इनाम व्यवहार की मांग में बदलाव को मापने के लिए उपयोग कर एक सरल तरीका<em> ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर</em
Summary
हम पुरस्कृत उत्प्रेरण और फल मक्खियों (ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर) इनाम राज्यों में परिवर्तन के लिए एक उपाय के रूप में स्वैच्छिक इथेनॉल की खपत का उपयोग करने में अनुभवों nonrewarding के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन है।
Abstract
हम इनाम राज्यों में परिवर्तन के लिए एक प्रॉक्सी के रूप में फल मक्खियों में इथेनॉल आत्म प्रशासन (ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर) को मापने के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन है। हम, मक्खी इनाम प्रणाली में नल प्राकृतिक इनाम से संबंधित अनुभवों को संशोधित करने, और इनाम राज्यों में परिवर्तन के लिए एक उपाय के रूप में स्वैच्छिक इथेनॉल की खपत का उपयोग करने के लिए एक आसान तरीका प्रदर्शित करता है। दृष्टिकोण न्यूरॉन्स और जीन है कि आंतरिक स्थिति का अनुभव की मध्यस्थता परिवर्तन में एक भूमिका निभा अध्ययन करने के लिए एक प्रासंगिक उपकरण के रूप में कार्य करता है। प्रोटोकॉल दो असतत भागों से बना है: पुरस्कृत और nonrewarding अनुभवों को मक्खियों को प्रकाश में लाने, और प्रेरणा का एक उपाय एक दवा इनाम प्राप्त करने के लिए के रूप में स्वैच्छिक इथेनॉल खपत परख करने की क्रिया। दो भागों, आगे बहाव assays के लिए एक प्रारंभिक कदम के रूप में या एक स्वतंत्र दो विकल्प खिला परख के रूप में अनुभव के मॉडुलन प्रेरित करने के लिए क्रमश: स्वतंत्र रूप से इस्तेमाल किया जा सकता है। प्रोटोकॉल एक जटिल सेटअप की आवश्यकता नहीं है और इसलिए किसी भी laborator में लागू किया जा सकता हैबुनियादी मक्खी संस्कृति उपकरणों के साथ वाई।
Introduction
अनुभव के जवाब में व्यवहार के संशोधन जानवरों को उनके पर्यावरण 1 में परिवर्तन करने के लिए उनके व्यवहार को समायोजित करने की अनुमति देता है। इस प्रक्रिया के दौरान, जानवरों के बाहरी वातावरण की बदलती परिस्थितियों के साथ अपने आंतरिक शारीरिक स्थिति को एकीकृत करने और बाद में अस्तित्व और प्रजनन के अपने अवसरों को बढ़ाने के लिए एक दूसरे पर कार्रवाई चुनें। इनाम प्रणाली है कि इस तरह के खाने या पीने, या उन है कि लंबी अवधि के अस्तित्व को सुनिश्चित है, इस तरह के यौन व्यवहार या वंश 2 के लिए देखभाल के रूप में के रूप में व्यवहार कि तत्काल अस्तित्व को बढ़ाने, मजबूत करके व्यक्तियों और प्रजातियों के अस्तित्व के लिए आवश्यक हैं व्यवहार को प्रेरित करने के लिए विकसित किया गया। इस तरह के दुरुपयोग की दवाओं के रूप में कृत्रिम यौगिकों भी सह चुनने तंत्रिका रास्ते है कि प्राकृतिक पुरस्कार 2 मध्यस्थता द्वारा इनाम सिस्टम प्रभावित करते हैं।
पिछले दो दशकों के दौरान, फल molec के अध्ययन के लिए उड़ान भरने के लिए ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर एक होनहार मॉडल के रूप में स्थापित कर दिया गया हैular और neuronal तंत्र है कि व्यवहार 3,4 पर इथेनॉल के प्रभाव को आकार देने रहे हैं।
इससे पहले, हम दवा पुरस्कार 5 प्राप्त करने की प्रेरणा के लिए एक (एनपीएफ / एनपीएफ रिसेप्टर (आर) न्यूरॉन्स) मक्खियों में पेप्टिडर्जिक न्यूरॉन्स के सबसेट इस तरह के यौन अनुभव के रूप में है कि कुछ प्राकृतिक पुरस्कार, की पहचान की है। एनपीएफ अभिव्यक्ति दोनों यौन अनुभव करने के लिए और इस तरह इथेनॉल नशे के रूप में दवा पुरस्कार, के प्रति संवेदनशील है। एनपीएफ अभिव्यक्ति के स्तर में परिवर्तन इथेनॉल आत्म प्रशासन 5, जहां उच्च एनपीएफ कम कर देता है और कम एनपीएफ इथेनॉल का उपभोग करने के लिए वरीयता बढ़ जाती है में परिवर्तन करने के लिए परिवर्तित कर रहे हैं। के रूप में वे एक गंध सक्रियण, जो भी कम इथेनॉल की खपत से परिलक्षित होता है के साथ रखा के लिए मजबूत वरीयता प्रदर्शित एनपीएफ न्यूरॉन्स को सक्रिय करने, मक्खियों के लिए फायदेमंद है। इससे भी महत्वपूर्ण बात, एनपीएफ न्यूरॉन्स की सक्रियता के मक्खियों की क्षमता इथेनॉल नशा और एक गंध क्यू के बीच एक सकारात्मक सहयोग के लिए फार्म के साथ हस्तक्षेप। एनपीएफ / आर के बीच कारण लिंकप्रणाली, इनाम स्मृति, और इथेनॉल की खपत पता चलता है कि एक इनाम राज्यों 5 में परिवर्तन के लिए एक उपाय के रूप में इथेनॉल आत्म प्रशासन उपयोग कर सकते हैं।
इस प्रकाशन में हम मक्खी प्राकृतिक इनाम प्रणाली और इनाम राज्यों में परख करने की क्रिया परिवर्तनों में दोहन के लिए एक एकीकृत दृष्टिकोण प्रदर्शित करता है। दृष्टिकोण दो अलग अलग हिस्सों, प्राकृतिक इनाम से संबंधित अनुभवों से छेड़छाड़ के लिए एक प्रशिक्षण प्रोटोकॉल, एक दो विकल्प केशिका फीडर परख (कैफे) के बाद इनाम राज्यों में परिवर्तन के लिए एक अनुमान के रूप में इथेनॉल आत्म प्रशासन का आकलन करने के होते हैं। कैफे परख दो बोतल चुनाव दवा आत्म-प्रशासन के लिए कृंतक अध्ययन में इस्तेमाल किया assays के अनुरूप है और मक्खियों 6 में लत की तरह व्यवहार के कुछ गुण प्रतिबिंबित करने के लिए दिखाया गया है।
Protocol
Representative Results
Discussion
Here, we illustrate the details of an integrated approach to measure alterations in reward-seeking behavior, based on previous work described by Devineni et al.6 and Shohat-Ophir et al5. The first section of the protocol uses different types of sexual interactions as the experience input, and the second section uses a two-choice feeding assay to assess the effect of experience on the preference to consume ethanol.
As shown by Devineni et al.<sup…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम लंबे समय तक चलने वाले विचार विमर्श और तकनीकी सलाह के लिए यू और ए Heberlein Devineni धन्यवाद। हम यह भी Shohat-ओपीर प्रयोगशाला के सदस्यों, ए Benzur, एल Kazaz, और ओ एसएचएलओएम, विधि का प्रदर्शन के साथ मदद के लिए धन्यवाद। विशेष सराहना प्रयोगशाला में मक्खी प्रणालियों की स्थापना के लिए एलीएजेर Costi को जाता है। इस काम में इसराइल विज्ञान फाउंडेशन (384/14) और मैरी क्यूरी कैरियर एकता अनुदान (CIG 631127) द्वारा समर्थित किया गया।
Materials
| Polystyrene 25 x 95mm Vials | FlyStuff | 32-109 | |
| narrow plastic vials flugs | FlyStuff | 42-102 | |
| Disposable Sterile Needle 18G and 27G | can be acquired by any company | 1.20 X 38mm (18Gx1 1/2") , 0.40 X 13mm (27Gx1/2") | |
| 10x75mm Borosilicate Glass Disposable Culture Tubes | kimble chase | 73500-1075 | |
| calibrated pipets 5ul (microliter) | VWR | 53432-706 | color coded white to contain 5 microliters |
| Mineral Oil | Sigma-Aldrich | M5904 | |
| Sucrose, Molecular Biology Grade | CALBIOCHEM | 573113 | |
| Yeast extract Powder for microbiology | can be acquired by any company | ||
| Ethanol | Sigma-Aldrich | 32221 | |
| standard pipette Tips (micro-pipets) | ThermScientific | T114R-Q | volume- 0.1-20 ul Ultra micro |
| IDENTI-PLUGS (Foam Tube Plugs) | Jaece | L800-A | fits opening 6 to 13mm |
| IDENTI-PLUGS (Foam Tube Plugs) | Jaece | L800-D | fits opening 35 to 45mm |
| virginator fly stock | bloomington drosophila stock center | #24638 | |
| Narrow Vials, Tray Pack (PS) | Genesee Scientific Corporation | # 32-109BR | |
| Drosophila Media Recipes and Methods | Bloomington Drosophila Stock Center | http://flystocks.bio.indiana.edu/Fly_Work/media-recipes/molassesfood.htm | |
| propionic acid | Sigma-Aldrich | P5561 | |
| phosphoric acid | Sigma-Aldrich | W290017 | |
| Methl 4-Hydroxybenzoate | Sigma-Aldrich | H3647 | |
| Agar Agar | can be acquired by any company | ||
| corn meal | can be acquired by any company | ||
| Grandma's molasses | B&G Foods, Inc | not indicated | |
| instant dry yeast | can be acquired by any company | ||
Riferimenti
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