Here, we present a new technique to culture chick embryos ex ovo for time-lapse imaging using transmitted light and fluorescence microscopy. The submerged filter paper sandwich is a variant of the well-established filter paper carrier technique1 that allows for the culturing of chick embryos fully-submerged in a liquid culture medium.
इसकी उपलब्धता के कारण, कम लागत, फ्लैट ज्यामिति, और पारदर्शिता, पूर्व लड़की भ्रूण ओवो ऐसे gastrulation 2 के रूप में morphogenetic घटनाओं के अध्ययन के लिए एक प्रमुख कशेरुकी पशु मॉडल, neurulation 3 बन गया है – 5, 6 somitogenesis, दिल झुकने 7, 8, और मस्तिष्क गठन 9 – 13, जल्दी embryogenesis के दौरान। morphogenetic प्रक्रियाओं को समझने की कुंजी उन्हें समय चूक इमेजिंग द्वारा गतिशील पालन करने के लिए है। लड़की embryogenesis पूर्व ओवो के समय चूक फिल्मों के अधिग्रहण भ्रूण 14 के आसपास के तापमान और आर्द्रता नियंत्रण करने के लिए एक मशीन के लिए कम समय के लिए खिड़कियों या जरूरत के लिए या तो सीमित किया गया है। यहाँ, हम संस्कृति लड़की के लिए एक नई तकनीक उच्च संकल्प समय चूक प्रेषित प्रकाश माइक्रोस्कोपी का उपयोग इमेजिंग के लिए पूर्व ओवो भ्रूण प्रस्तुत करते हैं। जलमग्न फिल्टर पेपर सैंडविच अच्छी तरह से स्थापित फिल्टर पेपर वाहक techn का एक प्रकार हैique (ईसी-संस्कृति) 1 और एक जलवायु चैम्बर के लिए आवश्यकता के बिना लड़की भ्रूण के संवर्धन के लिए अनुमति देता है। भ्रूण दो समान फिल्टर पेपर वाहकों के बीच sandwiched है और पूरी तरह से एक सरल, तापमान नियंत्रित मध्यम प्रकाश खनिज तेल की एक परत से ढका में डूबे रखा है। कम से कम 28-विखंड चरण (HH16) 15 तक आदिम लकीर मंच (हैम्बर्गर हैमिल्टन चरण 5, HH5) 15 से शुरू, भ्रूण या तो उनके उदर या पृष्ठीय पक्ष के साथ संवर्धित किया जा सकता है। इस बार चूक भ्रूण के विकास के बारे में 30 मानव संसाधन को कवर फिल्मों के अधिग्रहण की अनुमति देता है। प्रतिनिधि समय चूक फ्रेम और फिल्में दिखाई जाती हैं। भ्रूण एक भ्रूण मानक चुनाव आयोग संस्कृति में संवर्धित करने के लिए आकृति विज्ञान तुलना कर रहे हैं।
जलमग्न फिल्टर पेपर सैंडविच जल्दी पृष्ठीय और उदर morphogenetic प्रक्रियाओं का अध्ययन करने के लिए एक स्थिर वातावरण प्रदान करता है। यह भी ऐसी microsurgery, मनका छोटा सा भूत के रूप में, लाइव प्रतिदीप्ति इमेजिंग और micromanipulations के लिए अनुमति देता हैlantation, microinjection, जीन मुंह बंद करने, और electroporation, और एक मजबूत क्षमता है लेजर आधारित इमेजिंग (प्रकाश चादर माइक्रोस्कोपी सहित) के लिए विसर्जन उद्देश्यों के साथ जोड़ा जा सके।
Embryogenesis इतिहास की शुरुआत के बाद से आदमी मोहित हो गया है। कैसे संरचना और एक भ्रूण की आकृति विज्ञान एक ऐसी अच्छी तरह से परिभाषित अस्थायी और स्थानिक ढंग से विकसित हो? लड़की भ्रूण कई कारणों के लिए embryogenesis के लिए शास्त्रीय कशेरुकी पशु मॉडलों में से एक बन गया है: यह आसानी से उपलब्ध, सस्ती, अपनी प्रारंभिक अवस्था में पारदर्शी, सुलभ और प्रयोगात्मक जोड़तोड़ के लिए है, के रूप में यह मां के बाहर विकसित करता है। इसके अलावा, यह इस तरह के दिल और दिमाग के गठन, gastrulation, neurulation, और somitogenesis 15 के रूप में जल्दी मॉर्फ़ोजेनेटिक घटनाओं के दौरान लगभग एक फ्लैट ज्यामिति है।
Morphogenetic प्रक्रियाओं सबसे अच्छा समझा जा सकता है, तो वे ऐसे समय चूक छवियों के अधिग्रहण के माध्यम के रूप में गतिशील रूप से अध्ययन कर रहे हैं। लड़की भ्रूण ओवो 16 में लेकिन प्रयोगात्मक जोड़तोड़ और पारेषण प्रकाश माइक्रोस्कोपी इमेजिंग के लिए सीमित दृश्यता के लिए गरीब पहुँच के साथ देखे जा सकते हैं। इसलिए, तोड़19 या explant संस्कृतियों 1,20 के रूप में – – 23 अल तकनीक संस्कृति लड़की भ्रूण पूर्व ओवो, या तो पूरी की जर्दी संस्कृति प्रणालियों 13,17 में करने का प्रस्ताव किया गया है। पूरे जर्दी संस्कृति प्रणालियों में, भ्रूण बरकरार जर्दी के शीर्ष पर बनी हुई है, और अंडे की सारी सामग्री ऊष्मायन के लिए एक और कंटेनर को सौंप दिया है। इस कंटेनर एक सरोगेट अंडे का खोल 17, एक पेट्री डिश 19, या एक झूला प्लास्टिक लपेटो चिपटना 13,18 से बना हो सकता है। पूरे जर्दी संस्कृतियों में भ्रूण आदर्श सेने तक सुसंस्कृत हो सकता है और micromanipulations के लिए सुलभ हो सकता है। इन तकनीकों में, रक्त परिसंचरण (जो विपरीत बढ़ जाती है) की दीक्षा के बाद भ्रूण के विकास का अध्ययन करते हुए युवा भ्रूण कल्पना करने के लिए कठिन रहने के लिए विशेष रूप से उपयोगी होते हैं। ये जल्दी भ्रूण सबसे अच्छा imaged किया जा सकता है, तो वे जर्दी से excised और इन विट्रो explants के रूप में सभ्य हैं। explants प्रयोग के लिए आसानी से सुलभ हैंअल जोड़तोड़ और संवर्धन के लिए कम जगह की आवश्यकता होती है। कई सालों के लिए, एक तकनीक Denis न्यू ने बीड़ा उठाया है 1955 और अपनी विविधताओं में लड़की भ्रूण के लिए explant संस्कृति तरीकों के स्वर्ण मानक थे, जिससे समय चूक माइक्रोस्कोपी और microsurgical हस्तक्षेप 20,21 के लिए भ्रूण सुलभ बना रही है। अपनी महान सफलता के बावजूद नई तकनीक अपेक्षाकृत मांग और समय लेने वाली है। Blastoderm अक्सर खिसकाते जब पीतक झिल्ली, blastoderm ले जाने, एक गिलास अंगूठी चारों ओर फैला है उचित तनाव 1 प्राप्त करने के लिए। इसके अलावा, भ्रूण केवल अपने उदर पक्ष के साथ संवर्धित किया जा सकता। चुनाव आयोग (प्रारंभिक चिकी) संस्कृति, एक और अधिक हाल तकनीक चैपमैन और COLLIGNON 1 द्वारा विकसित की है, एक केंद्रीय एपर्चर के साथ एक फिल्टर पेपर वाहक का उपयोग करके पीतक झिल्ली की खींच गतिरोध उत्पन्न। फिल्टर पेपर पीतक झिल्ली को देता है, जिससे इसकी प्राकृतिक तनाव को बनाए रखने, और एक तस्वीर के फ्रेम 1 जैसे भ्रूण के चारों ओर।भ्रूण तो, एक आगर-अंडे की सफ़ेदी तल पर सुसंस्कृत हैं आम तौर पर उनके उदर पक्ष के साथ। पृष्ठीय पक्ष संवर्धन HH8 15 और बड़ी उम्र में भ्रूण के लिए ही संभव लगता है। कई समूहों में इस तरह के सर्जिकल सिवनी फाइबर 24 या एक कोलेजन लेपित झिल्ली 25 से बनाया गया एक समर्थन के साथ आगर-अंडे की सफ़ेदी नीचे की जगह से उनकी जरूरतों के लिए फिल्टर पेपर वाहक ढाल लिया है। अक्सर, न्यू तकनीक के साथ या चुनाव आयोग संस्कृति के साथ सुसंस्कृत भ्रूण हवा के लिए उनके पृष्ठीय या उदर की सतह के साथ संपर्क में हैं, ऑक्सीजन प्रसार 1,20 सुविधा के लिए। ये explant संस्कृतियों माध्यम के वाष्पीकरण से बचने के लिए और बाहर सुखाने से भ्रूण को रोकने के लिए एक humidified वातावरण में रखा जाना है। इस सिक्त टिशू पेपर 1 से युक्त एक बड़ा पेट्री डिश में explant संस्कृति के साथ पकवान incubating द्वारा हासिल की है। इन भ्रूणों के समय चूक छवियों के अधिग्रहण के पूरे माइक्रोस्कोप या एक गुस्सा चारों ओर एक जलवायु नियंत्रित इनक्यूबेटर में से किसी के उपयोग की आवश्यकता हैature नियंत्रित एक गर्म ढक्कन के साथ कंटेनर प्रकाश पथ 14 में संक्षेपण को रोकने के लिए। हालांकि, लड़की भ्रूण भी पूर्व ओवो पूरी तरह से, के रूप में फिल्टर पेपर संस्कृतियों 25 मध्यम संस्कृति में डूबे हुए न्यू तकनीक 2,21 के adaptions में भारी खनिज तेल और अंडे की सफ़ेदी की एक परत के बीच sandwiched, या "कोर्निश पीले संस्कृति में मुड़ा blastoderm explants के रूप में विकसित कर सकते हैं "23,26, हवा के साथ सीधे संपर्क के बिना।
जलमग्न फिल्टर पेपर सैंडविच फिल्टर पेपर वाहक तकनीक का एक नया संस्करण है। लड़की भ्रूण पूर्व ओवो संवर्धन पर पहले ज्ञान के संयोजन से, यह जलवायु नियंत्रित इनक्यूबेटर और गर्म ढक्कन नगण्य बनाता है। तापमान नियंत्रित होते हैं: भ्रूण दो समान (लेजर कट) फिल्टर पेपर वाहक 24 और सुसंस्कृत पूरी तरह से एक साधारण मध्यम संस्कृति (2 अनुपात Pannett-कॉम्पटन खारा 27,28 और एक 3 में पतली अंडे की सफ़ेदी) में डूबे हुए बीच sandwiched हैइंजी। प्रकाश खनिज तेल के माध्यम से शीर्ष पर चल की एक परत वाष्पीकरण 2,21 रोकता है और पर्यावरण के लिए गर्मी के नुकसान को कम करता है। कंटेनर के नीचे एक कांच की खिड़की है, और पूरे सेटअप एक ईमानदार लंबे समय तक काम दूरी जूम खुर्दबीन पर किया जाता है। इस सेटअप जल्दी आदिम लकीर मंच से 28-विखंड चरण से लेकर, भ्रूण के विकास के बारे में 30 घंटे की उच्च संकल्प brightfield और darkfield समय चूक फिल्मों के अधिग्रहण की अनुमति देता है (हैम्बर्गर हैमिल्टन के बराबर चरणों 5 16, HH5-16 करने के लिए ) 15। भ्रूण को अपने उदर या पृष्ठीय पक्ष के साथ समान रूप से अच्छी तरह से संवर्धित किया जा सकता। (- 5, और जल्दी मस्तिष्क 9 – 13 जैसे, देर gastrulation 2, न्यूरल ट्यूब बंद होने के 3) विकास इसलिए, भ्रूण अवलोकन और उदर (जैसे, जल्दी दिल 7,8 और somitogenesis 6) और पृष्ठीय के हेरफेर करने के लिए पहुंच रहे हैं। जलमग्न फिल्टर पेपर सैंडविच पीmicrosurgery, मनका आरोपण, microinjection, जीन मुंह बंद करने, और electroporation के अध्ययन के लिए एक सरल और स्थिर वातावरण rovides। इसके इमेजिंग संभावित लेजर आधारित इमेजिंग और विसर्जन उद्देश्यों (प्रकाश चादर माइक्रोस्कोपी सहित) का उपयोग करके बहुत आगे धक्का दिया जा सकता है।
अच्छी तरह से स्थापित चुनाव आयोग संस्कृति 1 का एक नया संस्करण के रूप में, जलमग्न फिल्टर पेपर सैंडविच के चारों ओर एक तापमान और आर्द्रता नियंत्रित इनक्यूबेटर बनाकर ओवो जल्दी लड़की भ्रूण पूर्व की लंबी अवधि के brightfield और darkfield समय चूक फिल्मों के अधिग्रहण की सुविधा माइक्रोस्कोप नगण्य। बल्कि एक अर्द्ध ठोस आगर-अंडे की सफ़ेदी तल पर सुसंस्कृत होने की तुलना में, भ्रूण पूरी तरह से पीसी-खारा और पतली अंडे की सफ़ेदी से मिलकर एक साधारण मध्यम संस्कृति में डूबे रखा जाता है। वाष्पीकरण और गर्मी के नुकसान संस्कृति के माध्यम से शीर्ष पर चल खनिज तेल की एक परत से कम कर रहे हैं। भ्रूण गुणवत्ता में दिखाई मतभेद के बिना, आसानी से संवर्धित किया जा सकता है या तो पृष्ठीय या उदर पक्ष। यहाँ दिखाया गया है, जलमग्न फिल्टर पेपर सैंडविच में भ्रूण, microsurgical हस्तक्षेप करने के लिए पहुंच रहे हैं morphogen लथपथ मोती के आवेदन की तरह। भविष्य अनुप्रयोगों को लाइव प्रतिदीप्ति इमेजिंग, microinjections और electroporation, और जीन एमए करने के लिए मुंह बंद में शामिलnipulate और उदर (जैसे, जल्दी दिल और somitogenesis) और पृष्ठीय (जैसे, देर gastrulation, न्यूरल ट्यूब बंद करने, और जल्दी मस्तिष्क) के विकास के दौरान मॉर्फ़ोजेनेटिक घटनाओं की एक विस्तृत श्रृंखला का अध्ययन। एक समय पर निर्भर करता है, तो दवा इलाज संभव फिल्टर पेपर सैंडविच युक्त पेट्री डिश एक छिड़काव चैम्बर साथ बदल दिया है, खनिज तेल की परत के नीचे मध्यम संस्कृति के आदान-प्रदान की अनुमति है। जलमग्न फिल्टर पेपर सैंडविच लेजर आधारित इमेजिंग और विसर्जन उद्देश्यों (प्रकाश चादर माइक्रोस्कोपी सहित) के साथ संयोजन में अपनी पूरी इमेजिंग क्षमता का विकास होगा।
जलमग्न फिल्टर पेपर सैंडविच की तैयारी के साथ कुछ कठिनाइयों निम्नलिखित पैराग्राफ में संबोधित किया जाएगा। हालांकि यह फिल्टर पेपर सैंडविच में जर्दी से एक भ्रूण हस्तांतरण करने के लिए केवल प्रशिक्षण के एक उदार राशि की आवश्यकता है, कई कदम अभी भी काफी संस्कृति में भ्रूण की गुणवत्ता को प्रभावित कर सकते हैं। इससे पहले फिल्टर पेपर वाहक हैजर्दी पर रखा, भ्रूण के चारों ओर पीतक झिल्ली किसी भी मोटी अंडे की सफ़ेदी से मुक्त किया जाना चाहिए। तभी फिल्टर पेपर और पीतक झिल्ली के बीच संबंध काफी मजबूत पीसी-खारा में कपड़े धोने का सामना करने के लिए किया जाएगा। फिल्टर भ्रूण ले जाने जितना संभव हो कम तरल / एयर इंटरफेस पार करना चाहिए कागज झिल्ली पर तनाव कम करने के लिए। एक बार धोने के लिए पीसी-खारा में लाया, पूरे फिल्टर पेपर वाहक पूरी तरह से हर समय जलमग्न रहना चाहिए। 60 सेकंड के रूप में पीतक झिल्ली फिल्टर पेपर से रिहा शुरू होगा – पीसी-खारा स्नान में समय के बारे में 30 तक सीमित किया जाना चाहिए। फिर भी, भ्रूण की सफाई, बहुत अच्छी तरह से निष्पादित किया जाना चाहिए जर्दी अवशेष बाद में भ्रूण के मद्देनजर अस्पष्ट होगा। धोने के दौरान, त्रिज्यात इससे दूर सीधे भ्रूण पर स्थानांतरित पिपेट से धारा बात है, लेकिन हमेशा कभी नहीं। पीसी-खारा से भ्रूण को हटाने के बाद, क्षैतिज फिल्टर पेपर धारण करने के लिए कम से कम करने के लिए सुनिश्चित करेंभ्रूण झिल्ली पर तनाव। फिर, दूसरी फिल्टर पेपर वाहक के साथ भ्रूण को स्थिर। एक बार दूसरे फिल्टर पेपर वाहक रखा गया है, किसी भी पार्श्व तनाव है, जो फिल्टर पेपर वाहक एक दूसरे के सापेक्ष पारी और भ्रूण झिल्ली फाड़ सकता बनाने से बचें। फिल्टर पेपर सैंडविच संस्कृति के माध्यम में लाया जाता है, यह भी हवा / तरल इंटरफेस पार करना चाहिए केवल एक बार झिल्ली पर तनाव कम करने के लिए। स्टेनलेस स्टील के ऊपर से फिल्टर पेपर सैंडविच को स्थिर करने के लिए इस्तेमाल के छल्ले की दूसरी जोड़ी बहुत धीरे से रखा जाना चाहिए और भ्रूण झिल्ली के संपीड़न कम करने के लिए बिना किसी दबाव के। भ्रूण के क्षेत्र opaca के छोटे ruptures आमतौर पर संस्कृति के पहले घंटे के दौरान ठीक है, लेकिन एक क्षतिग्रस्त भ्रूण और हमेशा एक नया नमूना द्वारा प्रतिस्थापित किया जाना चाहिए सकता से पहले तेल की परत संस्कृति के माध्यम से शीर्ष पर pipetted है।
छवि के लिए एक पूरे भ्रूण या उच्च संकल्प समय चूक फिल्मों के लिए कई नमूने, Microscope एक मोटर चालित XY-चरण, माइक्रोस्कोप सॉफ्टवेयर द्वारा नियंत्रित के साथ सुसज्जित किया जाना चाहिए। यह एक न्यूनतम गति के साथ XY-मंच चाल भ्रूण और संस्कृति के माध्यम से और तेल में turbulences, जो छवि गुणवत्ता में कमी होगी करने के लिए क्षति से बचने के लिए महत्वपूर्ण महत्व का है। यहाँ प्रस्तुत समय चूक फिल्मों के अधिग्रहण के लिए, मोटर XY-चरण लगभग 1.75 मिमी / सेकंड की गति के साथ ले जाया गया। भविष्य में, इमेजिंग आगे पहले इच्छित स्थान के लिए मंच चलती है और कंपन और turbulences दूर नहीं हो पाती जाने के लिए एक छोटी बाकी अवधि के बाद छवि प्राप्त करने से सुधार किया जा सकता है।
एक सीमा के रूप में, संभावित उपयोगकर्ताओं अपेक्षाकृत लंबे समय तक काम दूरी (लगभग 1 सेमी) इस संस्कृति विधि के लिए आवश्यक के बारे में पता है, तो विसर्जन उद्देश्यों के बिना एक ईमानदार माइक्रोस्कोप का इस्तेमाल किया जाता है होना चाहिए। भ्रूण के शीर्ष पर माध्यम की परत से और खनिज तेल की यह दूरी काम का परिणाम है। 6 सेमी पेट्री डिश में तेल की परत एक thicknes हैलगभग 1 के एस – 1.5 मिमी, और भ्रूण लगभग 4 मिमी संस्कृति माध्यम में गहरे डूबे हुए है। उद्देश्य के व्यास के आधार पर, 6 सेमी पेट्री डिश के ऊपरी छोर भी भ्रूण तक पहुँच को सीमित कर सकता है। यह एक बड़ा पकवान का उपयोग करके धोखा दिया जा सकता है।
ऊपर से काम दूरी थोड़ा तरल परतों की मोटाई को कम से कम किया जा सकता है। इसके अलावा, नीचे से काम दूरी भ्रूण आगे पेट्री डिश के नीचे करने के लिए नीचे लाने और गर्म बीकर की खिड़की के कांच की मोटाई कम से कम किया जा सकता है। प्रोटोकॉल एक ईमानदार लंबे समय तक काम दूरी ज़ूम माइक्रोस्कोप के साथ काम करने के लिए अनुकूलित किया गया था, जबकि यह एक औंधा माइक्रोस्कोप के रूप में अच्छी तरह से फिट किया जा सकता है। भविष्य के उपयोगकर्ताओं, मन में है कि संस्कृति के माध्यम में भी गहराई से भ्रूण जलमग्न ओ 2 -diffusion समस्याओं का नेतृत्व कर सकते में रखना चाहिए हालांकि प्रारंभिक प्रयोगों का सुझाव है कि सीमित प्रसार के लिए एक समस्या हो प्रतीत नहीं होताएलईएम, जब तक भ्रूण संस्कृति के माध्यम से और फिल्टर पेपर sandwiched की एक पर्याप्त-बड़े जलाशय से घिरा हुआ है पेट्री डिश की तह तक नहीं दबाया जाता है।
एक और सीमा तापमान नियंत्रण है। 40 डिग्री सेल्सियस तक गर्म बीकर के लिए नियंत्रक के तापमान को समायोजित करके, मध्यम तापमान में भ्रूण जब मध्यम खनिज तेल के साथ कवर किया जाता है चारों ओर 37.5 डिग्री सेल्सियस तक equilibrates। इससे पता चलता है कि कुछ ऊर्जा बीकर, जहां हीटिंग तत्वों और तापमान संवेदक स्थित हैं के नीचे, और भ्रूण के स्थान के बीच खो दिया है। तापमान नियंत्रण सेंसर स्थानांतरित करने और हीटिंग तत्वों पुनर्वितरण द्वारा अनुकूलित किया जा सकता है।
The authors have nothing to disclose.
लेखकों को एक ZonMW-VICI अनुदान 918.11.635 (नीदरलैंड) से वित्तीय सहायता स्वीकार करते हैं। लेखकों उनके व्यावहारिक सुझाव के लिए और माइक्रोस्कोपी पर उपयोगी सलाह के लिए सेटअप घटकों और कार्ल जीस नीदरलैंड के Jarno Voortman के निर्माण के लिए Vrije Universiteit एम्स्टर्डम के उपकरण की दुकान का शुक्रिया अदा करना चाहते हैं। Marjolein Blaauboer गंभीर रूप से पांडुलिपि के कई ड्राफ्ट पर टिप्पणी में एक महान समर्थन किया गया।
Milli-Q Reference Water Purification System | Millipore | Z00QSV0WW | |
Duran laboratory bottles, with caps, 1L | Sigma-Aldrich/Duran | Z305200-10EA | |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Solution A | |||
NaCl | Merck Millipore | 1064041000 | |
KCl | Merck Millipore | 1049361000 | |
CaCl2 H2O | Merck Millipore | 1023821000 | |
MgCl2.6H2O | Merck/Sigma-Aldrich | 13152-1KG-D | |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Solution B | |||
Na2HPO4.2H2O | Merck | 1065801000 | |
NaH2PO4.2H2O | Merck | 1063420250 | |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Whatman qualitative filter paper, Grade 595 | Sigma-Aldrich | 10311611 | |
Laser cutting machine MLS-90120-C130, CO2-laser, 130W, wavelength 10.6 µm | Micro Lasersystems | ||
Tork Extra Soft Facial Tissues | Tork | 140280 | |
Latex gloves | Sigma-Aldrich | Z645613 | |
EMDAMED | EMDA 300.131 | ||
Transfer pipettes | Sigma-Aldrich | Z350613 | |
VWR | WITG5.480.003 | ||
accu-jet pro Pipette Controller | BrandTech Scientific | 26332 | |
Serological plastic pipettes, 25mL | Sigma-Aldrich | CLS4251 | |
Plastic document sleeves | |||
Egg incubator – Incubator mod. Cip Cip 40 | Fiem | ||
Fertilized chicken eggs (Gallus gallus) | Drost BV (Loosdrecht, NL) | ||
10 cm Tissue culture dishes | Sigma-Aldrich | P5731 | |
Greiner Bio-one | 664160 | ||
6 cm Petri dishes | Sigma-Aldrich | P5481 | |
50ml Centrifuge tubes , Greiner centrifuge tubes or Cellstar tubes | Sigma-Aldrich | T2318 | |
greiner bio-one | 227261 | ||
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Stainless steel rings, custom-made | |||
Large rings, 30 mm outer diameter, 4 mm in height, 1.5 mm wall thickness | |||
Small rings, 20 mm outer diameter, 4 mm in height, 1.5 mm wall thickness, 6.5 mm gap in the ring | |||
Nail scissors | |||
Forceps, Dumont #5, Inox | Fine Science Tools , F.S.T. | 11251-20 | |
Fine, really sharp scissors for cutting filter paper | VWR | 21-102 | |
M3516 Sigma-Aldrich Mineral Oil | Sigma-Aldrich | CAS Number 8042-47-5 | |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Agar bottoms for EC culture | |||
Agarose | Sigma-Aldrich | A9539 SIGMA | |
NaCl | Sigma-Aldrich | S7653 SIGMA-ALDRICH | |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Microbead implantation | |||
Polybead Sampler Kit III (45 µm beads were used) | Polysciences, Inc. | 16905-1 | |
Accupuncture needles: type J, No.02, 0.12x30mm | SEIRIN | type J, No.02, 0.12x30mm | |
PBS, pH 7.4 | Thermo Fisher Scientific | 10010023 | |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Temperature controlled beaker | |||
RTD Temperature Sensor with M4 Threaded Housing RTD-850M | Omega | RTD-850M | |
Hermetically Sealed RTD Sensors HSRTD-3-100-A-3M | Omega | HSRTD-3-100-A-1M | |
Thermistor and RTD Extension Wire EXTT-3CU-26S-50 | Omega | EXTT-3CU-26S-50 | |
3-Pin Mini Connectors for Thermocouples, 3-Wire RTD's and Thermistors MTP-U-M | Omega | MTP-U-M | |
Kapton (Polyimide Film) Insulated Flexible Heaters KHLV-103/(10)-P | Omega | KHLV-103/(10)-P | |
Temperature/Process Controller CNi16D24-C4EIT-DC | Omega | CNi16D24-C4EIT-DC | |
Custom-made aluminium beaker, isolated with polyacetal (drawings see sheet 2) | |||
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Microscope setup | |||
Axio Zoom.V16 with ApoTome.2 ZEN | Carl Zeiss AG | 495010-0009-000 | |
Objective PlanNeoFluar Z 1.0x/0.25 FWD 56mm | Carl Zeiss AG | 435281-9100-000 | |
Manual Rotary Control MARC | Carl Zeiss AG | 435604-0000-000 | |
Transillumination top 450 mot | Carl Zeiss AG | 435500-9000-000 | |
Motorized measuring stage S 150×100 mot; CAN (D) | Carl Zeiss AG | 435465-9020-000 | |
Insert plate S, glass 237x157x3mm (D) | Carl Zeiss AG | 435465-9053-000 | |
Controller EMS 3 | Carl Zeiss AG | 435610-9010-000 | |
System Control Panel SYCOP 3 | Carl Zeiss AG | 435611-9010-000 | |
Hamamatsu ORCA Flash 4.0 camera | Hamamatsu | C11440-22CU | |
Microscopy High-End Workstation Xeon Quad-Core mulitlingual | Carl Zeiss AG | 490004-0025-000 | |
Language Package Windows 7 x64 Ultimate English US | Carl Zeiss AG | 410373-0200-000 | |
LCD TFT Monitor HP ZR2440w 24" | Carl Zeiss AG | 410350-2403-000 | not available anymore |
ZEN pro 2012 Hardware License key | Carl Zeiss AG | 410135-1002-120 | not available anymore |
ZEN Software Driver Hamamatsu Cameras Hardware License Key | Carl Zeiss AG | 410136-1045-110 | |
ZEN module Z Stack | Carl Zeiss AG | 410136-0030-110 | |
ZEN Module Tiles/ Positions | Carl Zeiss AG | 410136-1025-110 | |
ZEN Module Time Lapse | Carl Zeiss AG | 410136-1031-110 | |
ZEN Module Experiment Designer | Carl Zeiss AG | 410136-1022-110 | |
ZEN Desk 2012 Hardware License Key | Carl Zeiss AG | 410135-1004-120 | not available anymore |