Cardiotoxin इंजेक्शन द्वारा तीव्र कंकाल की मांसपेशी उत्थान की प्रेरण
Summary
यह पांडुलिपि वयस्क चूहों और इस तरह के विच्छेदन के रूप में की मांसपेशियों के बाद जोड़तोड़, ठंड, काटने, दिनचर्या धुंधला हो जाना, और myofiber पार के अनुभागीय क्षेत्र के विश्लेषण में तीव्र कंकाल की मांसपेशी उत्थान के लिए प्रेरित करने के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल का वर्णन है।
Abstract
कंकाल की मांसपेशी उत्थान एक शारीरिक प्रक्रिया है कि चोट या बीमारी के जवाब में वयस्क कंकाल की मांसपेशियों में होता है। गंभीर चोट प्रेरित कंकाल की मांसपेशी उत्थान पेशी उत्थान के साथ ही तंत्र और अलग अलग खिलाड़ियों में शामिल घटनाओं का अध्ययन करने के लिए एक व्यापक रूप से इस्तेमाल किया, शक्तिशाली मॉडल प्रणाली है। दरअसल, इस प्रक्रिया की एक विस्तृत ज्ञान रोग की स्थिति यह है कि कंकाल की मांसपेशी अध: पतन के लिए नेतृत्व का एक बेहतर समझ के लिए आवश्यक है, और यह नए लक्षित चिकित्सीय रणनीतियों की पहचान करने में मदद करता है। वर्तमान कार्य (CTX) cardiotoxin का एक भी इंट्रामस्क्युलर इंजेक्शन के माध्यम से चूहों में तीव्र कंकाल की मांसपेशी उत्थान के लिए प्रेरित करने के लिए एक विस्तृत और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य प्रोटोकॉल का वर्णन है। CTX सांप के जहर विषाक्त पदार्थों के परिवार का है और myofibers की myolysis, जो अंततः उत्थान की घटनाओं से चलाता है का कारण बनता है। कंकाल की मांसपेशी उत्थान की गतिशीलता पेशी वर्गों के histological विश्लेषण द्वारा मूल्यांकन किया है। प्रोटोकॉल भी, विदारक ठंड, और tibialis पूर्वकाल मांसपेशी, साथ ही दिनचर्या Hematoxylin और Eosin धुंधला कि व्यापक रूप से बाद में रूपात्मक और morphometric विश्लेषण के लिए प्रयोग किया जाता है को काटने के लिए प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं को दिखाता है।
Introduction
स्तनधारी वयस्क कंकाल की मांसपेशियों multinucleated मांसपेशियों की कोशिकाओं (myofibers) कि संकुचन के लिए विशेष कर रहे हैं की fascicules के समूहों से बनते हैं। प्रत्येक myofiber एक लम्बी संकोश, sarcolemma (Plasmatic झिल्ली) और युक्त पेशीतंतुओं, जो नियमित रूप से और बार बार संगठित सिकुड़ा प्रोटीन (actin और मायोसिन तंतु) के बने होते हैं से घिरा हुआ है। वयस्क जीवन में और आराम की स्थिति में, कंकाल की मांसपेशियों उनकी myonuclei 1 का एक बहुत कम कारोबार किया है; दरअसल, myonuclei, जो sarcolemma तहत myofiber की परिधि में स्थित हैं, कोशिका चक्र के G0 चरण में गिरफ्तार किया गया और 1,2 पैदा करने में असमर्थ रहे हैं।
कंकाल की मांसपेशियों क्षति के बाद, ऊतक remodeling के कई घटनाओं है कि कसकर एक-दूसरे से जुड़े हुए हैं के बाद homeostasis तक पहुंचने को पुनर्जीवित करने के लिए अजीब क्षमता है। एक गंभीर चोट या आघात के बाद, अध: पतन, प्रेरित उत्थान प्रक्रियाओं द्वारा पीछा किया जाता हैकि मांसपेशियों की कोशिकाओं के एक निवासी की आबादी सहित विभिन्न सेल आबादी, शामिल है, उपग्रह कोशिकाओं (एससी)। दरअसल, किसी भी पर्यावरण उत्तेजनाओं के अभाव में, उपग्रह कोशिकाओं एक मौन राज्य में हैं और sarcolemma और बेसल पटल 3,4 के बीच एक विशेष जगह में स्थित हैं। एक चोट या बीमारी, अनुसूचित जाति बनने सक्रिय, क्षतिग्रस्त क्षेत्रों की ओर पलायन पैदा करना, और अंत में अंतर है, नव बनाने myofibers 5 को जन्म देने के बाद। सक्रिय अनुसूचित जाति अलग सेल आबादी, मुख्य रूप से भड़काऊ कोशिकाओं है, जो आघात 6-8 की साइट में भर्ती कर रहे हैं के साथ पार बात की स्थापना। इस पार से बात की कोशिकाओं को एक विनियमित प्रतिमान है जिसके द्वारा आणविक संकेतों संरचनात्मक संशोधनों ड्राइव का पालन करने के लिए, अंत में 9 homeostasis के लिए अग्रणी अनुमति देता है। अनुसूचित जाति, भड़काऊ और मध्य कोशिकाओं, एन्जियोजेनिक प्रक्रियाओं, और फिर से तंत्रिका वितरण की घटनाओं के अलावा भी शामिल कर रहे हैं, एक समन्वित तरीके से अभिनय की मरम्मत के लिए इस बेहद संगठित और एसpecialized संरचना।
वहाँ न केवल मांसपेशियों के शरीर क्रिया विज्ञान को समझने के लिए, लेकिन यह भी चिकित्सकीय रणनीति है कि पूरी प्रक्रिया का गहरा ज्ञान की आवश्यकता होती है में सुधार करने के कंकाल की मांसपेशी उत्थान के विभिन्न पहलुओं का अध्ययन करने में बहुत रुचि है। कई प्रयोगात्मक दृष्टिकोण वर्तमान में पहचान और अलग सेल आबादी, संकेत दे रास्ते, और आणविक शामिल तंत्र के समारोह में अध्ययन करने के लिए उपलब्ध हैं। गंभीर चोट के माउस मॉडल इस प्रक्रिया के कई पहलुओं की जांच करने के लिए एक शक्तिशाली उपकरण प्रतिनिधित्व करते हैं। विभिन्न सामान्यतः तकनीकों का इस्तेमाल किया प्रेरित करने के लिए तीव्र मांसपेशियों की क्षति शोधकर्ताओं प्रक्रिया के अंत करने के लिए बहुत प्रारंभिक दौर से विवो में उत्थान की प्रक्रिया का पालन करने की अनुमति देते हैं। इस प्रोटोकॉल सांप के जहर व्युत्पन्न cardiotoxin इंट्रामस्क्युलर इंजेक्शन (CTX), जो myolysis लाती है और ऊतकों के नमूनों के विश्लेषण के लिए ऊपर उत्थान की प्रक्रिया से चलाता है, से कदम का वर्णन है। CTX इंजेक्शन के बाद, एमआईसीई प्रयोगात्मक आवश्यकताओं के आधार पर अलग-अलग समय बिंदुओं पर बलिदान किया जा सकता है, और कंकाल की मांसपेशियों विच्छेदित और आगे के विश्लेषण के लिए कार्रवाई की जा सकती है। अंत में, हम ऊतक वर्गों के धुंधला प्रोटोकॉल रूपात्मक टिप्पणियों और बुनियादी मात्रात्मक विश्लेषण प्रदर्शन करने का वर्णन है। इस प्रोटोकॉल एक अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य तरीके से 10 विवो में तीव्र कंकाल की मांसपेशी उत्थान के अध्ययन के लिए अनुमति देता है।
Protocol
Representative Results
Discussion
यहाँ, हम कंकाल की मांसपेशी (यानी, CTX इंट्रामस्क्युलर इंजेक्शन) में गंभीर चोट प्रेरित करने के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन है। यह व्यापक रूप से विवो में कंकाल की मांसपेशी उत्थान की गतिशीलता का अध्ययन …
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
We thank the Animal House and the Integrated Microscopy Facilities of IGB-CNR. This work has benefited from research funding from the European Community’s Seventh Framework Programme in the project ENDOSTEM (Activation of vasculature associated stem cells and muscle stem cells for the repair and maintenance of muscle tissue, grant agreement number 241440), the Italian Ministry of Education-University-Research (MIUR-PRIN2 010-2011) to G.M. and S.B. and PON Cluster IRMI to G.M., and the CARIPLO foundation to G.M. and S.B.
Materials
| Cardiotoxin from Naja mossambica mossambica | SIGMA ALDRICH | C9759 | |
| Syringe For Insulin BD Micro-Fine+ Needle 30 G X 8 mm – Da 0,3 ml | BD | 324826 | |
| Tragacanth Gum | MP BIOMEDICALS,LLC | 104792 | |
| 2-Methylbutane (Isopentane) | SIGMA ALDRICH | 78-78-4. | |
| OCT Killik Solution For Inclusion Cryostat | Bio-optica | 05-9801 | |
| Feather Microtome Blade S35 | Bio-optica | 01-S35 | |
| Glass Slide Superfrost Plus | Menzel-Gläser | 09-OPLUS | |
| Dumon #5 Mirror Finish Forceps | 2BIOLOGICAL INSTRUMENTS | 11251-23 | |
| Scissors Straight Sharp/Sharp | 2BIOLOGICAL INSTRUMENTS | 15024-10 | |
| Scissors Noyes Straight | 2BIOLOGICAL INSTRUMENTS | 15012-12 | |
| Fine Iris Scissors Straight Sharp/Sharp 10,5 Cm | 2BIOLOGICAL INSTRUMENTS | 14094-11 | |
| Eukitt | Bio-optica | 09-00100 | |
| Slide Coverslip | BIOSIGMA | VBS651 | |
| Xylene | SIGMA ALDRICH | 214736 | |
| Ethanol 100% | sigma-Aldrich | 02860-2.5L | |
| Hematoxyline | J.T. BAKER | 3873 | |
| Eosin | SIGMA ALDRICH | HT110116 | |
| Cryostat | LEICA | CM3050 S |
Riferimenti
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