מיקרוסקופית Intravital ו אינדוקציה פקיק ב התנוך של עכבר חסר שיער

Summary

המודל האוזן של העכבר SKH1-HR ^HR שיער מאפשר מיקרוסקופ פלואורסצנטי intravital מיקרו מחזורי ואינדוקציה פקיק phototoxic בלי הכנה כירורגית מוקדמת במיטה בחן כלי הדם. לכן, האוזן של העכבר ללא שיער היא מעולה במודל vivo ללמוד את יחסי הגומלין המורכבים במהלך היווצרות פקיק כלי דם, התפתחות פקיק, ו thrombolysis.

Abstract

סיבוכים טרומבוטיים של מחלות כלי דם הם גורם מוביל אחד לתחלואה ולתמותה במדינות מתועשות. בשל יחסי הגומלין המורכבים בין מרכיבי דם הסלולר בלתי תאיים במהלך היווצרות פקיק, מחקרים אמינים של הפיסיולוגיה והפתופיזיולוגיה של פקק יכולים להתבצע רק in vivo. לכן, במאמר זה מציג מודל האוזן בעכברים חסרי שיער ומתמקדת in vivo ניתוח מיקרו מחזורי, היווצרות קריש דם, והאבולוציה פקיק. באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי intravital ואת תוך הוורידים (iv) היישום של צבעי ניאון בהתאמה, ניתוח חוזר של מייקרו ב האפרכסת יכול להתבצע בקלות, ללא צורך בהכנה כירורגי. יתר על כן, המודל הזה ניתן להתאים ללימודי in vivo של נושאים שונים, כולל ריפוי פצעים, פגיעה reperfusion, או אנגיוגנזה. לסיכום, האוזן של עכברים חסרי שיער הוא מודל אידיאלי עבור ב vivמחקר o מייקרו מחזור עור בתנאים פיסיולוגיים או pathophysiological ועבור ההערכה של התגובה שלה לטיפולים מערכתיים או אקטואליים שונים.

Introduction

מטרת המאמר הנוכחי היא לתאר את הטכניקה של מיקרוסקופיה intravital להחיל את אפרכסת עכבר ללא שיער עבור תצפית ישירה וניתוח מיקרו מחזורי, היווצרות קריש דם, והאבולוציה פקיק. עם שיעור ההיארעות של 1 ב 1000, פקקת ורידים היא עדיין גורם שכיח לתחלואה. למרות אבחון, אסטרטגיות מניעות, טיפולים פותחו בשנים האחרונות, שליש פקק ורידים מבטאים כמו תסחיף ריאתי ^1. פקק עורקים משחק תפקיד קריטי מחלות לב וכלי דם, אשר הם הגורם השכיח ביותר למוות במדינות תעשייתיות. פקקת עורקים מבוסס על קרע של פלאק טרשת עורקים מעורב התקפי לב, אוטם mesenteric, חרון וחמה. כל ניתוח חושף מבני subendothelial לרכיבי דם, משנה את הדינמיקה של זרימת דם, ומשתק את החולה. בניתוח endoprosthetic של הגפיים התחתונות, לא איברransplantation ו פקק דש ניתוח הם גורמים שכיחים של סיבוכים. פקקת כלי הדם בפרט לעיתים קרובות גורם לנזק בלתי הפיך, בשל היעדר סימפטומים קליניים. כמו כן, פקקת כלי הדם ממלא שלטון מכריע בכמה מחלות, כולל ארגמנת תרומבוציטופנית טרומבוטיים, אלח דם, קרישה תוך-כלית מפושטת, תסמונת antiphospholipid, ו-ספיקה ורידית כרונית, בין היתר.

תרופות חדשות אחדות עבור הטיפול והמניעה של פקק פותחו בשנים האחרונות, אבל טסיות תרופות נגד קרישת דם עדיין יש תופעות לוואי, אנטגוניסטים חוסר, וכוללות תופעות משך זמן. ליקויים אלה להוביל לבעיות בטיפול רפואי דחוף. לפיכך, יש צורך במחקר נוסף כדי לחשוף את התהליכים המורכבים המתרחשים במהלך פקק, אשר בקושי ניתן לדמות במבחנה.

עכבר ^hr SKH1-HR השיער התגלה 1926 בגן חיות בלונדון.בשל פגם גנטי בכרומוזום 14, החיה מאבדת את הפרווה שלה אחרי יום הלידה 10. זה הופך את מיקרוסקופיה היטב vascularized אפרכסת נגישה intravital של כלי. העובי הממוצע של האוזן הוא 300 מיקרומטר. הוא מורכב משתי שכבות של הדרמיס, אשר מופרדים על ידי סחוס. בצד הגב הקמור של הסחוס, 3 חבילות וסקולרית להיכנס התנוך. קשתות וסקולריים Apical ו shunts הבסיס לחיבור שלושת חבילות. Venules יש בקטרים ​​בין 200 מיקרומטר (basal) ו 10 מיקרומטר (פסגה). נימים-מרושתים לסגור המקיפים את השיער הריק זקיקי ^2. האנטומיה של העכבר ^hr SKH1-HR שיער הופכת את אפרכסת מודל עוצמה וחסכוני למחקר פקקת.

Protocol

כל הניסויים vivo ב (7221.3-1-006 / 15) נערכו בהתאם לחקיקה גרמנית על הגנה על בעלי חיים מדריך NIH לטיפול ושימוש בחיות מעבדה (Institute of Resources בחיות מעבדה, המועצה הלאומית למחקר). שמירת 1. כללי של בעלי החיים <li style=";text-align:righ…

Representative Results

ההשפעות של טיפול הקנבינואידיים Thrombogenesis לאחר הזרקה של 0.05 מ"ל של FITC-dextran, אינדוקציה פקיק phototoxic מוביל הנגע האנדותל היווצרות תקע טסיות הקודקודית (איורים 2 ו 3). במחקר הנוכחי, אינדו…

Discussion

ישנם מספר שלבים קריטיים עבור אינדוקצית פקיק המוצלחת התנוך של עכברי ^hr SKH1-HR. לפתרון בעיות, את הצעדים המתאימים של הפרוטוקול מסומנים בסוגריים.

תנאי בחינה הם אידיאליים בחיות צעירות בגיל 4 – 6 שבועות עם cornification הנמוכה של האפידרמיס. …

Materials

SKH-1/hr mice	Charles River	477	can be purchased from other vendors
standard laboratory food	ssniff Spezialdiaeten	V1594-0	can be purchased from other vendors
operation stereomicroscope	Leica	M651/M655	can be purchased from other vendors
intravital microscope	Zeiss	Axiotech Vario 100	can be purchased from other vendors
objective (20x/0.95)	Zeiss	20x/0,50 W; Plan-NEOFLUAR	can be purchased from other vendors
objective (63x/0.95)	Zeiss	63x/0,95 W; ACHROPLAN	can be purchased from other vendors
black and white CCD-camera	Pieper	FK 6990 IQ-S	can be purchased from other vendors
DVD-recorder	Panasonic	DMR-EX99V	can be purchased from other vendors
sodium chloride	Braun	5/12612055/1011	can be purchased from other vendors
Ketamine 10%	Bela pharm	F3901-6	can be purchased from other vendors
Xylazine 2%	Bayer	6293841.00.00	can be purchased from other vendors
FITC-dextran 5%	Sigma	46945-100MG-F	can be purchased from other vendors
dexapanthenol 5% eye ointment	Bayer	6029009.00.00	can be purchased from other vendors
formaldehyde 4%	Sigma	HT501128-4L	can be purchased from other vendors
DMSO	Sigma	472301	can be purchased from other vendors
coverslips 5 x 5 x 1 mm	Menzel	L4339	can be purchased from other vendors
plasters	Leukosilk	4683400	can be purchased from other vendors
centrifuge	Beckman Coulter	CLGS 15	can be purchased from other vendors
hematology analyzer	Sysmex	KX-21 A6980	can be purchased from other vendors
EDTA-blood tube	Sarstedt	201,341	can be purchased from other vendors
cotton swabs	Sanyo	604-A-1	can be purchased from other vendors
infrared light	Beurer	5/13855	can be purchased from other vendors
single use synringe	Braun	2020-08	can be purchased from other vendors
insulin syringe	Braun	9161502	can be purchased from other vendors
disposable hypodermic needles	Braun	465 7640	can be purchased from other vendors
end-to-end capillary	Sarstedt	19,447	can be purchased from other vendors
heating plate	Klaus Effenberg	OP-T 185/03	can be purchased from other vendors
scissors 14,5 cm	Aesculap	BC259R	can be purchased from other vendors
needle Holder	Aesculap	BM081R	can be purchased from other vendors
microforceps	Aesculap	BD331R	can be purchased from other vendors
microscissors	Aesculap	OC496R	can be purchased from other vendors
scalpel 21	Dahlhausen	11.000.00.511	can be purchased from other vendors
Prolene 7-0	Ethicon	XNEH7470	can be purchased from other vendors
Prolene 6-0	Ethicon	XN8706.P33	can be purchased from other vendors
electrocautery	Servoprax	H40140	can be purchased from other vendors
acrylglass pad			integrated heating, 0,5 cm high plane