L'invasione perineurale (PNI) è una caratteristica comune del carcinoma a cellule squamose della testa e del collo (HNSCC), che conferisce tassi di sopravvivenza più bassi. I suoi meccanismi sono poco conosciuti. Utilizzando neuriti generati da gangli murini della radice dorsale confinati in una matrice semisolida, è possibile studiare le vie coinvolte nel PNI delle linee cellulari HNSCC.
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Articolo metodologico
Un modello per perineurale Invasion in testa e del collo carcinoma a cellule squamose
In questo articolo
Sommario
Abstract
L'invasione perineurale (PNI) si trova in circa il 40% dei carcinomi a cellule squamose della testa e del collo (HNSCC). Nonostante il trattamento multimodale con chirurgia, radioterapia e chemioterapia, le recidive locoregionali e le metastasi a distanza si verificano a tassi più elevati e la sopravvivenza globale è ridotta del 40% rispetto all'HNSCC senza PNI. Gli studi in vitro dei percorsi coinvolti nell'HNSCC PNI sono stati storicamente impegnativi data la mancanza di un test coerente e riproducibile. Qui descritto è l'adattamento del test del ganglio della radice dorsale (DRG) per l'esame della PNI nell'HNSCC. In questo modello, i DRG vengono raccolti dalla colonna vertebrale di un topo nudo sacrificato e collocati all'interno di una matrice semisolida. Nei giorni successivi, i neuriti vengono generati e crescono in un modello radiale dai corpi cellulari del DRG. Le linee cellulari di HNSCC vengono quindi posizionate perifericamente attorno alla matrice e invadono preferenzialmente lungo i neuriti verso il DRG. Questo metodo consente una rapida valutazione di più condizioni di trattamento, con tassi di successo e riproducibilità dei saggi molto elevati.
Introduzione
Il carcinoma a cellule squamose della testa e del collo (HNSCC) è il sesto tumore più comune negli Stati Uniti, con 10.000 decessi all'anno a livello nazionale e 300.000 decessi all'anno in tutto il mondo1. La prognosi complessiva per l'HNSCC è rimasta invariata al 50% negli ultimi decenni. L'invasione perineurale (PNI) è una delle caratteristiche patologiche più importanti che fanno presagire una prognosi infausta nei pazienti con HNSCC. Sfortunatamente, la PNI è un'evenienza frequente nell'HNSCC e può essere riscontrata fino al 40% dei pazienti con HNSCC2,3.
PNI è il processo attraverso il quale le cellule maligne s....
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Protocollo
1. Preparazione del terreno di coltura e di Piatti (10 min)
- Aggiungere 100 ml di Modified Eagle Medium di Dulbecco (DMEM) con siero fetale bovino al 10% (FBS) per i pozzetti di una piastra a 96 pozzetti V-parte inferiore.
- Rimuovere un pre-aliquotati-fiala di circa 100 ml di matrice semisolida dal congelatore 20 ° C e posizionarlo direttamente sul ghiaccio.
NOTA: Eseguire questa prima ganglio della radice dorsale (DRG) raccolta perché la matrice semisolida dura circa 30 minuti per raggiungere stato liquido sul ghiaccio, che è necessaria per le fasi successive. Il mancato mantenimento matrice semisolida su ghiaccio in ogni momento comporterà....
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Risultati
Dopo la dissezione del DRG e il posizionamento all'interno della gocciolina di matrice, l'aspetto del dosaggio dovrebbe assomigliare alla Figura 1. Si noti che il DRG non sia perfettamente circolare, ma è centrato all'interno della gocciolina di matrice. Questo permette la conseguenza di neuriti a 360 gradi, illustrata parzialmente in figura 2. Essere consapevoli del fatto che alcune parti del DRG inviano neuriti più velocemente e in numero m.......
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Discussione
I passaggi critici all'interno del protocollo
I passi più importanti all'interno di questo protocollo sono la dissezione precisa e l'estrazione del gangli spinali. La corretta resezione della colonna vertebrale e una divisione linea mediana-longitudinale in due emi-spine sono fondamentali per ottenere un gran numero di DRG. Durante la dissezione dei singoli DRG, il ganglio non dovrebbe mai essere gestiti direttamente, ma piuttosto la fascia circostanti deve esser.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno interessi finanziari concorrenti.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato interamente supportato dal finanziamento del NIH attraverso la sovvenzione R21, "Meccanismi di invasione perineurale nel cancro della testa e del collo" e la sovvenzione di formazione NCI T32, "Formazione di ricerca post-dottorato in oncologia della testa e del collo (2T32CA060397-21)." Grazie a Richard Steiman, MD, PhD e al personale di laboratorio.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| DMEM/F-12 50/50 Miscela con L-glutammina e 15 mM HEPES | Corning Cellgro | 10-090-CV | Manassas, VA |
| Siero fetale bovino | Atlanta biologicals | S11150 | Flowery Branch, GA |
| 0,25% Tripsina-EDTA (1x) | Life Technologies Corporation | 25200056 | Grand Island, NY |
| Soluzione salina tamponata con fosfato 1x | Corning | 21-040-CM | Manassas, VA |
| Matrigel hESC-Qualif Mouse | Corning Incorporated | 354277 | Bedford, MA |
| Piastre di coltura con fondo in vetro da 35 mm irradiate con raggi gamma | MatTek Corporation | P35G-1.5-14-C | Ashland, MA |
| SteREO Discovery.V8 Microscopio operatorio | Carl Zeiss Microimaging | 495015-0021-000 | Thornwood, NY |
| Sorgente luminosa Schott ACE I | Schott | A20500 | Germania |
| CellTracker | Life Technologies Corporation | C2925 | Carlsbad, CA |
| BD Ago PrecisionGlide 18 G e 21 G | BD | 305195 | Franklin Lakes, NJ |
| Pinzetta per microdissezione Premium | Harvard Apparatus | 60-3851 | Holliston, MA |
| Forbici standard operative di alta qualità | Harvard Apparatus | 52-2789 | Holliston, MA |
| Premium Spring Scissors | Harvard Apparecchio | 60-3923 | Holliston, MA |
| Pinze per medicazione | Apparecchio Harvard | 72-8949 | Holliston, MA |
| Topi nudi atimici (002019) | Jackson Laboratory | 002019 | Bar Harbor, ME |
Riferimenti
- Jemal, A., et al. Cancer statistics, 2006. CA Cancer J Clin. 56 (2), 106-130 (2006).
- Hinerman, R. W., et al. Postoperative irradiation for squamous cell carcinoma of the oral cavity: 35-year experience. Head Neck. 26 (11), 984-994 (2004).
- R....
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Ristampe e permessi
