Инфузия протоков поджелудочной железы: эффективный и селективный метод доставки лекарств и вирусов
Summary
Инфузия протоков поджелудочной железы является важным методом, который может позволить отслеживать родословную, вводить гены и нацеливаться на клеточную линию. Здесь представлена методика инфузии протоков поджелудочной железы для доставки лекарств и вирусов к клеткам поджелудочной железы.
Abstract
Поджелудочная железа является бифункциональным органом как с эндокринными, так и с экзокринными компонентами. Ряд патологий может поразить поджелудочную железу, включая диабет, панкреатит и рак поджелудочной железы. Все эти три заболевания отмечают активные направления исследования, не только для разработки немедленной терапии, но и для лучшего понимания их патофизиологии. Существует мало инструментов для дальнейшего развития этих областей обучения. Инфузия протоков поджелудочной железы является важным методом, который может позволить отслеживать родословную, вводить гены и нацеливаться на клеточную линию. Техника требует сложного рассечения второй части двенадцатиперстной кишки и ампулы с последующим окклюзией желчного протока и канюляцией протока поджелудочной железы. Хотя поначалу техника технически сложна, приложений множество. Неоднозначность в специфике процедуры между группами подчеркнула необходимость стандартного протокола. Эта работа описывает экспрессию зеленого флуоресцентного белка (GFP) в поджелудочной железе после инфузии протока поджелудочной железы вирусного вектора, экспрессирующего GFP, по сравнению с фиктивной операцией. Инфузия и, следовательно, экспрессия специфичны для поджелудочной железы, без экспрессии, присутствующей в любом другом типе ткани.
Introduction
Поджелудочная железа является бифункциональным органом, с эндокринными и экзокринными компонентами. Ряд патологий может поразить поджелудочную железу, включая диабет, панкреатит и рак поджелудочной железы1. Все эти три заболевания отмечают активные направления исследования, не только для разработки немедленной терапии, но и для лучшего понимания их патофизиологии.
Целевой терапевтический метод доставки был бы полезен. Мы разработали методику инфузии протоков поджелудочной железы, которая является эффективным и селективным методом доставки лекарств и вирусов к клеткам поджелудочной железы. В этой модели проток поджелудочной железы избирательно канюлятируется, а общий желчный проток закупоривается, что позволяет доставлять исключительно в поджелудочную железу.
Этот метод может позволить проследить родословную конкретных типов клеток для дальнейшего выяснения путей развития, важных для развития поджелудочной железы и патологии2,3. Различные промоторы в вирусных векторах позволяют специфически нацеливаться на клеточные линии и ввести гены в эти клеточные линии4,5. Эта работа демонстрирует экспрессию зеленого флуоресцентного белка (GFP) в поджелудочной железе после инфузии протока поджелудочной железы вирусного вектора, экспрессирующего GFP, по сравнению с фиктивной операцией.
Protocol
Representative Results
Discussion
В этой работе подробно описывается методология инфузии протоков поджелудочной железы, эффективная мышиная модель для доставки генов и других молекул конкретно и эффективно в поджелудочную железу. Неоднозначность в специфике процедуры между различными группами высветила необходимо?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
У авторов нет подтверждений. Финансирование было получено от Фонда Комиссии по здравоохранению и планированию семьи провинции Чжэцзян (грант 20146242) и Фонда Научно-технического бюро Вэньчжоу (грант Y20140248).
Materials
| Mice (25-30g, 8-12 weeks old) | Jackson Laboratory | ||
| Ketofen | Henry Schein Inc. | 5487 | |
| Ethanol (70%) | Sigma-Aldrich | 34923 | |
| Sterile Saline Solution | Baxter Healthcare Corp. | 2B-13-00 | |
| Protective Equipment | |||
| Hair Removal Product | Nair or trimmer | ||
| Gauze Pads 2in x 2in | Fisher Healthcare | 22-362-178 | |
| Needles (30.5G and 25G) | Becton Dicksinson and Co. | 305106 and 305122 | |
| Syringe for Ketofen and Saline | Becton Dicksinson and Co. | 309657 | |
| Syringe for Pump | Henke Sass Wolf | 4010.200V0 | |
| Infusion Pump | Pump Systems Inc. | NE-1000 | |
| Infusion Catheter | World Precision Instruments | CMF31G | |
| Curved Bulldog Clamps (2) | Roboz | RS-7439 | |
| Arruga Forceps | Roboz | RS-5163 | |
| Adson Forcep | Roboz | RS-5234 | |
| Needle Holder | Roboz | RS-7882 | |
| Scissor | Roboz | RS-5982 | |
| Cotton Tip Applicators | Physician Sales and Services | 22-9988 | |
| Dissecting Microscope | |||
| Suture | Owens and Minor | SXMD1B402 |
Riferimenti
- Gittes, G. K. Developmental biology of the pancreas: a comprehensive review. Dev Biol. 326 (1), 4-35 (2009).
- Gu, G., Dubauskaite, J., Melton, D. A. Direct evidence for the pancreatic lineage: NGN3+ cells are islet progenitors and are distinct from duct progenitors. Development. 129 (10), 2447-2457 (2002).
- Weinberg, N., Ouziel-Yahalom, L., Knoller, S., Efrat, S., Dor, Y. Lineage tracing evidence for in vitro dedifferentiation but rare proliferation of mouse pancreatic beta-cells. Diabetes. 56 (5), 1299-1304 (2007).
- Raper, S. E., DeMatteo, R. P. Adenovirus-mediated in vivo gene transfer and expression in normal rat pancreas. Pancreas. 12 (4), 401-410 (1996).
- Xiao, X., et al. Pancreatic cell tracing, lineage tagging and targeted genetic manipulations in multiple cell types using pancreatic ductal infusion of adeno-associated viral vectors and/or cell-tagging dyes. Nat Protoc. 9 (12), 2719-2724 (2014).
- Song, Z., et al. EGFR signaling regulates beta cell proliferation in adult mice. J Biol Chem. 291 (43), (2016).
- Xiao, X., et al. M2 macrophages promote beta-cell proliferation by up-regulation of SMAD7. Proc Natl Acad Sci U S A. 111 (13), E1211-E1220 (2014).
- Laukkarinen, J. M., Van Acker, G. J., Weiss, E. R., Steer, M. L., Perides, G. A mouse model of acute biliary pancreatitis induced by retrograde pancreatic duct infusion of Na-taurocholate. Gut. 56 (11), 1590-1598 (2007).
- Lichtenstein, A., et al. Acute lung injury in two experimental models of acute pancreatitis: infusion of saline or sodium taurocholate into the pancreatic duct. Crit Care Med. 28 (5), 1497-1502 (2000).
- Perides, G., van Acker, G. J., Laukkarinen, J. M., Steer, M. L. Experimental acute biliary pancreatitis induced by retrograde infusion of bile acids into the mouse pancreatic duct. Nat Protoc. 5 (2), 335-341 (2010).
- Guo, P., et al. Specific transduction and labeling of pancreatic ducts by targeted recombinant viral infusion into mouse pancreatic ducts. Lab Invest. 93 (11), 1241-1253 (2013).
- Xiao, X., et al. Neurogenin3 activation is not sufficient to direct duct-to-beta cell transdifferentiation in the adult pancreas. J Biol Chem. 288 (35), 25297-25308 (2013).
