定量的および前臨床治療の縦評価のための転移性腎細胞癌の同系マウスモデル
Summary
免疫適格マウスにおける腎細胞癌の同所性モデルの実装では、研究者、同じ動物における原発性腎腫瘍および肺転移の存在によって定義される臨床的に関連するシステムを提供します。このシステムは、前臨床in vivoでの様々なトリートメントをテストするために使用することができます。
Abstract
腎細胞癌（RCC）は、毎年米国では> 60,000人に影響を与え、〜RCC患者の30％が診断時に複数の転移を持っています。転移性RCC（MRCC）はわずか18ヶ月の生存期間中央値と、不治です。免疫ベースの介入（ 例えば、インターフェロン（IFN）およびインターロイキン（IL）-2）MRCC患者の割合で耐久性応答、及びマルチキナーゼ阻害剤（ 例えば、スニチニブまたはソラフェニブ）または抗VEGF受容体モノクローナル抗体（モノクローナル抗体）を誘導しています完全寛解は稀であるとして、主に、緩和的。 MRCC患者のための現在の治療法ではこのような欠点は、新規治療プロトコールの開発のための理論的根拠を提供しています。 MRCCのための新たな治療法の前臨床試験における重要な構成要素は、適切な動物モデルです。人間の条件を再現有益な特徴は、任意の治療主導免疫effectoを調査するために原発性腎腫瘍、腎腫瘍転移、および無傷の免疫系を含みますR応答および腫瘍誘発性免疫抑制因子の形成。この報告書は、これらの機能のすべてを持っている同所MRCCマウスモデルを記述しています。我々は、腫瘍の腎臓の成長（プライマリサイト）と肺（転移部位）の評価に続いて、マウスの腎腺癌細胞株でRencaを使用して、腎内注入技術を説明します。
Introduction
腎細胞癌（RCC）は、悪性腎腫瘍の大部分を占め、全成人悪性疾患の約3％世界中で1、2。症状の欠如、誤診、及びRCCのために不十分なスクリーニングツールのために、患者のほぼ30％は、転移性ステージ2に進行患者の追加の20〜30％で、診断時に転移性RCC（MRCC）を呈するであろう。これらのケースは、毎年〜13,500人の死亡1、3になります。主RCCの早期発見と治療が改善したものの、RCC関連死の割合は、転移性疾患が死亡3のために主に責任があることを示唆し、増加し続けています。 RCCのための治療法の開発が発見し、標的療法と免疫療法の実施で過去10年間に進展しています。残念ながら、無進行survivAl及び高度症例の全生存率は依然として患者4、5、6の大部分のウェルの下で2年です。これらの統計は、RCCのための効果的な治療法の同定および開発へのさらなる研究の必要性を保証します。適切MRCCのための治療的介入を進めるために、疾患の翻訳関連前臨床モデルが最初に必要とされています。
高度なRCCの人間の状態を再現するために適切かつ一貫性のあるモデルの開発は、いくつかの重要な質問に対処すべきである：1）解剖学的に関連したモデルです。 2）ヒト病理と同様に腫瘍の進行をありません。 3）転移は、原発腫瘍から発生するようにしてください。そして4）原発性および転移性腫瘍の進行を経時的にモニターすることができますか？調査中の治療の種類に応じて、マウスRCCの腫瘍細胞株、ヒトRCCの腫瘍細胞株、およびヒトRCC患者由来xenogラフトは、免疫応答性や免疫不全マウスに使用することができます。無傷のおよび機能的な免疫系を有する宿主は、Balb / cマウス7の自発腎腺癌に由来するよく記載のRenca細胞株の使用を必要とする、免疫療法のいくつかの局面を評価するこれらの研究のために必要とされます。ほとんどの研究は、実験的肺「転移」8、9、10、11、12を生成する（IV）Balb / cマウスに静脈内やすい尺度局所腫瘍を形成し、又はRENCA細胞を皮下（SC）を、注入します。ヒトRCCモデル化するためのSC注入のRenca腫瘍の使用は、血管系13の不正確な神経支配を含む多くの制限を有し、微小環境14、15、及び器官の欠如/腫瘍細胞communicにおける差異エーション13、16。さらに、多くの皮下腫瘍（特にのRenca）は、一般的な臨床特性17であるイベントの研究を阻害し、遠位の臓器に転移しません。 MRCCを研究するために、RENCA細胞は、肺、腎細胞癌患者における転移の主要な場所に腫瘍負荷を確立するために静脈注射することができます。転移性腫瘍を開始する静脈注射の方法は、しかし、どのように、または、なぜ細胞が離れた部位への主要臓器（ すなわち、腎臓）から移行しているの調査を許可していません。同じ動物で明らかに両方の原発性および転移性疾患を持つモデルは、特に、転移は通常、これらの患者の死亡の原因であることを考えると、先進的な疾患の進行と治療を研究することが重要です。
私たちの研究室では、上記で概説したすべての機能を組み込んだMRCCのマウスモデルを開発しました。 PRを確立するために、imary、同所性腫瘍は、RENCA細胞を、半透明の腹膜を介し動物の腎臓に直接注入されます。左側腹部に小さな切開（ランドマークなど）、脾臓および左腎臓の可視化を可能にします。小さなゲージの針を使用して、のRenca腫瘍細胞を同所移植のために腹膜を通って腎臓に直接注入されます。腎臓カプセル18の下方にRENCA細胞を移植する他の方法と比較して、移植のこの方法は、縫合を必要としない、かなり非侵襲的であり、低痛みクラスであり、かつ時間効率的であるように、より高いスループットを可能にします練習。
肺内注入腎臓に再現原発腫瘍量（〜99％テイクレート）ならびに転移性腫瘍負荷におけるこの十分に特徴付けられたモデルの結果。このモデルの大きな利点は、免疫療法の調査を可能に、その同系の自然を含めます。その自発的な転移は、勉強しますdvanced疾患;そしてその同所移植は、疾患の進行および治療に関する解剖学的な影響をモデル化します。 RCCをターゲットに向けた治療法が大幅に前臨床開発中のこのモデルの利用の恩恵を受けるだろう。
Protocol
Representative Results
Discussion
私たちは、同所RCCマウスモデルのためのプロトコルを提示します。マウス腎臓へのマウスの腎腺癌腫瘍細胞の移植は、MRCCの臨床的に関連したモデルを提供します。このモデルは、高度なRCCの特徴であるどちらの肺、腎臓内および遠隔転移以内に原発腫瘍を生じます。本明細書に提示される説明は、免疫応答性Balb / cマウスでのRenca細胞株に特異的です。この同所性モデルを用いて、我々は、?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、国立癌研究所（R15CA173657 AWとTSGにR01CA109446へ）、（AW）はシモンズがん研究所、及びMinnestoaの大学からの補助金（TSG）は4腎臓がん財団を登るによってサポートされていました。私たちは、免疫蛍光法の支援のために博士クリスティン・アンダーソン感謝します。
Materials
| Artificial tears ophthalmic ointment | Akorn | NDC 17478-162-35 | |
| Vetbond Tissue Adhesive | 3M | CBGBIW011019 | |
| Betadine Solution (Povidone-iodine, 5%) | Purdue Products, L.P. | NDC 67618-155-32 | |
| 0.25% Marcaine (bupivavaine HCL injection) | Hospira | 0409-1587-50 | |
| Heating pad | Sunbeam | ||
| Syringes | BD | 309659 | |
| Gauze | Venture | 908291 | |
| Ketamine | Phoenix Pharmaceuticals | NDC 57319-609-02 | |
| Xylazine | Akorn | NDC 59399-111 | |
| Hank’s Balanced Salts | Sigma-Aldrich | H2387 | |
| IVIS | Caliper | ||
| D-Luciferin, Potassium Salt | GoldBio | LUCK-1G | |
| India Ink | Chartpak Inc | 44201 | |
| Scissors | |||
| Forceps | |||
| Sleeping Beauty (SB) transposon system | Neuromics | SBT0200 | |
| Renca | ATCC | CRL-2947 |
Riferimenti
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