Microscopie intravitale et thrombus induction dans le lobe de l'oreille d'une souris sans poils
Summary
Le modèle de l' oreille de la souris sans poils SKH1-Hr permet la microscopie à fluorescence intravitale de la microcirculation et phototoxique induction de thrombus sans préparation chirurgicale préalable dans le lit microvasculaire examiné. Par conséquent, l'oreille de la souris sans poil est un excellent modèle in vivo pour étudier les interactions complexes pendant la formation de thrombus microvasculaire, l' évolution de thrombus et thrombolyse.
Abstract
complications thrombotiques des maladies vasculaires sont une des principales causes de morbidité et de mortalité dans les pays industrialisés. En raison des interactions complexes entre les composants sanguins cellulaires et non cellulaires pendant la formation de thrombus, des études fiables de la physiologie et physiopathologie de la thrombose ne peut être effectuée in vivo. Par conséquent, cet article présente un modèle de l' oreille chez les souris sans poil et se concentre sur l'analyse in vivo de la microcirculation, la formation de thrombus et de l' évolution de thrombus. En utilisant la microscopie à fluorescence intravitale et l'application par voie intraveineuse (iv) des colorants fluorescents respectifs, une analyse répétitive de la microcirculation dans l'oreillette peut facilement être réalisé sans la nécessité d'une préparation chirurgicale. En outre, ce modèle peut être adapté pour des études in vivo de différentes questions, y compris la cicatrisation des plaies, des lésions de reperfusion, ou angiogenèse. En résumé, l'oreille des souris sans poils est un modèle idéal pour la viv eno Etude de la microcirculation cutanée dans des conditions physiologiques ou physiopathologiques et pour l'évaluation de sa réaction à différents traitements systémiques ou topiques.
Introduction
Le but de l'article est de décrire la technique de microscopie intravitale appliquée à l'auricule de la souris sans poils pour l'observation directe et l'analyse de la microcirculation, la formation de thrombus et de l'évolution de thrombus. Avec un taux d'incidence de 1 sur 1000, la thrombose veineuse est encore une cause fréquente de morbidité. Bien que le diagnostic, les stratégies de prévention et les thérapies ont été développées ces dernières années, un tiers de la thrombose veineuse se manifeste par une embolie pulmonaire 1. La thrombose artérielle joue un rôle essentiel dans les maladies cardio-vasculaires, qui sont la cause la plus fréquente de décès dans les pays industrialisés. thromboses artérielles basée sur la rupture des plaques d'athérosclérose est impliqué dans les crises cardiaques, infarctus mésentérique, et apoplexie. Chaque chirurgie expose les structures sous-endothéliales aux composants sanguins, modifie la dynamique de la circulation sanguine, et immobilise le patient. En chirurgie endoprothétique du membre inférieur, organe transplantation et thrombose chirurgie du lambeau sont des causes fréquentes de complications. thrombose microvasculaire en particulier provoque souvent des dommages irréversibles, en raison de l'absence de symptômes cliniques. De même, la thrombose microvasculaire joue une règle essentielle dans plusieurs maladies, y compris purpura thrombotique thrombocytopénique, la septicémie, la coagulation intravasculaire disséminée, syndrome des antiphospholipides, et l'insuffisance veineuse chronique, entre autres.
Plusieurs nouveaux médicaments pour le traitement et la prévention de la thrombose ont été développées ces dernières années, mais les médicaments antiplaquettaires et les anticoagulants encore avoir des effets secondaires, les antagonistes manquent, et présentent des effets de longue durée. Ces carences entraînent des problèmes dans les soins médicaux d'urgence. Ainsi, il faut plus de recherches pour découvrir les processus complexes qui se produisent pendant la thrombose, qui peut difficilement être simulé in vitro.
La souris sans poils SKH1-Hr a été découvert 1926 dans un zoo à Londres.En raison d'un défaut de gène sur le chromosome 14, l'animal perd sa fourrure après jour post-natal 10. Cela rend le bien vascularisé auricule accessible à la microscopie intravitale des vaisseaux. L'épaisseur moyenne de l'oreille est de 300 um. Il se compose de deux couches de derme, qui sont séparés par du cartilage. Sur la face dorsale convexe du cartilage, 3 faisceaux vasculaires entrent dans le lobe de l'oreille. arcs vasculaires apical et shunts de base relient les trois faisceaux. Les veinules ont des diamètres compris entre 200 pm (de base) et 10 um (apical). Capillaires gros maillés entourent les follicules pileux vide 2. L'anatomie de la souris sans poils SKH1-Hr fait l'auricule un modèle puissant et rentable pour la recherche sur la thrombose.
Protocol
Representative Results
Discussion
Il y a plusieurs étapes critiques pour l'induction de thrombus réussie dans le lobe de l' oreille de souris SKH1-Hr. Pour le dépannage, les étapes respectives du protocole sont indiqués entre parenthèses.
conditions d'examen sont idéales chez les jeunes animaux à l'âge de 4 – 6 semaines et avec une faible kératinisation de l'épiderme. Chez les animaux plus âgés, la qualité de la visualisation des vaisseaux est pire et moins comparables en raison d…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Les auteurs ont pas accusés de réception.
Materials
| SKH-1/hr mice | Charles River | 477 | can be purchased from other vendors |
| standard laboratory food | ssniff Spezialdiaeten | V1594-0 | can be purchased from other vendors |
| operation stereomicroscope | Leica | M651/M655 | can be purchased from other vendors |
| intravital microscope | Zeiss | Axiotech Vario 100 | can be purchased from other vendors |
| objective (20x/0.95) | Zeiss | 20x/0,50 W; Plan-NEOFLUAR | can be purchased from other vendors |
| objective (63x/0.95) | Zeiss | 63x/0,95 W; ACHROPLAN | can be purchased from other vendors |
| black and white CCD-camera | Pieper | FK 6990 IQ-S | can be purchased from other vendors |
| DVD-recorder | Panasonic | DMR-EX99V | can be purchased from other vendors |
| sodium chloride | Braun | 5/12612055/1011 | can be purchased from other vendors |
| Ketamine 10% | Bela pharm | F3901-6 | can be purchased from other vendors |
| Xylazine 2% | Bayer | 6293841.00.00 | can be purchased from other vendors |
| FITC-dextran 5% | Sigma | 46945-100MG-F | can be purchased from other vendors |
| dexapanthenol 5% eye ointment | Bayer | 6029009.00.00 | can be purchased from other vendors |
| formaldehyde 4% | Sigma | HT501128-4L | can be purchased from other vendors |
| DMSO | Sigma | 472301 | can be purchased from other vendors |
| coverslips 5 x 5 x 1 mm | Menzel | L4339 | can be purchased from other vendors |
| plasters | Leukosilk | 4683400 | can be purchased from other vendors |
| centrifuge | Beckman Coulter | CLGS 15 | can be purchased from other vendors |
| hematology analyzer | Sysmex | KX-21 A6980 | can be purchased from other vendors |
| EDTA-blood tube | Sarstedt | 201,341 | can be purchased from other vendors |
| cotton swabs | Sanyo | 604-A-1 | can be purchased from other vendors |
| infrared light | Beurer | 5/13855 | can be purchased from other vendors |
| single use synringe | Braun | 2020-08 | can be purchased from other vendors |
| insulin syringe | Braun | 9161502 | can be purchased from other vendors |
| disposable hypodermic needles | Braun | 465 7640 | can be purchased from other vendors |
| end-to-end capillary | Sarstedt | 19,447 | can be purchased from other vendors |
| heating plate | Klaus Effenberg | OP-T 185/03 | can be purchased from other vendors |
| scissors 14,5 cm | Aesculap | BC259R | can be purchased from other vendors |
| needle Holder | Aesculap | BM081R | can be purchased from other vendors |
| microforceps | Aesculap | BD331R | can be purchased from other vendors |
| microscissors | Aesculap | OC496R | can be purchased from other vendors |
| scalpel 21 | Dahlhausen | 11.000.00.511 | can be purchased from other vendors |
| Prolene 7-0 | Ethicon | XNEH7470 | can be purchased from other vendors |
| Prolene 6-0 | Ethicon | XN8706.P33 | can be purchased from other vendors |
| electrocautery | Servoprax | H40140 | can be purchased from other vendors |
| acrylglass pad | integrated heating, 0,5 cm high plane |
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