एक murine मॉडल में अधोमूत्र पिंडीय उदर महाधमनी clamping द्वारा प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य धमनी अनाच्छादन चोट
Summary
धमनी अनाच्छादन चोट के बाद फिर से endothelialization के सेलुलर और आणविक तंत्र को समझना घनास्त्रता और धमनियों की restenosis को रोकने में सर्वोपरि महत्व का है। यहाँ हम अधोमूत्र पिंडीय उदर महाधमनी की प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य धमनी अनाच्छादन की चोट के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन है। प्रक्रिया अंतर्निहित तंत्र कि endothelial उत्थान माउस मॉडल का उपयोग करने को विनियमित जांच करने के लिए विकसित किया गया था।
Abstract
Percutaneous संवहनी हस्तक्षेप समान रूप से धमनी अनाच्छादन चोटों कि बाद में घनास्त्रता और restenosis के लिए नेतृत्व में परिणाम। इन जटिलताओं घाव मार्जिन के भीतर फिर से endothelialization में दोष के लिए जिम्मेदार ठहराया जा सकता है। फिर भी, फिर से endothelialization के सेलुलर और आणविक तंत्र में परिभाषित किया जा रह है। जबकि धमनी अनाच्छादन के बाद फिर से endothelialization अध्ययन करने के लिए कई पशु मॉडल उपलब्ध हैं, कुछ क्योंकि शल्य सीमाओं के माउस में प्रदर्शन कर रहे हैं। इस ट्रांसजेनिक माउस लाइनों का फायदा उठाने और फिर से endothelialization की प्रक्रिया के लिए विशिष्ट जीन का योगदान की जांच करने के अवसर को नजरअंदाज। यहाँ, हम अधोमूत्र पिंडीय उदर महाधमनी बाहरी संवहनी clamping का उपयोग करने में धमनी अनाच्छादन चोट का एक अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य murine मॉडल बनाने के लिए एक कदम दर कदम प्रोटोकॉल उपस्थित थे। फाइब्रिनोजेन और β-catenin के लिए घायल aortas के Immunocytochemical धुंधला हो जाना एक समर्थक थ्रोम्बोटिक सतह एक के जोखिम का प्रदर्शनक्रमशः बरकरार endothelium की सीमा घ। यहाँ प्रस्तुत विधि ट्रांसजेनिक माउस मॉडल में धमनी अनाच्छादन चोट लगाने के लिए एक विशिष्ट व्यावहारिक उपकरण बनाने, गति, उत्कृष्ट समग्र जीवित रहने की दर, और रिश्तेदार तकनीकी आसानी के फायदे हैं। इस विधि का प्रयोग, जांचकर्ताओं को सामान्य या रोग की स्थिति के तहत फिर से endothelialization के तंत्र को स्पष्ट कर सकता है।
Introduction
घनास्त्रता और restenosis जो इस तरह के endovascular बैलून एंजियोप्लास्टी और स्टेंटिंग 1,2 के रूप में percutaneous संवहनी हस्तक्षेप से गुजरना रोगियों में गंभीर जल्दी और देर उलझने हैं। कई रणनीतियों इन जटिलताओं, विशेष रूप से दोहरी antiplatelet चिकित्सा और दवा eluting स्टेंट को संबोधित करने के लिए नियोजित किया गया है। हालांकि, छोटे फोकस घनास्त्रता और restenosis, अर्थात् endothelial सेल कवरेज (अनाच्छादन) के नुकसान का मूल कारण पर रखा गया है। अनाच्छादन चोट रक्त वाहिनियों की दीवार के लिए यांत्रिक आघात के कारण हस्तक्षेप प्रक्रियाओं का एक अनिवार्य परिणाम है। इस यांत्रिक आघात रक्त 3 घूम को होने वाले नुकसान और सुरक्षात्मक endothelial परत और तहखाने झिल्ली और संवहनी चिकनी पेशी के जोखिम को हटाने में परिणाम कर सकते हैं। इन क्षेत्रों में endothelial कोशिकाओं के नुकसान एक समर्थक थ्रोम्बोटिक और समर्थक भड़काऊ वातावरण है कि न केवल प्लेटलेट आसंजन और बाद घनास्त्रता को बढ़ावा देता है बनाता है, लेकिन एकLSO प्रवास और संवहनी चिकनी मांसपेशियों neointimal मोटा होना और restenosis 4 में जिसके परिणामस्वरूप कोशिकाओं के प्रसार को उत्तेजित करता है। इन जटिलताओं, और उनके संबद्ध चिकित्सा, महत्वपूर्ण रुग्णता, सबसे विशेष रूप से आवर्तक इस्कीमिक रोग और खून बह रहा है घटनाओं है कि मानव स्वास्थ्य को प्रभावित करने के लिए नेतृत्व।
पुनः endothelialization घाव मार्जिन से denuded चोट के घनास्त्रता और restenosis 5 को रोकने में सर्वोपरि महत्व का है। शव परीक्षा परिणाम और पशु मॉडल को प्रभावी ढंग से घनास्त्रता की कम दरों का प्रदर्शन किया स्टेंट के कवरेज के साथ struts 6.7 है। दवा eluting स्टेंट, चिकनी मांसपेशियों प्रसार और neointimal हाइपरप्लासिया बाधा restenosis की दरों में कमी धमनी फिर से endothelialization में महत्वपूर्ण दोष और देर थ्रोम्बोसिस 3 की बढ़ती दरों में परिणाम के लिए तैयार कर लिया। दुर्भाग्य से, फिर से endothelialization के लिए तंत्र को समझने के लिए एक धीमी प्रक्रिया है, मोटे तौर पर एपी की कमी से सीमित किया गया हैpropriate पशु मॉडल 8।
Endothelial कोशिकाओं और धमनी की चोट के बाद संवहनी चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाओं की भूमिका को समझने के लिए कई पशु मॉडल 7,9,10 बनाया गया है। चूहे कैरोटिड धमनी गुब्बारा चोट मॉडल सबसे अच्छा विशेषता है और सकल सेलुलर और आणविक स्तर पर 11 अनाच्छादन चोट के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए नियोजित किया गया है। फिर भी, उत्कृष्ट जीवित रहने की दरों के साथ धमनी अनाच्छादन चोट का एक अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य murine मॉडल याद आ रही है और बहुत कई ट्रांसजेनिक बेहतर एकाधिक सेटिंग्स में संवहनी उत्थान को स्पष्ट करने के लिए उपलब्ध लाइनों का लाभ लेने की जरूरत है।
यह पांडुलिपि धमनी अनाच्छादन चोट है कि प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य और प्रदर्शन करने के लिए सरल है की एक murine मॉडल प्रस्तुत करता है। दृष्टिकोण कई ट्रांसजेनिक लाइनों में कम से कम रुग्णता और मृत्यु दर को दिखाया गया है। आनुवंशिक रूप से संशोधित माउस लाइनों के व्यापक संख्या के कारण, इस मॉडल के लिए इस्तेमाल किया जा सकता हैअनाच्छादन की चोट के बाद फिर से अंतर्निहित endothelialization आणविक तंत्र को स्पष्ट।
Protocol
Representative Results
Discussion
इस तरह के बैलून एंजियोप्लास्टी और स्टेंटिंग नाड़ी के रूप में percutaneous हस्तक्षेप के कारण धमनी अनाच्छादन चोट, जल्दी और देर संवहनी घनास्त्रता और restenosis में परिणाम और आवर्तक इस्कीमिक घटनाओं 3,12 करने के लिए य?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम के लिए MLIA स्वास्थ्य (HL130290) के राष्ट्रीय संस्थानों एली और पुनर्योजी चिकित्सा के EDYTHE ब्रॉड केंद्र से अनुदान द्वारा समर्थित और गधा और लक्ष्य, फिलिप जे Whitcome फैलोशिप उद्देश्य के लिए करने के लिए यूसीएलए प्रशिक्षण कार्यक्रम में स्टेम सेल अनुसंधान किया गया था, और।
Materials
| Zeiss Discovery.V12 Stereomicroscope | Zeiss | 495037-9904-000 | |
| Rodent Heated Surgical Platform | Protech International | RES4000 | Heated platform for body temperature maintenance with nosecone for anesthestic maintenance and on which surgical procedure is performed |
| Isoflurane | Henry Schein | 50033 | 4% Induction; 2.5% Maintenance |
| Isoflurane Vaporizer | Summit Medical Equipment | 470062 | |
| Stryker T/Pump Warm Water Recirculator | Kent Scientific | TP-700 | |
| Artifical Tears Lubricant Opthalmic Ointment | Akorn Animal Health | 17478-162-35 | |
| Carprieve (Carprofen) | Norbrook Laboratories | NDC 55529-131-01 | |
| Oster™ A5 Professional Animal Clipper | M.Schneider & Sons Inc. | 78005010 | Use with animal clipper size 40 |
| Adjustable Wire Retractor | Fine Science Tools | 17004-05 | |
| Schwartz Micro Serrefines – Sharp Bend | Fine Science Tools | 18052-03 | |
| Surgical Instruments | Fine Science Tools | sharp dissecting forceps, blunt forceps, fine scissors, spring scissors, hemostat | |
| 0.5% Marcaine | Hospira | 0409-1610-50 | |
| 5-0 Suture, Vicryl | Fisher Scientific | NC0189890 | tapered needle |
| Vetbond | Fisher Scientific | NC0304169 | |
| Falcon® 35 mm Not TC-Treated Easy-Grip Style Bacteriological Petri Dish | Corning | 351008 | |
| Sylgard 184 Silicone Elastomer Kit | Dow Corning | 3097358-1004 | |
| Dissecting pins | Fisher Scientific | NC9681411 | |
Riferimenti
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