Kuş sperm toplama Cloacal masaj ve Sperm DNA izolasyonu
Summary
Bu iletişim kuralı cloacal Masaj, kuşlar ve kuş sperm bir ticari ekstraksiyon kiti değişiklikleri ile kullanarak çıkarma DNA meni toplamak için bir non-invaziv el ile teknik açıklar.
Abstract
Meni topluluğu çeşitli sperm kalitesi, sperm telomer dynamics ve epigenetik ilgili çalışmalar da dahil olmak üzere uygulamalar için yararlı olabilir. Kuşlar biyolojik araştırmalarda yaygın olarak kullanılan konulardır ve tekrarlanan sperm örnekleri içeren çalışmaları için idealdir. Ancak, az kaynak şu anda toplamak ve kuş sperm DNA ayıklamak nasıl öğrenmek isteyenler için kullanılabilir. Burada cloacal Masaj, kuş sperm toplamak için bir nazik, non-invaziv el ile teknik açıklayın. Ne kadar bu teknik literatürde kurulur, kullanılabilir açıklamaları öğrenmek zor olabilir. Ayrıca DNA kuş meni bir ticari ekstraksiyon kiti değişiklikleri ile kullanarak çıkarma hakkında bilgi sağlar. Cloacal masaj kolayca herhangi bir küçük ve orta boyutlu erkek kuş üreme durumda kullanılabilir. Koleksiyon meni hemen motilite testleri için kullanılan, veya burada açıklanan protokol sonrası DNA ekstraksiyon için dondurulmuş. Bu ayıklama protokolü için kuş sperm rafine ve başarıyla birçok ötücü türü (Passer domesticus, Spizella passerina, Haemorhous mexicanusve Turdus migratorius toplanan örnekleri üzerinde kullanılan ) ve bir columbid (Columba livia).
Introduction
Sperm kalitesini ve rekabet1, sperm telomer dynamics2, epigenetik3ve benzer konular, ilgili sıra onlar biyolojik araştırmalarda yaygın olarak kullanılır ve sperm kolayca cloacal kullanarak tatmak mümkündür çalışmaları için ideal konular kuştur Masaj. Cloacal masaj meni kuşlar4,5,6toplamak için bir nazik, non-invaziv manuel tekniktir. Yinelenen örnekleri kolayca elde edilebilir ve hiçbir özel araç alan veya laboratuvar gerçekleştirmek basit yapmak gerekli. Cloacal masaj yıllardır kullanılıyor olsa da, mevcut gelen açıklamalar yazılı öğrenmek zordur. Bu yayın belirsizlik cloacal masaj öğrenmede yer ve zamanı azaltmak için tasarlanmıştır.
Meni cloacal masaj kullanarak kuşlardan toplanan hemen hareketliliği değerlendirme4,7 veya suni tohumlama8için kullanılan veya gelişmiş görüntüleme ve DNA ekstraksiyon gibi diğer kullanımlar için dondurulmuş. Sperm örneği ötücü kuşlar küçük ama yoğun paketlenmiş sperm barındırır. DNA sperm9özel koruyucu özellikleri üstesinden gelmek için değişiklikleri ile sadelik için bir ticari ekstraksiyon kiti kullanılarak elde edilir. Çıkarma sonra sperm telomerlerin qPCR10kullanılarak ölçülebilir.
Protocol
Representative Results
Discussion
Biz küçük ve orta ölçekli kuşlar üreme etkin durumda sperm toplama ve kuş sperm DNA ayıklanması için basit ve güvenilir bir yöntem açıklanmaktadır.
Açıklanan Sperm DNA ekstraksiyon protokolü bir kit basitlik için değiştirilebilir, ancak kuş meni kullanmak için rafine. Sperm lizis standart ayıklama kimyasallar9,13tarafından dayanıklı ve sperm örneği ötücüler toplanan oldukça küçük (genellikle bir ka?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ve Jeffrey Kittilson laboratuvarı için destek biz Jose Noguera cloacal Masaj, erken hakkında yardım almak için teşekkür ederiz. Bu eser bir ND EPSCoR FAR0022429 Ödülü BJH için tarafından desteklenmiştir. Yayın ücreti cömertçe NDSU bölümü Biyolojik Bilimler tarafından desteklendi.
Materials
| Microhematocrit capillary tubes | Fisherbrand | 22-362566 | Any supplier can be used. Smaller tubes may be more effective for collection of small semen samples, such as from very small passerine birds like chipping sparrow. |
| Microcentrifuge tubes | Any | ||
| 1x PBS | Any | Used for storing semen samples prior to DNA extraction. | |
| DL-Dithiothreitol | Sigma-Aldrich | D0632 | |
| Tris base | Sigma-Aldrich | 10708976001 | Any supplier can be used. |
| EDTA | Sigma-Aldrich | 1233508 | Any supplier can be used. |
| NaCl | Sigma-Aldrich | 793566 | Any supplier can be used. |
| SDS | Sigma-Aldrich | 1614363 | Any supplier can be used. |
| QIAamp DNA micro kit | Qiagen | 56304 | Qiagen QIAamp DNA micro kit is recommended specifically. This DNA extraction protocol has been attempted with other commercial kits but with little success. The reasons for this are unknown to us. |
Riferimenti
- Briskie, J. V., Montgomerie, R. Sperm size and sperm competition in birds. Proc. R. Soc. B. 247, 89-95 (1992).
- Monaghan, P. Telomeres and life histories: the long and the short of it. Ann. N.Y. Acad. Sci. 1206, 130-142 (2010).
- Carrell, D. T. Epigenetics of the male gamete. Fertility and Sterility. 97 (2), 267-274 (2012).
- Burrows, W. H., Quinn, J. P. The collection of spermatozoa from the domestic fowl and turkey. Poultry Science. 16 (1), 19-24 (1937).
- Wolfson, A. The cloacal protuberance: a means for determining breeding condition in live male birds. Bird-Banding. 23 (4), 159-165 (1952).
- Kast, T. L., Ketterson, E. D., Nolan, V. Variation in ejaculate quality in dark-eyed juncos according to season, stage of reproduction, and testosterone treatment. The Auk. 115 (3), 684-693 (1998).
- Helfenstein, F., Podevin, M., Richner, H. Sperm morphology, swimming velocity, and longevity in the house sparrow Passer domesticus. Behav. Ecol. Sociobiol. 64, 557-565 (2010).
- Purchase, C. F., Earle, P. T. Modifications to the IMAGEJ computer assisted sperm analysis plugin greatly improve efficiency and fundamentally alter the scope of attainable data. J. Appl. Icthyol. 28, 1013-1016 (2012).
- Gill, P., Jeffreys, A. J., Werrett, D. J. Forensic application of DNA ‘fingerprints’. Nature. 318 (12), 577-579 (1985).
- Criscuolo, F., et al. Real-time quantitative PCR assay for measurement of avian telomeres. J. Avian Biol. 40, 342-347 (2009).
- Lovette, I. J., Fitzpatrick, J. W. . Cornell Lab of Ornithology Handbook of Bird Biology, 3rd Edition. , (2016).
- . . QIAamp DNA Micro Handbook. , (2014).
- Carter, K. L., Robertson, B. C., Kempenaers, B. A differential DNA extraction method for sperm on the perivitelline membrane of avian eggs. Mol. Ecol. 9, 2149-2154 (2000).
- Birkhead, T. R., Buchanan, K. L., Devoogd, T. J., Pellatt, E. J., Catchpole, C. K. Song, sperm quality and testes asymmetry in the sedge warbler. Anim. Behav. 53, 965-971 (1997).
- Lüpold, S., Calhim, S., Immler, S., Birkhead, T. R. Sperm morphology and sperm velocity in passerine birds. Proc. R. Soc. B. 276, 1175-1181 (2009).
- Samour, J. H., Smith, C. A., Moore, H. D., Markham, J. A. Semen collection and spermatozoa characteristics in budgerigars (Melopsittacus undulates). Vet. Rec. 118, 397-399 (1986).
- Stelzer, G., Crosta, L., Bürkle, M., Krautwalt-Junghanns, M. E. Attempted semen collection using the massage technique and semen analysis in various psittacine species. J. Avian Med. Surg. 19 (1), 7-13 (2005).
