Questo protocollo descrive cloacal massaggio, tecnica manuale non invasiva per la raccolta di sperma da uccelli ed estrazione di DNA da aviaria dello sperma usando un kit di estrazione commerciale con modifiche.
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Articolo metodologico
Raccolta dello sperma aviaria Cloacal massaggi e isolamento di DNA da sperma
In questo articolo
Sommario
Abstract
Raccolta di sperma può essere utile per una vasta gamma di applicazioni, tra cui studi su qualità dello sperma, sperma del telomero dinamiche e l'epigenetica. Gli uccelli sono soggetti ampiamente usati nella ricerca biologica e sono ideali per studi condotti su campioni di sperma ripetuti. Tuttavia, poche risorse sono disponibili per coloro che desiderano imparare a raccogliere ed estrarre DNA da sperma aviaria. Qui descriviamo cloacal massaggio, una tecnica manuale dolce, non invasiva per la raccolta dello sperma aviaria. Anche se questa tecnica è stabilita nella letteratura, può essere difficile da imparare dalle descrizioni disponibili. Forniamo anche informazioni per l'estrazione del DNA da aviaria sperma usando un kit di estrazione commerciale con modifiche. Massaggi cloacal possono essere facilmente utilizzato su qualsiasi uccello maschio medio-piccole in condizione riproduttiva. Dopo il prelievo, lo sperma può essere utilizzato immediatamente per saggi di motilità, o bloccato per l'estrazione del DNA seguendo il protocollo descritto nel presente documento. Questo protocollo di estrazione è stato perfezionato per aviaria sperma ed è stato utilizzato con successo su campioni raccolti da diverse specie di passeriformi (Passer domesticus, Spizella passerina, Haemorhous mexicanuse Turdus migratorius ) e un columbid (Columba livia).
Introduzione
Gli uccelli sono soggetti ideali per studi su qualità dello sperma e concorso1, sperma del telomero dinamica2, epigenetica3e argomenti simili, come essi sono ampiamente utilizzati nella ricerca biologica e dello sperma può essere facilmente campionato utilizzando cloacal massaggi. Cloacal massaggio è una tecnica manuale dolce, non invasiva per la raccolta dello sperma da uccelli4,5,6. Campioni ripetuti possono essere ottenuti facilmente e attrezzi speciali non sono necessari, che lo rende semplice da eseg....
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Protocollo
Questo protocollo coinvolge soggetti animali vertebrati ed è stato approvato dal istituzionale Animal Care e uso Committee (IACUC) North Dakota State University.
1. centri di raccolta da un uccello passeriforme utilizzando cloacal massaggi
Nota: Cloacal massaggio è una tecnica di raccolta di sperma efficace sugli uccelli riproduttivo attivi solo, ma può essere eseguita correttamente di fuori della stagione riproduttiva nelle opportune situazioni in cattività. Attività riproduttiva deve essere determinata per specie di destinazione prima di utilizzare massaggio cloacal. Questa tecnica può essere utilizzata su uccell....
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Risultati
Cloacal massaggi e DNA estrazione utilizzando che il protocollo descritto è stato eseguito su diverse specie di passeriformi e uno columbid (tabella 1). Visualizzando una piccola quantità di campioni diluiti sotto un microscopio composto a 400 ingrandimenti (Figura 3) è stata confermata la presenza di spermatozoi nel seme campioni raccolti da massaggio cloacal. Dopo l'estrazione del DNA dai campioni di sperma raccolto da passeri della camera .......
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Discussione
Descriviamo un metodo semplice e affidabile per la raccolta dello sperma da uccelli di piccoli e medi in stato riproduttivo attivo ed estrazione di DNA da sperma aviaria.
Il protocollo di estrazione del DNA dello sperma descritto viene modificato da un kit per semplicità, ma è stato perfezionato per l'uso su sperma aviaria. Gli spermatozoi sono resistenti alla lisi di estrazione standard prodotti chimici9,13, e campioni di sperma racco.......
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Dichiarazioni
Gli autori dichiarano di non avere nessun concorrenti interessi finanziari.
Ringraziamenti
Grazie Jose Noguera per intervento tempestivo con massaggio cloacal, e Jeffrey Kittilson per il laboratorio di supporto. Questo lavoro è stato supportato da un premio di ND EPSCoR FAR0022429 a BJH. Spese di pubblicazione sono stati generosamente sostenute dal dipartimento di scienze biologiche di NDSU.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Provette capillari per microematocrito | Fisherbrand | 22-362566 | È possibile utilizzare qualsiasi fornitore. Provette più piccole possono essere più efficaci per la raccolta di piccoli campioni di sperma, ad esempio da uccelli passeriformi molto piccoli come il passero scheggiatore. |
| Provette per microcentrifuga | Qualsiasi | ||
| 1x PBS | Qualsiasi | Utilizzato per conservare i campioni di sperma prima dell'estrazione del DNA. | |
| DL-Dithiothreitol | Sigma-Aldrich | D0632 | |
| Tris base | Sigma-Aldrich | 10708976001 | Qualsiasi fornitore può essere utilizzato. |
| EDTA | Sigma-Aldrich | 1233508 | È possibile utilizzare qualsiasi fornitore. |
| NaCl | Sigma-Aldrich | 793566 | È possibile utilizzare qualsiasi fornitore. |
| SDS | Sigma-Aldrich | 1614363 | È possibile utilizzare qualsiasi fornitore. |
| Kit micro QIAamp DNA | Qiagen | 56304 | Il kit micro Qiagen QIAamp DNA è consigliato in modo specifico. Questo protocollo di estrazione del DNA è stato tentato con altri kit commerciali, ma con scarso successo. Le ragioni di ciò ci sono sconosciute. |
Riferimenti
- Briskie, J. V., Montgomerie, R. Sperm size and sperm competition in birds. Proc. R. Soc. B. 247, 89-95 (1992).
- Monaghan, P. Telomeres and life histories: the long and the short of it. Ann. N.Y. Acad. Sci. 1206, 130-142 (2010).
- Carrell, D. T.
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Ristampe e permessi
