Anioniske polymerisering av en amfifil copolymer for forberedelse av blokk-kopolymer Miceller stabilisert av π-rc stabling Interactions
Summary
De viktigste trinn i levende anionisk polymerisering av fenylglycidyleter (PheGE) på metoksy-polyetylenglykol (MPEG-b -PPheGE) er beskrevet. De resulterende blokk-kopolymer miceller (BCMS) ble lastet med doksorubicin 14% (vekt%) og forlenget frigivelse av medikament i løpet av 4 døgn under fysiologiske relevante betingelser ble oppnådd.
Abstract
I denne studien ble en amfifil kopolymer som inkluderer et kjernedannende blokk med fenylgrupper syntetisert ved hjelp av levende anionisk polymerisasjon av fenylglycidyleter (PheGE) på metoksy-polyetylenglykol (MPEG-b -PPheGE). Karakterisering av kopolymeren viste en snever molekylvektfordeling (PDI <1,03) og bekreftet graden av polymerisering av mPEG 122 – b – (PheGE) 15. Den kritiske micellekonsentrasjonen av kopolymeren ble evaluert ved anvendelse av en etablert metode for fluorescens med aggregeringen oppførsel evaluert ved dynamisk lysspredning, og overføring elektronisk mikroskopi. Potensialet av copolymer for bruk i stoffet levering søknader ble evaluert i en foreløpig måte inkludert in vitro biokompatibilitet, lasting og frigjøring av den hydrofobe anti-kreft narkotika doxorubicin (DOX). En stabil micelle formulering av DOX ble utarbeidet med narkotika lasting nivåer opp til 14% (vekt%), legemiddelmengden efficiencies> 60% (vekt / vekt) og forlenget frigivelse av medikament i løpet av 4 døgn under fysiologiske relevante betingelser (sur og nøytral pH-verdi, tilstedeværelse av albumin). Den høye medikamentbelastning nivå og forsinket frigjøring skyldes stabilisere n-π interaksjoner mellom DOX og den kjernedannende blokk av micellene.
Introduction
I vandige media, amfifile blokk-kopolymerer sammen for å danne nanostørrelse blokk-kopolymer miceller (BCMS) som består av en hydrofob kjerne omgitt av et hydrofilt skall eller korona. Micellen kjerne kan tjene som et reservoar for inkorporering av hydrofobe medikamenter; mens, gir den hydrofile korona et grensesnitt mellom kjernen og det ytre medium. Poly (etylenglykol) (PEG) og dets derivater er en av de viktigste klasser av polymerer, og en av de mest utbredt i legemiddelformulering. 1-3 BCMS har vist seg å være en verdig medikamenttilførselsplattform med flere formuleringer avhengig av denne teknologi nå i sent stadium klinisk utvikling. 4 hyppigst, den hydrofobe blokk av kopolymeren består av polykaprolakton, poly (D, L-laktid), poly (propylenoksyd) eller poly (β-benzyl-L-aspartat). 5 -9
Kataoka gruppe undersøkt sfæriske miceller dannet fra PEO- b </em> -PBLA Og poly (etylenoksid) – b -. (Polyasparginsyre-konjugert doxorubicin) for levering av doxorubicin (DOX) 10.11 I sine rapporter, de legger frem at π-rc samspillet mellom polymer-konjugert narkotika eller PBLA og gratis DOX handle for å stabilisere micelle kjernen resulterer i en økning i narkotika lasting og oppbevaring. Det er fastslått at kompatibilitet eller interaksjoner mellom et stoff og kjernedannende blokk er faktorer som bestemmer sentrale ytelsesrelaterte parametere. 12 I tillegg til DOX, en rekke kreftbehandling inkluderer aromatiske ringer innenfor sitt kjernestruktur (for eksempel metotreksat, olaparib, SN -38).
Som et resultat er det en betydelig interesse for fremstilling av kopolymerer som inkluderer benzyl- ringer i sine kjernedannende blokker. Anionisk ringåpningspolymerisering av PEG og dets derivater muliggjøre kontroll over molekylvekten og resulterer i materialer med lav polydispersitet i godt utbytte. 13,14 Ethylene oksyd med fenylglycidyleter (PheGE) eller styrenoksyd (SO) kan (ko) polymeriseres for å danne blokk-kopolymerer som danner miceller for solubilisering av hydrofobe legemidler. 15-18 Denne rapporten beskriver de nødvendige skritt for å leve anionisk polymerisasjon av fenyl- glysidyleteren monomer på mPEG-OH som macroinitiator (figur 1). Den resulterende blokk-kopolymer og dets aggregater blir så preget i form av egenskaper som er relevante å bruke i levering av legemidler.
Protocol
Representative Results
Discussion
På grunn av den gode kontroll som anionisk polymerisering gir over molekylvekt er det en av de mest anvendte prosesser i industrien for fremstilling av polymerer basert på oksiran monomerer (PEG og PPG). Optimale og strenge vilkår må brukes for vellykket polymerisasjon skal oppnås. Streng rensing av alle reagenser og passende apparat er avgjørende for den levende karakter av syntesen. Begrensninger av dagens oppsett er for det meste knyttet til overføringsteknikk som er avhengig av kanylering. Ved hjelp av riktig…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
CA acknowledges a Discovery grant from the Natural Sciences and Engineering Research Council of Canada. CA acknowledges a Chair in Pharmaceutics and Drug Delivery from GSK. The authors declare no competing financial interest.
Materials
| DMEM/HAMF12 | Gibco, Life Technologies | 12500 | Supplemented with 10%FBS. Warm in 37 °C water bath |
|||||
| Trypsin-EDTA(0.25%) | Sigma-Aldrich | T4049 | Warm in 37 °C water bath | |||||
| Fetal bovine serum (FBS) | Sigma-Aldrich | F1051 | Canada origin | |||||
| MDA-MB-468 cell line | ATCC | HTB-132 | ||||||
| MTS tetrazolium reagent | PROMEGA | G111B | ||||||
| Phenazine ethosulfate (PES) | Sigma-Aldrich | P4544 | >95% | |||||
| mPEG5K (Mn 5400 g/mol) | Sigma-Aldrich | 81323 | PDI=1.02 | |||||
| Dimethylsolfoxide (DMSO) | Sigma-Aldrich | D4540 | >99.5% | |||||
| Naphthalene | Sigma-Aldrich | 147141 | >99% | |||||
| Phenyl glycidyl ether | Sigma-Aldrich | A32608 | >85% | |||||
| Benzophenone | Sigma-Aldrich | 427551 | >99% | |||||
| Potassium | Sigma-Aldrich | 451096 | >98% | |||||
| Tetrahydrofuran | Caledon Laboratory Chemicals | 8900 1 | ACS | |||||
| Hexane | Caledon Laboratory Chemicals | 5500 1 | ACS | |||||
| Calcium hydride (CaH2) | ACP | C-0460 | >99.5% | |||||
| Diethyl Ether | Caledon Laboratory Chemicals | 1/10/4800 | ACS | |||||
| Microplate reader | BioTek Instruments | |||||||
| Differential scanning calorimetry (DSC) | TA Instruments Inc | DSC Q100 | ||||||
| Gel permeation chromatography (GPC) | Waters | 2695 separation moldule / 2414 detector | 2 Columns: Agilent Plgel 5µm Mixed-D | |||||
| NMR spectroscopy | Varian Mercury 400MHz | |||||||
| Chloroform-d | Sigma-Aldrich | 151858 | 99.96% | |||||
| DMSO-d | Sigma-Aldrich | 156914 | 99.96% | |||||
| Vaccum pump | Gardner Denver Welch Vacuum Tech, Inc. | Ultimate pressure 1.10-4 torr | ||||||
| Drierit with indicator, 8 mesh | Sigma-Aldrich | 238988 | Regenerated at 230°C for 2 hrs | |||||
Riferimenti
- Dickerson, T. J., Reed, N. N., Janda, K. D. Soluble Polymers as Scaffolds for Recoverable Catalysts and Reagents. Chemical Reviews. 102, 3325-3344 (2002).
- van Heerbeek, R., Kamer, P. C. J., van Leeuwen, P. W. N. M., Reek, J. N. H. Dendrimers as Support for Recoverable Catalysts and Reagents. Chemical Reviews. 102 (10), 3717-3756 (2002).
- Knop, K., Hoogenboom, R., Fischer, D., Schubert, U. S. Poly(ethylene glycol) in Drug Delivery: Pros and Cons as Well as Potential Alternatives. Angewandte Chemie International Edition. 49 (36), 6288-6308 (2010).
- Eetezadi, S., Ekdawi, S. N., Allen, C. The challenges facing block copolymer micelles for cancer therapy: In vivo barriers and clinical translation. Advanced Drug Delivery Reviews. 91, 7-22 (2015).
- Attwood, D., Booth, C., Yeates, S. G., Chaibundit, C., Ricardo, N. Block copolymers for drug solubilisation: Relative hydrophobicities of polyether and polyester micelle-core-forming blocks. International Journal of Pharmaceutics. 345 (1-2), 35-41 (2007).
- Matsumura, Y., Kataoka, K. Preclinical and clinical studies of anticancer agent-incorporating polymer micelles. Cancer Science. 100 (4), 572-579 (2009).
- Chan, A. S., Chen, C. H., Huang, C. M., Hsieh, M. F. Regulation of particle morphology of pH-dependent poly(epsilon-caprolactone)-poly(gamma-glutamic acid) micellar nanoparticles to combat breast cancer cells. Journal of Nanoscience and Nanotechnology. 10 (10), 6283-6297 (2010).
- Diao, Y. Y., et al. Doxorubicin-loaded PEG-PCL copolymer micelles enhance cytotoxicity and intracellular accumulation of doxorubicin in adriamycin-resistant tumor cells. International Journal of Nanomedicine. 6, 1955-1962 (2011).
- Mikhail, A. S., Allen, C. Poly(ethylene glycol)-b-poly(ε-caprolactone) Micelles Containing Chemically Conjugated and Physically Entrapped Docetaxel: Synthesis, Characterization, and the Influence of the Drug on Micelle Morphology. Biomacromolecules. 11 (5), 1273-1280 (2010).
- Kataoka, K., Harada, A., Nagasaki, Y. Block copolymer micelles for drug delivery: design, characterization and biological significance. Advanced Drug Delivery Reviews. 47 (1), 113-131 (2001).
- Nakanishi, T., et al. Development of the polymer micelle carrier system for doxorubicin. Journal of Controlled Release. 74 (1-3), 295-302 (2001).
- Liu, J., Xiao, Y., Allen, C. Polymer-drug compatibility: A guide to the development of delivery systems for the anticancer agent, ellipticine. Journal of Pharmaceutical Sciences. 93 (1), 132-143 (2004).
- Flory, P. J. Molecular Size Distribution in Ethylene Oxide Polymers. Journal of the American Chemical Society. 62 (6), 1561-1565 (1940).
- Kazanskii, K. S., Solovyanov, A. A., Entelis, S. G. Polymerization of ethylene oxide by alkali metal-naphthalene complexes in tetrahydrofuran. European Polymer Journal. 7 (10), 1421-1433 (1971).
- Crothers, M., et al. Micellization and Gelation of Diblock Copolymers of Ethylene Oxide and Styrene Oxide in Aqueous Solution. Langmuir. 18 (22), 8685-8691 (2002).
- Taboada, P., et al. Block Copolymers of Ethylene Oxide and Phenyl Glycidyl Ether: Micellization, Gelation, and Drug Solubilization. Langmuir. 21 (12), 5263-5271 (2005).
- Taboada, P., et al. Micellization and Drug Solubilization in Aqueous Solutions of a Diblock Copolymer of Ethylene Oxide and Phenyl Glycidyl Ether. Langmuir. 22 (18), 7465-7470 (2006).
- Attwood, D., Booth, C. . Colloid Stability. , 61-78 (2010).
- Le Devedec, F., et al. Postalkylation of a Common mPEG-b-PAGE Precursor to Produce Tunable Morphologies of Spheres, Filomicelles, Disks, and Polymersomes. ACS Macro Letters. 5 (1), 128-133 (2016).
- Chtryt, V., Ulbrich, K. Conjugate of Doxorubicin with a Thermosensitive Polymer Drug Carrier. Journal of Bioactive and Compatible Polymers. 16 (6), 427-440 (2001).
- Kataoka, K., et al. Doxorubicin-loaded poly(ethylene glycol)-poly(β-benzyl-l-aspartate) copolymer micelles: their pharmaceutical characteristics and biological significance. Journal of Controlled Release. 64 (1-3), 143-153 (2000).
- Cammas, S., Matsumoto, T., Okano, T., Sakurai, Y., Kataoka, K. Design of functional polymeric micelles as site-specific drug vehicles based on poly (α-hydroxy ethylene oxide-co-β-benzyl l-aspartate) block copolymers. Materials Science and Engineering: C. 4 (4), 241-247 (1997).
- Lv, S., et al. Doxorubicin-loaded amphiphilic polypeptide-based nanoparticles as an efficient drug delivery system for cancer therapy. Acta Biomaterialia. 9 (12), 9330-9342 (2013).
- Kim, J. O., Oberoi, H. S., Desale, S., Kabanov, A. V., Bronich, T. K. Polypeptide nanogels with hydrophobic moieties in the cross-linked ionic cores: synthesis, characterization and implications for anticancer drug delivery. Journal of Drug Targeting. 21 (10), 981-993 (2013).
- Zhao, C. L., Winnik, M. A., Riess, G., Croucher, M. D. Fluorescence probe techniques used to study micelle formation in water-soluble block copolymers. Langmuir. 6 (2), 514-516 (1990).
- Wilhelm, M., et al. Poly(styrene-ethylene oxide) block copolymer micelle formation in water: a fluorescence probe study. Macromolecules. 24 (5), 1033-1040 (1991).
- Cammas, S., Kataoka, K. Functional poly[(ethylene oxide)-co-(β-benzyl-L-aspartate)] polymeric micelles: block copolymer synthesis and micelles formation. Macromolecular Chemistry and Physics. 196 (6), 1899-1905 (1995).
- Kwon, G., et al. Micelles based on AB block copolymers of poly(ethylene oxide) and poly(.beta.-benzyl L-aspartate). Langmuir. 9 (4), 945-949 (1993).
- Ahmed, F., Discher, D. E. Self-porating polymersomes of PEG-PLA and PEG-PCL: hydrolysis-triggered controlled release vesicles. Journal of Controlled Release. 96 (1), 37-53 (2004).
- Uhrig, D., Mays, J. W. Experimental techniques in high-vacuum anionic polymerization. Journal of Polymer Science Part A: Polymer Chemistry. 43 (24), 6179-6222 (2005).
- Parker, A. J. The effects of solvation on the properties of anions in dipolar aprotic solvents. Quarterly Reviews, Chemical Society. 16 (2), 163-187 (1962).
- Cram, D. J. . Fundamentals o] Carbanion Chemistry. , (1965).
- Szwarc, M. . ACS Symposium Series. 166, 1-15 (1981).
- Cho, Y. W., Lee, J., Lee, S. C., Huh, K. M., Park, K. Hydrotropic agents for study of in vitro paclitaxel release from polymeric micelles. Journal of Controlled Release. 97, 249-257 (2004).
- Dewhurst, P. F., Lovell, M. R., Jones, J. L., Richards, R. W., Webster, J. R. P. Organization of Dispersions of a Linear Diblock Copolymer of Polystyrene and Poly(ethylene oxide) at the Air−Water Interface. Macromolecules. 31 (22), 7851-7864 (1998).
- Opanasopit, P., et al. Block Copolymer Design for Camptothecin Incorporation into Polymeric Micelles for Passive Tumor Targeting. Pharmaceutical Research. 21 (11), 2001-2008 (2004).
- Allen, G., Booth, C., Price, C. VI-The physical properties of poly(epoxides). Polymer. 8, 414-418 (1967).
- Jada, A., Hurtrez, G., Siffert, B., Riess, G. Structure of polystyrene-block-poly(ethylene oxide) diblock copolymer micelles in water. Macromolecular Chemistry and Physics. 197 (11), 3697-3710 (1996).
- Attwood, D., Florence, A. T. . Surfactant systems : their chemistry, pharmacy, and biology. , (1983).
- Rekatas, C. J., et al. The effect of hydrophobe chemical structure and chain length on the solubilization of griseofulvin in aqueous micellar solutions of block copoly(oxyalkylene)s. Physical Chemistry Chemical Physics. 3 (21), 4769-4773 (2001).
