Прижизненные микроскопии и Тромб индукция в мочке из безволосой мыши

Summary

Модель уха безволосой SKH1-Hr ^ч мыши позволяет прижизненную флуоресцентную микроскопию микроциркуляции и фототоксической индукции тромба без предварительного хирургического препарата в исследуемом микрососудистом русле. Таким образом, ухо безволосой мыши является отличным в естественных условиях модели для изучения сложных взаимодействий в процессе образования тромба, микрососудистой эволюции тромба, и тромболизис.

Abstract

Тромботический осложнения сосудистых заболеваний являются одной из ведущих причин заболеваемости и смертности в промышленно развитых странах. Из – за сложные взаимодействия между клеточными и не-клеточными компонентами крови во время образования тромба, надежные исследования физиологии и патофизиологии тромбоза могут быть выполнены только в естественных условиях. Таким образом, эта статья представляет собой модель уха в безволосых мышей и фокусируется на анализе в естественных условиях микроциркуляции, образования тромбов и развития тромбов. С помощью прижизненной флуоресцентной микроскопии и внутривенного (IV) применения соответствующих флуоресцентных красителей, повторяющийся анализ микроциркуляции в предсердии легко может быть выполнен без необходимости хирургической подготовки. Кроме того, эта модель может быть адаптирована для исследований в естественных условиях различных проблем, включая заживление ран, реперфузионного повреждения, или ангиогенеза. Таким образом, ухо безволосых мышей является идеальной моделью для в ЛьвовО исследовании микроциркуляции кожи в физиологических или патофизиологических условиях и для оценки его реакции на различное системное или местное лечение.

Introduction

Целью данной статьи является описание методики прижизненной микроскопии, приложенной к ушной раковине безволосой мыши для прямого наблюдения и анализа микроциркуляции, образования тромбов и эволюции тромба. При скорости падения 1 в 1000, венозный тромбоз по-прежнему является частой причиной заболеваемости. Несмотря на то, диагностика, профилактика, стратегии и методы лечения были разработаны в последние годы, одна треть венозного тромбоза проявляется как эмболии легочной артерии ^1. Артериальный тромбоз играет важную роль в сердечно-сосудистых заболеваниях, которые являются наиболее частой причиной смерти в промышленно развитых странах. Артериальный тромбоз на основе разрыва атеросклеротических бляшек участвуют в инфарктах, мезентериальных инфарктах и ​​апоплексии. Каждая операция предоставляет субэндотелиальную структуру для компонентов крови, изменяет динамику кровотока и удерживающая пациента. В эндопротезе хирургии нижних конечностей, органы тransplantation и тромбоз лоскута хирургии являются частыми причинами осложнений. тромбоз микрососудов, в частности, часто приводит к необратимым повреждениям, из-за отсутствия клинических симптомов. Точно так же, микрососудистых тромбозов играет решающую правило в нескольких заболеваний, в том числе тромботической тромбоцитопенической пурпуры, сепсис, диссеминированного внутрисосудистого свертывания, антифосфолипидного синдрома и хронической венозной недостаточности, среди других.

Несколько новых препаратов для лечения и профилактики тромбоза были разработаны в последние годы, но антиагреганты и антикоагулянты до сих пор имеют побочные эффекты, отсутствие антагонистов, и имеют длительные эффекты продолжительности. Эти недостатки приводят к проблемам в неотложной медицинской помощи. Таким образом, необходимы дополнительные исследования, чтобы раскрыть сложные процессы , которые происходят во время тромбоза, что вряд ли может быть смоделировано в лабораторных условиях .

Голая SKH1-Hr ^час мыши была обнаружена в 1926 году в зоопарке в Лондоне.Из-за генный дефект на хромосоме 14, животное теряет шерсть после постнатального дня 10. Это делает хорошо кровоснабжение предсердия доступного для прижизненной микроскопии сосудов. Средняя толщина уха составляет 300 мкм. Она состоит из двух слоев дермы, которые отделены друг от друга хряща. На выпуклой спинной стороне хряща, 3 сосудистых пучков ввести мочку. Апикальные сосудистые дуги и базальные шунты соединяют три пачки. Венул имеют диаметры в диапазоне от 200 мкм (базальной) и 10 мкм (апикальный). Мелкоячеистые капилляры окружают пустые фолликулы волосы ^2. Анатомия голой SKH1-Hr ^часа мышей делает предсердие мощной и экономически эффективной модель для исследования тромбоза.

Protocol

Все эксперименты в естественных условиях (7221.3-1-006 / 15) были проведены в соответствии с немецким законодательством о защите животных и Руководстве NIH по уходу и использованию лабораторных животных (Институт лабораторных животных ресурсов, Национальный исследовательский совет). <p…

Representative Results

Эффекты каннабиноидов лечения на тромбообразование После инъекции 0,05 мл FITC-декстрана, фототоксические индукции тромба приводит к повреждению эндотелия и образованию пристеночного тромба (фиг.2 и 3). В настоящем иссле?…

Discussion

Есть несколько важных шагов для успешной индукции тромба в мочке уха мышей ^ч SKH1-Hr. Для устранения неполадок, соответствующие этапы протокола, указаны в скобках.

условия Экзаменационные идеальны у молодых животных в возрасте 4 – 6 недель и с низким ороговения эпидерм…

Materials

SKH-1/hr mice	Charles River	477	can be purchased from other vendors
standard laboratory food	ssniff Spezialdiaeten	V1594-0	can be purchased from other vendors
operation stereomicroscope	Leica	M651/M655	can be purchased from other vendors
intravital microscope	Zeiss	Axiotech Vario 100	can be purchased from other vendors
objective (20x/0.95)	Zeiss	20x/0,50 W; Plan-NEOFLUAR	can be purchased from other vendors
objective (63x/0.95)	Zeiss	63x/0,95 W; ACHROPLAN	can be purchased from other vendors
black and white CCD-camera	Pieper	FK 6990 IQ-S	can be purchased from other vendors
DVD-recorder	Panasonic	DMR-EX99V	can be purchased from other vendors
sodium chloride	Braun	5/12612055/1011	can be purchased from other vendors
Ketamine 10%	Bela pharm	F3901-6	can be purchased from other vendors
Xylazine 2%	Bayer	6293841.00.00	can be purchased from other vendors
FITC-dextran 5%	Sigma	46945-100MG-F	can be purchased from other vendors
dexapanthenol 5% eye ointment	Bayer	6029009.00.00	can be purchased from other vendors
formaldehyde 4%	Sigma	HT501128-4L	can be purchased from other vendors
DMSO	Sigma	472301	can be purchased from other vendors
coverslips 5 x 5 x 1 mm	Menzel	L4339	can be purchased from other vendors
plasters	Leukosilk	4683400	can be purchased from other vendors
centrifuge	Beckman Coulter	CLGS 15	can be purchased from other vendors
hematology analyzer	Sysmex	KX-21 A6980	can be purchased from other vendors
EDTA-blood tube	Sarstedt	201,341	can be purchased from other vendors
cotton swabs	Sanyo	604-A-1	can be purchased from other vendors
infrared light	Beurer	5/13855	can be purchased from other vendors
single use synringe	Braun	2020-08	can be purchased from other vendors
insulin syringe	Braun	9161502	can be purchased from other vendors
disposable hypodermic needles	Braun	465 7640	can be purchased from other vendors
end-to-end capillary	Sarstedt	19,447	can be purchased from other vendors
heating plate	Klaus Effenberg	OP-T 185/03	can be purchased from other vendors
scissors 14,5 cm	Aesculap	BC259R	can be purchased from other vendors
needle Holder	Aesculap	BM081R	can be purchased from other vendors
microforceps	Aesculap	BD331R	can be purchased from other vendors
microscissors	Aesculap	OC496R	can be purchased from other vendors
scalpel 21	Dahlhausen	11.000.00.511	can be purchased from other vendors
Prolene 7-0	Ethicon	XNEH7470	can be purchased from other vendors
Prolene 6-0	Ethicon	XN8706.P33	can be purchased from other vendors
electrocautery	Servoprax	H40140	can be purchased from other vendors
acrylglass pad			integrated heating, 0,5 cm high plane