전임상 치료의 양적 및 종 방향 평가를위한 동계 마우스 모델 전이성의 신장 세포 암

Summary

면역 적격 마우스에서 신 세포 암의 동소 모델의 구현은 연구자에게 동일한 동물의 신장 차 종양 및 폐 전이의 존재에 의해 정의 된 임상 관련 시스템을 제공한다. 이 시스템은 전임상 생체 내에서 다양한 트리트먼트를 테스트하는 데 사용할 수 있습니다.

Abstract

신장 세포 암 (RCC)는 매년 미국> 60,000명 영향을 미치며, ~ RCC 환자의 30 %는 진단 당시 여러 전이 있습니다. 전이성 신 세포 암 (mRCC)는 단지 18 개월 평균 생존 시간, 불치이다. 면역 기반 중재 (예를 들면, 인터페론 (IFN) 및 인터루킨 (IL) -2) mRCC 환자의 일부에서 영구 응답 및 multikinase 억제제 (예 sunitinib에 또는 sorafenib)을 유도 또는 항 VEGF 수용체 모노클로 날 항체 (항체)이다 대부분 완전 관해가 드문, 완화. mRCC 환자의 현재 치료에서 이러한 단점은 새로운 치료 프로토콜의 개발을위한 이론적 근거를 제공한다. mRCC위한 새로운 치료법의 임상 시험에서의 핵심 요소는 적절한 동물 모델이다. 인간의 조건을 요점을 되풀이 유익한 기능은 치료 중심의 면역 effecto을 조사하기 위해 차 신장 종양, 신장 종양 전이 및 손상 면역 시스템을 포함R 반응 및 종양 – 유도 된 면역 인자의 형성. 이 보고서는 이러한 모든 기능이있는 소성을 mRCC 마우스 모델을 설명합니다. 우리는 종양 신장 (주 사이트)의 성장과 폐 (전이성 사이트)의 평가 다음에 마우스 신장 선암 세포주 Renca를 사용하여 신장 내 주입 기술을 설명합니다.

Introduction

신장 세포 암 (RCC)는 전 세계 모든 성인 악성 종양의 악성 신장 종양의 대부분 및 약 3 % ^{1, 2를} 차지한다. 증상의 부족, 오진 및 RCC에 대한 불충분 한 심사 도구로 인해, 환자의 약 30 %는 전이성 ² 단계로 진행 환자의 추가 20 ~ 30 %로, 진단시 전이성 신 세포 암 (mRCC)와 함께 발표 할 예정이다. 이러한 경우 매년 ~ 13,500 사망 ^{1, 3} 초래한다. 이전 탐지 및 기본 RCC의 치료가 향상되었습니다 있지만, RCC 관련 사망률은 전이성 질환 사망률 ³ 크게 책임이 있다고 제안 증가하고 있습니다. RCC에 대한 치료의 개발은 발견과 표적으로 한 치료와 면역 요법의 구현 지난 10 년 동안 진행하고있다. 불행하게도, 무 진행 surviv 중알 및 고급의 경우 전체 생존 기간은 여전히 환자 ^{4, 5, 6의} 대부분 잘 아래 이년 있습니다. 이 통계는 더욱 식별에 대한 연구와 RCC에 대한 효과적인 치료법의 개발에 대한 필요성을 보증합니다. 적절하게 mRCC에 대한 치료 적 개입을 사전에 질병의 병진으로 관련 전 임상 모델이 먼저 필요하다.

적절하고 일관성있는 모델의 개발은 몇 가지 주요 질문 해결해야 고급 RCC의 인간 조건을 요점을 되풀이하기 : 1) 모델은 해부학 적으로 관련을; 2) 인간의 병리 유사하게 종양의 진행을합니까; 3) 전이는 원발 종양에서 발생합니까; 4) 기본 및 전이성 종양 진행 시간이 지남에 모니터링 할 수 있습니까? 치료의 종류에 따라, 마우스 RCC 종양 세포주 RCC 인간 종양 세포주 및 인간 RCC 환자 유래 xenog 조사되고보트는 면역 또는 면역 결핍 마우스에서 사용될 수있다. 온전한 기능적 면역 체계를 가진 호스트의 Balb / c 마우스 ^(7)의 자발 신장 선암 유래의 잘 설명 Renca 세포주의 사용을 필요로, 면역 요법의 일부 측면을 평가 이러한 연구에 필요하다. 대부분의 연구는 실험 폐 ^{"전이"8, 9, 10, 11, 12을} 생성 (IV)을 Balb / c 마우스에 정맥 쉬운 측정 로컬 종양을 형성하거나 Renca 세포를 피하 (SC)을 주입. 인간의 RCC 모델에 SC-이식 Renca 종양의 사용은 혈관 ^(13)의 부정확 한 신경 분포를 포함하여 많은 제한을 가지고, 미세 ^{14, 15,} 및 기관의 부족 / 종양 세포 COMMUNIC의 차이ATION ^{13, 16.} 또한, 많은 사우스 캐롤라이나 종양 (특히 Renca)은 일반적인 임상 특성 ¹⁷ 이벤트의 연구를 억제, 말초 장기로 전이되지 않습니다. mRCC을 연구하기 위해, Renca 세포는 RCC 환자에서 전이의 폐 – 기본 위치에 종양 부담을 수립 IV 주입 할 수있다. 전이성 종양을 시작의 정맥 주입 방법은, 그러나,의 조사를 허용하지 않는 방법,시기, 또는 세포가 먼 사이트에 주요 기관 (즉, 신장)에서 마이그레이션 이유. 같은 동물에서 분명 기본 및 전이성 질환을 가진 모델은 특히 전이는 일반적으로 이러한 환자에서 사망률의 원인 점을 감안, 고급 질병의 진행 및 치료를 연구하는 것이 중요하다.

우리 연구실은 위에서 설명한 모든 기능을 통합 mRCC의 쥐 모델을 개발했다. 홍보를 설정하려면imary, 동소 종양, Renca 세포 투광성 복막을 통해 동물의 신장에 직접 주입된다. 왼쪽 측면에 작은 절개 (랜드 마크 등) 비장과 좌측 신장의 시각화를 허용. 작은 게이지 바늘을 사용 Renca 종양 세포 주입 동소 복막을 통해 신장에 직접 주입된다. 신장 캡슐 ¹⁸ 이하 Renca 세포를 주입하는 다른 방법에 비해, 이식이 방법은, 봉합을 필요로하지 않고, 비교적 비 침습적 인 저 통증 클래스이고, 시간이 효율적으로 더 높은 처리량을 허용 연습.

폐에 주입 된 신장에서 재현 차 종양 부담 (~ 99 % 포획 비율)뿐만 아니라 전이성 종양 부하이 잘 특성화 모델 결과. 이 모델의 중요한 장점은 면역 조사를 허용, 자사의 동계 특성을 포함한다; 의 자발적인 전이는 공부하기dvanced 질환; 그 동소 이식은 질병의 진행 및 치료에 대한 해부학 적 영향을 모델링합니다. RCC를 대상으로하기위한 치료는 크게 임상 개발하는 동안이 모델의 이용 혜택을 누릴 것입니다.

Protocol

다음 프로토콜은 유도 및 실험 소성을 신장 종양 및 잠재적 자연 전이의 성장을 모니터링하기위한 실험 절차를 설명합니다. 다음 절차는 모두 실험 동물의 인도적인 사용에 관한 제도적 정책 및 승인 절차에 따라 수행됩니다. 세포주 1. 유지 관리 쥐 신장 선암 세포주를 유지 Renca은 로스웰 파크 메모리얼 연구소 (RPMI) 1640 배지를 10 % 소 태아 혈청 (FCS), 1 % 페니실린 – 스트렙토 마이신,…

Representative Results

Renca 세포의 성공적인 이식은 쥐의 폐에 신장과 전이 종양 개발에 발생합니다. 종양 베어링과 반대측 신장 적출 후, 웨트 티슈의 무게 (g)의 중량 증가 (도 1)에 기초하여 종양 부담을 입증 측정 하였다. Renca 사이토 케라틴 종양은 8, 18 염색법 (도 2)를 통해 면역에 의해 식별 될 수있다. 길이 연구, 루시퍼 라제 발현 Renca 세포주를 이식 하였다. 생…

Discussion

우리는 동소 RCC의 마우스 모델을위한 프로토콜을 제시한다. 마우스 신장에 마우스 신장 선암 종양 세포의 주입은 mRCC의 임상 관련 모델을 제공합니다. 이 모델은 고급 RCC의 특징입니다 둘 다 폐의 신장과 원격 전이가 내 차 종양 발생합니다. 본 명세서의 설명은 면역을 Balb / c 마우스에서 Renca 세포주에 특이. 이 동소 모델을 사용하여, 우리는 치료 시험 ^{17, <s…}

Materials

Artificial tears ophthalmic ointment	Akorn	NDC 17478-162-35
Vetbond Tissue Adhesive	3M	CBGBIW011019
Betadine Solution (Povidone-iodine, 5%)	Purdue Products, L.P.	NDC 67618-155-32
0.25% Marcaine (bupivavaine HCL injection)	Hospira	0409-1587-50
Heating pad	Sunbeam
Syringes	BD	309659
Gauze	Venture	908291
Ketamine	Phoenix Pharmaceuticals	NDC 57319-609-02
Xylazine	Akorn	NDC 59399-111
Hank’s Balanced Salts	Sigma-Aldrich	H2387
IVIS	Caliper
D-Luciferin, Potassium Salt	GoldBio	LUCK-1G
India Ink	Chartpak Inc	44201
Scissors
Forceps
Sleeping Beauty (SB) transposon system	Neuromics	SBT0200
Renca	ATCC	CRL-2947