Derivazione delle Culture leptomeningi Explant da Postmortem cervello umano donatori

Kelsey Lee; Ou Chong Saetern; Andrew Nguyen; Leonardo Rodriguez; Birgitt Schüle

doi:10.3791/55045

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Articolo metodologico

Derivazione delle Culture leptomeningi Explant da Postmortem cervello umano donatori

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DOI:

10.3791/55045

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21 gennaio 2017

Kelsey Lee^*¹ , Ou Chong Saetern^*¹ , Andrew Nguyen¹ , Leonardo Rodriguez¹ , Birgitt Schüle¹

¹Parkinson’s Institute and Clinical Center

^* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

Il protocollo cultura leptomeningi espianto dal post-mortem cervello umano è un modo tecnicamente robusto e semplice da ricavare fibroblasti meningei fibronectina-positivo entro 6-8 settimane e crioconservazione circa 20-30 milioni di cellule.

Abstract

Anche se è stato fatto grandi progressi nella caratterizzazione clinica della malattia di Parkinson, diversi studi riportano che la diagnosi della malattia di Parkinson non è patologicamente confermato fino al 25% della malattia diagnosi clinica di Parkinson. Pertanto, tessuti raccolti da pazienti clinicamente diagnosticata la malattia di Parkinson idiopatica può avere un alto tasso di diagnosi errate; da qui in studi in vitro da tali tessuti per studiare il morbo di Parkinson in un modello preclinico può diventare inutile.

Raccogliendo leptomeningi umani post-mortem con una diagnosi neuropatologica confermata di malattia di Parkinson e caratterizzata da perdita di cellule nigrostriatale e inclusioni proteiche intracellulari chiamati corpi di Lewy, si può essere certi che parkinsonismo clinicamente osservata non è causata da un altro processo patologico di base (ad esempio tumori, arteriosclerosi).

Questo protocollo presents la dissezione e la preparazione di leptomeningi umani post mortem per la derivazione di una cultura di fibroblasti meningea. Questa procedura è robusto e ha un alto tasso di successo. La sfida della cultura è la sterilità come l'approvvigionamento del cervello non è generalmente effettuata in condizioni di sterilità. Pertanto, è importante integrare mezzi di coltura con un cocktail di penicillina, streptomicina, e amfotericina B.

La derivazione dei fibroblasti meningei dai casi autopsia confermati con la malattia di Parkinson fornisce le basi per la modellazione in vitro di malattia di Parkinson. fibroblasti meningei compaiono 3-9 giorni dopo la preparazione del campione e circa 20-30 milioni di cellule possono essere crioconservati in 6-8 settimane. La cultura fibroblasti meningeo omogeneo e le cellule esprimono fibronectina, un marker comunemente usato per identificare meningi.

Introduzione

Meningi costituiti da tre membrane che proteggono il cervello: dura madre madre, aracnoide e pia. Più recentemente, è stato riconosciuto che meningi svolgono un ruolo importante nello sviluppo del cervello e del cervello omeostasi ^1. Meningi sono derivati da mesenchimali e le cellule derivati dalla cresta neurale ed è interessante notare, è stato dimostrato che le cellule progenitrici residenti nel meningi possono dare origine a neuroni in vitro e dopo il trapianto in vivo ^{^2,} ^{^3,} ^4. Culture meningi sono stati utilizzati con successo a....