular जीन अभिव्यक्ति के आकलन के लिए विकसित किया गया था। साथ में leptomeningeal और pial धमनियों की दीवारों के भीतर amyloid बीटा बयान का पता लगाने के साथ, इस विधि के लिए यह आसान रोकते कर सकता हैमेरा Cerebro-वाहिका दीवार में भड़काऊ जीन अभिव्यक्ति और Aβ पेप्टाइड संचय के बीच संभव रिश्ता। leptomeningeal और subarachnoid अंतरिक्ष में pial सहित मस्तिष्क के संवहनी नेटवर्क, बड़े विलिस के चक्र बनाने धमनियों का एक विस्तार है। विधि यहाँ वर्णित किसी भी माउस वंश की गाय को अलग-थलग करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है और माउस Cerebro-वाहिका के बड़े जहाजों पर स्क्रीनिंग (जैसे, जीन अभिव्यक्ति, प्रोटीन के उत्पादन और posttranslational प्रोटीन संशोधनों) के सभी प्रकार के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है।
Protocol
Representative Results
Discussion
हम यहाँ विलिस के चक्र के अलगाव के लिए एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य प्रोटोकॉल का वर्णन। सबसे आम cerebrovascular गाय को शामिल विकारों CAA-जुड़े vasculopathies, intracranial atherosclerosis और intracranial धमनीविस्फार, जो सभी के धमनी वाहिकाओं की दी…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम पेरिस छठी विश्वविद्यालय और एक पियरे Fabre अभिनव अनुदान द्वारा समर्थित किया गया।
Materials
| Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline | Sigma-Aldrich | D8537 | |
| Dumont #55 Forceps | Fine Science Tools | 11295-51 | |
| Hardened Fine Iris Scissors | Fine Science Tools | 14090-11 | |
| Scissors – Straight / Sharp / Sharp 16.5 cm | Fine Science Tools | 14002-16 | |
| Dumont #7b Forceps | Fine Science Tools | 11270-20 | |
| Stereoscopic Zoom Microscope | Nikon | SMZ745T | |
| CellBIND Surface 60mm Culture Dish | Corning | #3295 | |
| Peristaltic Pump – MINIPULS 3 | Gilson | M312 | |
| Pentobarbital Sodique | Ceva Santé Animale | FR/V/2770465 3/1992 |
Riferimenti
- Beckmann, N., et al. Age-dependent cerebrovascular abnormalities and blood flow disturbances in APP23 mice modeling Alzheimer’s disease. J Neurosci. 23 (24), 8453-8459 (2003).
- Sadasivan, C., Fiorella, D. J., Woo, H. H., Lieber, B. B. Physical factors effecting cerebral aneurysm pathophysiology. Ann Biomed Eng. 41 (7), 1347-1365 (2013).
- Ritz, K., Denswil, N., Stam, O., van Lieshout, J., Daemen, M. Cause and mechanisms of intracranial atherosclerosis. Circulation. 130 (16), 1407-1414 (2014).
- Tulamo, R., Frösen, J., Hernesniemi, J., Niemelä, M. Inflammatory changes in the aneurysm wall: a review. J Neurointerv Surg. 2 (2), 120-130 (2009).
- Yamada, M. Cerebral amyloid angiopathy: emerging concepts. J Stroke. 17 (1), 17-30 (2015).
- Oy, B. Intracranial atherosclerotic stroke: specific focus on the metabolic syndrome and inflammation. Curr Atheroscler Rep. 8 (4), 330-336 (2006).
- Lee, H. J., Dietrich, H. H., Han, B. H., Zipfel, G. J. Development of an ex vivo model for the study of cerebrovascular function utilizing isolated mouse olfactory artery. J Korean Neurosurg Soc. 57 (1), 1-5 (2015).
- Hosaka, K., Downes, D. P., Nowicki, K. W., Hoh, B. L. Modified murine intracranial aneurysm model: aneurysm formation and rupture by elastase and hypertension. J Neurointerv Surg. 6 (6), 474-479 (2013).
- Gauthier, S. A., Sahoo, S., Jung, S. S., Levy, E. Murine cerebrovascular cells as a cell culture model for cerebral amyloid angiopathy: isolation of smooth muscle and endothelial cells from mouse brain. Methods Mol Biol. 849, 261-274 (2012).
- Choi, S., Kim, J., Kim, K., Suh, S. Isolation and in vitro culture of vascular endothelial cells from mice. Korean J Physiol Pharmacol. 19 (1), 35-42 (2015).
- Peters, D. G., Kassam, A. B., Yonas, H., O’Hare, E. H., Ferrell, R. E., Brufsky, A. M. Comprehensive transcript analysis in small quantitiesof mRNA by SAGE-Lite. Nucleic Acids Res. 27 (24), (1999).
- Badhwar, A. Stanimirovic, Hamel, & Haqqani The proteome of mouse cerebral arteries. J Cereb Blood Flow Metab. 34 (6), 1033-1046 (2014).
- Castro, L., Brito, M., et al. Striatal neurones have a specific ability to respond to phasic dopamine release. J Physiol. 591 (13), 3197-3214 (2013).
- Hübscher, D., Nikolaev, V. Generation of transgenic mice expressing FRET biosensors. Methods Mol Biol. 1294, 117-129 (2015).
