MicroSecure Vitrification was developed as a non-commercial, aseptic closed vitrification device system that is compliant with FDA good manufacturing and tissue-handling practices. Due to the withdrawal of hydrophobic plugged embryo straws from the industry, the vitrification procedure was modified to include an inner seal before the standard internal cotton plug.
Klinik embriyo vitrifikasyon "açık" sistemi (yani, direkt LN 2 kişi) ultra-hızlı soğutma vitrifikasyon başarı optimize etmek için bir zorunluluk olduğunu 21. yüzyılda ve yanlış kanı ile benzersiz vitrifikasyon cihazlarının gelişimi ile gelişti. Soğutma oranları önemini çevreleyen dogması önemli kalite kontrol faktörlerini (örneğin, kullanım kolaylığı, tekrarlanabilirlik, güvenilirlik, etiketleme, güvenlik ve depolama güvenliği) gözardı teknik varyasyon ve vitrifikasyon cihazların yaratılmasına tabi güvenli olmayan uygulamalara yol açmıştır. içi ve arası teknisyen varyasyonu en aza indirmek amaçlanmıştır güvenli, güvenli, tekrarlanabilir ve güvenilir mS-VTF yönteminin geliştirilmesi için izin verilen diğer cihazların kalite kontrol kusurları anlama. içselleştirilmiş, çift renkli, sabotaj p 1) 0.3 mL'lik iyonomerik reçine embriyo saman: Aynı derecede önemli, iki var olan FDA uyumlu cihazların kullanılabilirliğini kombinetekrarlanabilir kaynak mühür potansiyeline sahip çatı etiketleme; ve 2) doğrudan çok etkili küresel vitrifikasyon cihazı yaratmak için embriyo (lar) yüklemek için, 300 mikron kimliği steril flexipettes sık kullanılan, kısaltılmış. Diğer aseptik gibi, vitrifikasyon sistemleri (örneğin, Yüksek Güvenlikli Vitrifikasyon (HSV), Rapid-i ve VitriSafe) etkin bir şekilde üreme tıbbında kullanılan, microSecure Vitrifikasyon (uS-VTF) yüksek sonrası ısınma sağkalım ve gebelik elde edebilirsiniz kanıtlamıştır kapalı sadeliği dikkat ve düşük teknik varyasyon sonuçları. dahili hidrofobik fiş ihtiva eden 0.3 mL'lik bir embriyo, saman, ticari olarak pamuk, polivinil pirolidon (PVP) fişler sahip olan bir standart semen saman ile değiştirildi, ancak, bu, kaynak sızdırmazlığı sağlamak için onun iyonomerik reçine bileşimini muhafaza. Ancak, pamuk fişler temas üzerine flexipettes sıvı-embriyo içeriğini fitil olabilir. Bir modifiye mS-VTF yöntemi ek iç kaynak içerecek şekilde adapte olduCihaz yükleme tarafında fiş önce mühür. mS-VTF prosedürüne ilave teknik adım başarılı bir uygulama, yüksek sağkalım oranları (>% 95) etkilenmez ve gebelik oranları bugün devam ediyor.
Vitrifikasyon intrasitoplazmik sperm enjeksiyonu gelişiminde beri in vitro fertilizasyon (IVF) sektöründe tek ve en etkili yardımcı üreme teknolojidir. Bugün, blastosist önceden geleneksel yavaş dondurma yöntemleriyle 1 ile ilişkili embriyo canlılığı kaybı olmadan kriyoprezerve vardır. Güvenilir sonrası ısınma embriyo sağkalım, infertilite sanayi geleneksel taze embriyo transferi daha benzer veya daha yüksek gebelik sonuçlarını verim Kriyoprezerve embriyo transfer döngüleri, tercih edilen kullanım dönüşüyor. Blastosist biyopsisi ve preimplantasyon genetik tarama (PGS) ile birlikte, vitrifikasyon öploid tek embriyo transferi 2, 3 üzerinden sağlıklı canlı doğum sonuçlarını optimize etmek için hayati bir klinik araç haline gelmiştir.
Murin embriyo vitrifikasyon, 1980'lerin ortalarında 4 geliştirildi </sup> 5 ve 1990 6 ile hayvan tarıma adapte. vitrifikasyon çözümleri buz kristali oluşumunu zarar ücretsiz metastabil glasseous devlet oluşturacak öncül dayanarak, daha verimli embriyoların tam hücresel bütünlüğünü korumak için kanıtlanmıştır. İlginçtir ki, insan embriyoloji içine vitrifikasyon umut verici kabul 21. yüzyıla kadar gerçekleştirilecek başlamadı. Vitrifikasyon kullanımını teşvik Erken yayınlar benzersiz "açık" sistem cihazlarının 7, 8, 9 gelişimi ile çakıştı. Yavaş blastosist donma gelişmeler de meydana ne zaman bir anda geldi Ancak, klinik uygulamaya vitrifikasyon benimsenmesi, yavaştı. Başarılı konvansiyonel yavaş donma hızı vitrifikasyon ek olarak, hem de Incorporat sahip embriyo kültürü sistemlerinde iyileştirmeler ile hizalandısonradan, ilkel trofoblast hem genel sağkalım gelişmiş ve blastokol-çöken yaklaşımların iyon implantasyon 10.
Son on yılda, vitrifikasyon teknoloji hızla geleneksel dondurma uygulamalarını üstlenilmekle. büyük ölçüde, bu özel vitrifikasyon cihazlarının geliştirilmesine nedeniyle oldu. Bu cihazların bazıları IVF endüstrisinde 11 kullanılan cihazlara doğasında tasarım kusurları getirerek klinik vitrifikasyon genel güvenlik, etkinlik ve verimliliğinin engelli var. Nitekim, farklı cihazlar nüansları genellikle "teknik imzalar" 12 olarak adlandırılan programlar arasında önemli teknik varyasyon, tanıtmak. Böylece, bilimsel dergiler, Visualized Deney Journal (vallahi) gibi, sonuç farklılıkları azaltmak için yardımcı olacak teknik ayrıntıları, göstermek için değerli bir kaynak olarak hizmet verebilir. Başka devam eden bir sorun olduğunu s olduğuome embriyolog bir 'açık vitrifikasyon sistemi' içinde embriyoların veya oosit "ultra-hızlı soğutma (yani, sıvı azot (LN 2) ile doğrudan embriyo temas) optimize için bir ön koşul olduğunu iddia dayalı, bugün bile, yanlış bilgilendirilmiş devam başarı oranları. " Açıkçası, bu inanç sistemleri 13, 14, 15 kapalı aseptik kanıtlanmış başarı dayalı, yanlıştır.
Vitrifikasyon kriyobiyolojik ilkelerine dayanarak, vitrifikasyon etkinliği oranları 16, 17, 18, soğutma ziyade ısınma oranları üzerine daha çok bağlıdır. Genel olarak, kullanılan vitrifikasyon cihazdan bağımsız, ısınma oranı yüksek hayatta kalma oranlarını sağlamak için soğutma hızını aşması gerekmektedir. Yüksek ısınma oranları herhangi bir buz büyüme (yani recr için fırsat aza indirmekısınma devitrifikasyon aşamasında cryo çözümler çekirdekli kirliliklerin) ve ystallization. Verilen vitrifikasyon solüsyonu (yani, tipi ve kullanılan donmaya karşı koruyucu ajanların konsantrasyonu) kararlılığı bir karıştırıcı etkisi olabilir, ama bu ayrı bir yayın 11 ele alınmaktadır. Soğutma ısınma oranı sorunları göz önüne alındığında, MicroSecure Vitrifikasyon (uS-VTF) vitrifikasyon kalite kontrol yönlerini optimize ucuz, ticari olmayan, FDA uyumlu bir yöntem olarak 2008 yılında geliştirilmiştir. O kurcalamaya dayanıklı, içselleştirilmiş, çift renkli etiketleme teklif benzersiz oldu. Ayrıca, yükleme ve (ikincil aygıt yüzeyine pipetleme olmadan, yani) pipetleme için kullanılan steril flexipette doğrudan embriyoların saklayarak ve otomatik macunu kullanarak tamamen kaynak mühür, teknik varyasyon etkili bir şekilde ortadan kalkmıştır iyonomerik reçine çörek kullanarak.
c değerlendirilirken1) Etiketleme potansiyel misin etiketler güvenli uyulması: potansiyel kullanım için vitrifikasyon cihazları ompleteness dahil olmak üzere dikkate alınması gereken birçok kalite kontrol faktörleri vardır? Onlar kurcalanmamasmı mı? Onlar iki renkli kimlik potansiyeli sunuyor musunuz? Bir ikincil etiket gerektirmez ve etiket kolayca kayıt tutma amacıyla (örneğin, hastanın doğrulama) sonrası ısınma için çıkarılabilir? 2) Teknik kolaylığı misin embriyolar kolayca zamanında cihaza üstüne / yüklenen ve sadece tespit ve post-ısınma izlenebilir? 3) Usul basitlik / Tekrarlanabilirlik teknisyenleri (iç) ve programlar (harici) arasındaki değişimini en aza indirir kolayca tekrarlanabilirlik sağlayan vitrifikasyon yöntemi teklif basitlik ve güvenilirlik, -Öyle? 4) LN 2 depolama kapasitesi kolayca ve güvenli bir şekilde ele ve tespit cihazları olmak misin? onların sto mıpotansiyel boşluk verimli öfke? aseptik kapalı sistem olarak fiziksel hasar veya olası kirletici cihaz teklif güvenlik ve emniyet mu? 5) Kurtarma potansiyeli / Beka -Bu cihaz embriyoların garantili kurtarma potansiyel sorunlara eğilimli tasarım ve güvenilir bir vitrifiye ve tam hücresel bütünlüğü sonrası ısınma koruyacaktır? İkincisi özel kalite kaygısı, geri kazanım oranı, aslında şaşırtıcı yayınlanan raporlarda minimize edilmiştir; Bu genellikle tipik-iyi sağkalım oranları olumsuz sonuç (yani, kayıp embriyo veya yumurta) gizleyerek yapılır. tutarsız kurtarma (<% 99) eğilimli herhangi bir cihaz ciddi kusurlu ve bir usul yükümlülüğü oluşturmaktadır.
Bizim aseptik, uS-VTF yöntemi stratejik her kalite kontrol önlemi açıklamak için geliştirilmiştir kapattı. Ancak, üstün klinik başarı ve doğrulama 14 5 yıl sonra, prosedür t vardıo modifiye olacak. (Hidrofobik fişi sahip) orijinal 0.3 mL embriyo çörek IVF sanayi kaldırılır ve standart bir pamuk / PVP fişini sahip bir 0.3 mL meni saman (yani, bir meni / embriyo saman gibi relabeled) ile değiştirilmiştir. Bu usul kağıt güvenle, sadece, ve etkili mS-VTF uygulamak için gereken belirli adımlar ve stratejileri özetlenir. Alternatif İdeal saman konteyner klinik laboratuvar geri yeniden ortaya çıkar Dahası, biz bu zamana kadar, güvenilir tedarik sınırlamaları hesaba gerekli değişiklik (ler) vurgulayın.
Bugün, tam blastosist sağkalım (>% 95) elde ve taze embriyo benzer implantasyon başarı elde yüksek bir beklenti var. Bazı gruplar vitrifiye embriyo transfer döngülerinin canlı doğum oranları bozulmamış Kriyoprezerve embriyo sağlıklı olmayan hormonal uyarılan rahim içine nakledilen taze blastokist daha yüksektir belki olduklarını ileri sürmüşlerdir. Bizim verilerimiz açıkça vitrifikasyon etkin ve güvenilir taze embriyo canlılığını koruduğunu göstermektedir. Ayrıca, MicroSecure Vitrifikasyon (uS-VTF) denilen aseptik kapalı yöntem, IVF endüstrisinde kullanılan ticari standartlara (yani, açık cihaz sistemleri) daha karşılaştırılabilir veya daha fazla optimal sonucu elde edebilirsiniz kanıtlamıştır.
Varyasyon vitrifikasyon cihazları / bir sürü yöntem kullanan bireyler arasında teknik tekrarlanabilirlik ve güvenilirlik ile ilişkilidir. Buna karşılık, bu inconsi sonuçlandıvitrifikasyona uygulama programları arasındaki stencies. Nedenle, cihaz aşinalık laboratuvar yeterlilik ve başarılı sonuçlar ile ilgili önemli bir faktör olması şaşırtıcı değildir. Bu programlar arasında tekrarlanabilirlik sorunlu olabilir açıklıyor "teknik imza" 11 Bu kavramdır. Sadece ticari cihazlar bu fenomeni karmaşık bir düzineden fazla bir gelişme var, bu kalite kontrol kaygıları yarattı. Neyse ki, mS-VTF, Rapid-I gibi, vitrifikasyon kapalı sistemler ve VitriSafe, şimdi cihaz sistemleri 12, 13, 14 açmak için eşit derecede etkili olduğunu kanıtlamaktadır.
MicroSecure VTF akılda teknik kolaylığı, güvenilirlik ve cryo-güvenlik ile geliştirilen bir roman, aseptik vitrifikasyon tekniktir. İki önceden onaylanmış, FDA uyumlu cihazların kullanımını birleştirerek, ticari olmayan bir vitrifikasyon sistemi wözel cihazların aksine, kurulu bir düşük maliyetli olan ve ayrı bir avantajı i. Buna ek olarak, eşsiz ulaşılamaz ve içselleştirilmiş çift renkli etiketleme sistemi, yanı sıra çok sayıda diğer kalite kontrol avantajları, yapmış mS-VTF çekici küresel seçenek 11. ticari olmayan bir VTF aygıtı olarak, ancak, onun yaygın sanayi uygulama yavaş yavaş gelişmektedir. Sadece emniyet, güvenlik ve klinik etkinliğinin sürekli yayın yoluyla kullanımı uS-VTF kazanç büyüyen olacaktır.
2014 yılının Ağustos ayında, zaman bir iç olmayan esneklik hidrofobik fişi ile üretilen orijinal 0.3 mL embriyo saman elde etmek için yetersizlik ile karşı karşıya, biz güvenilir uS-VTF yöntemini değiştirmek başardık. Kısacası, kendi pamuk-PVP fişleri ile yeni 0.3 mL meni / embriyo çörek etkin bir şekilde adapte edilmiştir. Bu sadece bu şekilde, pamuklu bir tıkaç önce bir iç yalıtım elde temasın önlenmesi ve sıvı ile emme ile elde edilmiştiraçık uçlu VTF ucu (yani, embriyo veya yumurta içeren flexipette). 40-mm ID çubuklar erişilebilir değilse Dahası, hafif 30 mm çubuklar ile ilişkili yüzdürme sorunu iki rulman kullanılarak Karşı ağırlıklı olabilir.
Bu ek adımlar hala son derece etkili bir tekniktir biraz daha az basit yaptık ama. onların euploidy durumu genetik raporunda teyit edilene kadar biyopsi blastosist tipik bireysel vitrifiye gibi Günümüzde, ekonomi ve etkinliği, giderek daha önemli kaygıları haline gelmektedir. bir teyit cansız anöploidi durumu ile blastosist genellikle hafta içinde, hasta onayı ile atılır olsun. Böylece, VTF cihazların bir çoğunluğu (>% 50) ticari cihazlar kullanarak tırmanan yıllık maliyeti neden kısa süreli depolamadan sonra atılır. Genel olarak, uS-VTF de insan blastosistleri, kriyokorunması için bir, yüksek etkili, güvenilir ve tekrarlanabilir bir işlemdir. üstün kalite-kontrol tasarımı securelkurtarma hatasını ortadan kaldırılması ve embriyo vitrifikasyon evrensel bir yaklaşım olarak sistemin kullanımını haklı sonrası ısınma sağkalım ve canlılığı, optimize ederken güvenle y etiketleri ve embriyolar / oosit saklar.
The authors have nothing to disclose.
MC Schiewe analiz ve yıllık CDC ve SART verilerini değerlendirirken yaptığı istatistiksel uzmanlık için Las Vegas Doğurganlık Merkezi'nde Sayın Orman Garner teşekkür etmek istiyorum. Ayrıca, yazarlar teknik yetenekleri ve uzmanlık onun özel destek ve inanç için onların Tıp Direktörü Dr. Robert E. Anderson, teşekkür etmek istiyorum.
Aluminum Cane | IVM | XC055 | ||||
Ball bearings, 3/32" | VXB.com | KIT15977 | stainless steel | |||
CBS semen/embryo straw, 0.3ml | CryoBioSystems | 25292 | individual sterile | |||
Color, ID rods, 30 mm | CryoBioSystems | 019021-26 | weighted | |||
Culture tubes, 15ml | Falcon | 352099 | Conical | |||
Culture tubes, 10ml | Falcon | 352057 | Snap-cap | |||
Cryosleeves | Nalgene | 5016-001 | ||||
Filter, 250ml | Fisher Sci. | 09-740-2A | 0.22 μm | |||
Flasks, Tissue Culture 50ml | Falcon | 353014 | ||||
Flexipettes, 300μm ID | Cook Med. | K-FPIP-1300-10BS-5 | Sterile, 20/pack | |||
Forcep, Large | Miltex | 6-30TC | ||||
Forcep,Splinter – fine | Miltex | 17-305 | ||||
Goblet | IVM | PA003 | ||||
Heat Sealer, SYMS 1 | CryoBioSystems | 16399 | 110V or 220V with adapter | |||
Hepes-buffered media | Life Global or | LGGH-100; 100ml, or | stored at 2-8ºC | |||
Irvine Scientific | H-HTF; 90126; 100ml | with non-essential AA's | ||||
Labels, Cryo | GA International | CL-23T1 | Various colors | |||
Liquid Nitrogen Tank, 40L | MVE or Taylor Warton | various | liquid storage | |||
LN2 Dewar flask, 0.5L | Hampton Research | HR4-695 | Stainless steel | |||
6-well Custer Dishes | Biogenics | 015/020 | plasticware by case | |||
Pipette Bulb, Micro Cap | Drummond | Fisher#13681451 | Hole on bulb apex | |||
Petri Dishes, 35mm | Falcon | 351006 | ||||
Petri Dishes, 58mm | Nunc | 150288 | ||||
Petri Dishes, 100mm | Falcon | 351029 | ||||
Pipette Tips, ART long | Fisher Sci. | 02-707-80 | 10-100μl | |||
Pipet Aid | Drummond or Falcon | various | rechargeable | |||
Pipetting Device, Stripper | Cooper Surgical | MXL3-STR | ||||
Pipettes, Serological 1ml | Falcon | 357521 | ||||
Pipettes, Serological 2ml | Falcon | 357507 | ||||
Pipettes, Serological 5ml | Falcon | 357543 | ||||
Pipettes, Serological 10ml | Falcon | 357551 | ||||
Scissors, Surgical Mayo | Miltex | 5-SC-16 | ||||
Stereomicroscope | Nikon, Olympus, Leica | various | ||||
Sterile Gauze pads, 4"x4" | Kendall Healthcare | 6939 | ||||
Synthetic serum | Life Global or | LGPS-20 ; 20ml, or | stored at 2-8ºC | |||
Irvine Scientific | SS-99193; 12 x 10ml | purchase low endotoxin lot | ||||
Sucrose | Sigma Chemical Co. | #S9378 | Aliquot into 50ml flasks, 1year | |||
17.1g/flask +Medium to 50ml | ||||||
makes a 1M solution | ||||||
Filter with 0.22µm unit | ||||||
Timer | Nalgene | 5016-001 | ||||
Thawing Solution | Innovative | BL-TS | T1, T2, T3, T4 | |||
Cryo Enterprises | (≤1.0M Sucrose) | stored at 2-8ºC for ≤1 month after opening | ||||
Vitrification Solution*,** | Innovative | BL-VS | V1, V2, V3 | |||
Cryo Enterprises | (≥7.9M [Glycerol/EG]) | stored at 2-8ºC for ≤1 month after opening | ||||
* Non-permeating cryoprotective additives may include: sucrose, ficoll and sodium hyaluronate | ||||||
** other commercial preparations are typically ethylene glycol (EG)/dimethyl sulfoxide (DMSO; 30% v/v; 4.8M), but could be EG/propylene glycol (32% v/v; 5.2M). Mixed solutions are typically used to reduce cryo-toxicity concerns of a high molar solution. Commercial solutions typically include an ES and VS solution. The formulation of commercial preparation is typically proprietary property. |