Questo protocollo descrive una procedura chirurgica per creare un modello per l'ipertensione arteriosa polmonare (PAH) indotta dal flusso nei ratti e le procedure per analizzare i principali endpoint emodinamici e istologici in questo modello.
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Articolo metodologico
Chirurgia Shunt, Destra cuore cateterizzazione, e Vascolare Morfometria in un modello di ratto per Flow-indotta ipertensione arteriosa polmonare
In questo articolo
Sommario
Abstract
In questo protocollo, la PAH viene indotta combinando un'iniezione di 60 mg/kg di monocrotalina (MCT) con un aumento del flusso sanguigno polmonare attraverso uno shunt aorto-cavale (MCT+Flow). Lo shunt viene creato inserendo un ago da 18 G dall'aorta addominale nella vena cavale adiacente. L'aumento del flusso polmonare si è dimostrato un fattore scatenante essenziale per una forma grave di PAH con fasi distinte di progressione della malattia, caratterizzata da ipertrofia mediale precoce seguita da lesioni neointimali e dalla progressiva occlusione dei piccoli vasi polmonari. Per misurare l'emodinamica del cuore destro e polmonare in questo modello, il cateterismo cardiaco destro viene eseguito inserendo una cannula rigida contenente un catetere flessibile a punta sferica attraverso la vena giugulare destra nel ventricolo destro. Il catetere viene quindi fatto avanzare nell'arteria polmonare principale e in quella più distale. L'istopatologia del sistema vascolare polmonare viene valutata qualitativamente, valutando i vasi pre- e intra-acinari in base al grado di muscolarizzazione e alla presenza di una neointima, e quantitativamente, misurando lo spessore della parete, i rapporti parete-lume e il punteggio di occlusione.
Introduzione
L'obiettivo di questo metodo è quello di creare un modello riproducibile per grave ipertensione arteriosa polmonare indotto dal flusso in ratti e misurare il suo principio emodinamico e finale istopatologici.
Arteriosa polmonare (PAH) è una sindrome clinica che comprende un progressivo aumento della resistenza vascolare polmonare che porta a insufficienza ventricolare destra e di morte. All'interno dello spettro malattia sovraordinata malattie ipertensive polmonari (PH), PAH è la forma più grave e uno che rimane senza cura 1. L'arteriopatia sottostante PAH è caratterizzata da una forma tipica di rimodel....
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Protocollo
Le procedure che coinvolgono soggetti animali sono stati approvati dal Comitato Centrale olandese per la sperimentazione animale e il Comitato Animal Care presso University Medical Center di Groningen (NL). Entrambi sono stati utilizzati ratti Wistar e Lewis con pesi tra 180 e 300 g.
1. Corpo e acclimatazione
- Dopo l'arrivo presso l'impianto di animale centrale, ratti casa in gruppi di 5 per gabbia. Nel corso di un periodo di acclimatazione di 7 giorni, abituare i ratti per la manipolazione umana, ma non eseguire alcuna procedura sperimentale.
2. Preparazione e l'iniezione di sterile ....
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Risultati
Risultati rappresentativi sono presentati nella Figura 4. I risultati presentati mostrano caratteristiche di MCT + FLOW nei ratti di Lewis nei seguenti gruppi: controllo (n = 3), MF8 (n = 5), MF14 (n = 5), MF28 (n = 5), e MF-RVF ( n = 10). Le analisi statistiche sono state eseguite utilizzando il one-way ANOVA con correzione di Bonferroni.
60 mg / kg MCT e aumenta polmonare vantaggio il flusso di sangue ad un .......
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Discussione
Questo metodo descrive la procedura chirurgica di uno shunt aorto-cavale nei ratti pre-trattati con MCT per creare PAH indotto dal flusso e le tecniche per valutare il principio emodinamico e punti finali istopatologici che caratterizzano PAH e questo modello.
I passaggi critici all'interno del protocollo e risoluzione dei problemi
Chirurgia e post-operatorio. Durante l'intervento shunt aorto-cavale, la fase più critica è la dissezione dell'aorta e vena .......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Questo studio è stato supportato dall'Iniziativa di Ricerca Cardiovascolare dei Paesi Bassi, dalla Fondazione Olandese per il Cuore, dalla Federazione Olandese dei Centri Medici Universitari, dall'Organizzazione Olandese per la Ricerca e lo Sviluppo Sanitario e dall'Accademia Reale delle Scienze dei Paesi Bassi (CVON nr. 2012-08, PHAEDRA, The Sebald fund, Stichting Hartekind).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Shunt Surgery | |||
| Guanti | |||
| Duratears Unguento per gli occhi | Alcon | 10380 | |
| Cloruro-Esadina | |||
| Tamponi | |||
| Colla tissutale istoacrilica | B. Braun Medical | 1050052 | |
| Silkam 5-0 suture nere non riassorbibili | B. Braun Medical | F1134027 | |
| Suture Safil 4-0 viola riassorbibili | B. Braun Medical | ||
| 18 G ago | Luer | NN1838R punta BD | piegata in orifizio di 45 gradi verso l'esterno |
| Garze 10 x 10 cm | Paul Hartmann | 407825 | |
| Temgesic Buprenorphine | RB Pharmaceuticals | 5429 | sottocutaneo iniezione |
| Cloruro di Sodio 0,9% | |||
| Maschera di ventilazione Lama | |||
| AgnTho | 64-562 | ||
| Tappetino | |||
| Kocher Clamp | |||
| Macchina | |||
| Microscopio | Leica | ||
| Cateterismo cardiaco destro | |||
| Guanti | chirurgici sterili | ||
| Unguento per gli occhi | Duratears | ||
| Cloruro-Esadina | |||
| Cotton fioc | |||
| Garze 10 x 10 cm | Paul Hartmann | 407825 | |
| Silkam 5-0 suture nere non riassorbibili | B. Braun Medical | F1134027 | |
| Ago 20 G | Luer | Punta leggermente piegata verso l'interno | |
| Cannula 20 G | Luer | per introdurre il catetere, punta preformata in 20 gradi | |
| Catetere Silastico lungo 15 cm Sfera da | 0,5 mm a 2 mm dalla punta | ||
| Trasduttore di pressione | Ailtech | ||
| Monitor da comodino Cardiocap/5 | Datex-Ohmeda | ||
| Rasatrice | |||
| Siringa | |||
| Cloruro di sodio 0,9% | per lavaggio | ||
| Morfologia vascolare | |||
| 50 mL Siringa | |||
| % Formaldeide | |||
| 18 G cannula con tubo | |||
| Kit colorazione Verhoef | Sigma-Aldrich | HT254 | http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/ht254?lang=en®ion=US |
| Scanner digitale per vetrini | Hamamatsu | C9600 | |
| ImageJ | |||
| Elastic (colorazione del tessuto connettivo) | Abcam | ab150667 | http://www.abcam.com/elastic-connective-tissue-stain-ab150667.html http://www.abcam.com/ps/products/150/ab150667/documents/ab150667-Elastic%20Stain%20Kit%20(sito web).pdf |
Riferimenti
- Hoeper, M. M., Bogaard, H. J., Condliffe, R., et al. Definitions and diagnosis of pulmonary hypertension. J Am Coll Cardiol. 62, D42-D50 (2013).
- Stacher, E., Graham, B. B., Hunt, J. M., et al. Modern age pathology of pulmonary arterial hypertension. Am J Respir Crit ....
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Ristampe e permessi
