La evaluación simultánea de Hemodinámica cerebral y propiedades de dispersión de luz de la<em> En Vivo</em> Cerebro de rata utilizando multiespectral de imágenes de reflectancia difusa
Summary
La evaluación simultánea de la hemodinámica cerebral y las propiedades de dispersión de luz de ratas in vivo en el tejido cerebral se demuestra usando un sistema de imagen de reflectancia difusa multiespectral convencional.
Abstract
The simultaneous evaluation of cerebral hemodynamics and the light scattering properties of in vivo rat brain tissue is demonstrated using a conventional multispectral diffuse reflectance imaging system. This system is constructed from a broadband white light source, a motorized filter wheel with a set of narrowband interference filters, a light guide, a collecting lens, a video zoom lens, and a monochromatic charged-coupled device (CCD) camera. An ellipsoidal cranial window is made in the skull bone of a rat under isoflurane anesthesia to capture in vivo multispectral diffuse reflectance images of the cortical surface. Regulation of the fraction of inspired oxygen using a gas mixture device enables the induction of different respiratory states such as normoxia, hyperoxia, and anoxia. A Monte Carlo simulation-based multiple regression analysis for the measured multispectral diffuse reflectance images at nine wavelengths (500, 520, 540, 560, 570, 580, 600, 730, and 760 nm) is then performed to visualize the two-dimensional maps of hemodynamics and the light scattering properties of the in vivo rat brain.
Introduction
La imagen de reflectancia difusa multiespectral es la técnica más común para obtener un mapa espacial de señales ópticas intrínsecas (IOSs) en el tejido cortical. Los IOS observados en el cerebro in vivo se atribuyen principalmente a tres fenómenos: variaciones en la absorción de la luz y propiedades de dispersión debido a la hemodinámica cortical, variación en la absorción dependiendo de la reducción o oxidación de los citocromos en las mitocondrias y variaciones en las propiedades de dispersión de la luz inducidas por alteraciones morfológicas 1 .
La luz en el rango espectral visible (VIS) al infrarrojo cercano (NIR) es efectivamente absorbida y dispersada por el tejido biológico. El espectro de reflectancia difusa del cerebro in vivo se caracteriza por espectros de absorción y dispersión. Los coeficientes de dispersión reducidos μ s ' de tejido cerebral en el intervalo de longitud de onda VIS-a-NIR dan como resultado una exposición monótona del espectro de dispersióning magnitudes más pequeñas en longitudes de onda más largas. El coeficiente de dispersión de espectro μ reducida s '(λ) se puede aproximar a estar en la forma de la función de la ley de potencia 2, 3 como μ s' (λ) = a × λ -b. El poder de dispersión b está relacionada con el tamaño de dispersores biológicas en el tejido 2, 3 viviente. Las alteraciones morfológicas del tejido y la reducción de la viabilidad de tejido vivo cortical pueden afectar el tamaño de los dispersores biológicos 4, 5, 6, 7, 8, 9.
Un sistema óptico para obtener imágenes de reflectancia difusa multiespectral se puede construir fácilmente a partir de un li incandescentefuente de lucha, componentes ópticos simples, y un dispositivo de carga acoplada monocromática (CCD). Por lo tanto, varios algoritmos y sistemas ópticos para obtención de imágenes multiespectrales de reflectancia difusa se han utilizado para evaluar la hemodinámica corticales y / o la morfología del tejido 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18.
El método descrito en este artículo se utiliza para visualizar tanto la hemodinámica y las propiedades de dispersión de luz de tejido cerebral de rata in vivo usando un sistema de imagen de reflectancia difusa multiespectral convencional. Las ventajas de este método sobre técnicas alternativas son la capacidad de evaluar los cambios espacio-temporales en ambos hemodinámica cerebral y el tejido corticalmorfología, así como su aplicabilidad a diversos modelos animales de disfunción cerebral. Por lo tanto, el método será adecuado para las investigaciones de lesión traumática cerebral, ataque epiléptico, derrame cerebral e isquemia.
Protocol
Representative Results
Discussion
El paso más crítico en este protocolo es la eliminación de la región del cráneo adelgazada para hacer la ventana craneal; Esto debe realizarse cuidadosamente para evitar el sangrado inesperado. Este paso es importante para obtener imágenes reflectantes difusas multiespectrales de alta calidad con alta precisión. Se recomienda el uso de un estereomicroscopio para el procedimiento quirúrgico si es posible. Pequeños trozos de esponja de gelatina son útiles para la hemostasia.
El siste…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Part of this work was supported by a Grant-in-Aid for Scientific Research (C) from the Japanese Society for the Promotion of Science (25350520, 22500401, 15K06105) and the US-ARMY ITC-PAC Research and Development Project (FA5209-15-P-0175).
Materials
| 150-W halogen-lamp light source | Hayashi Watch Works Co., Ltd, Tokyo, Japan | LA-150SAE | |
| Light guide | Hayashi Watch Works Co., Ltd, Tokyo, Japan | LGC1-5L1000 | |
| Collecting lens | Hayashi Watch Works Co., Ltd, Tokyo, Japan | SH-F16 | |
| Interference filters l@500nm | Edmund Optics Japan Ltd, Tokyo, Japan | #65088 | |
| Interference filters l@520nm | Edmund Optics Japan Ltd, Tokyo, Japan | #65093 | |
| Interference filters l@540nm | Edmund Optics Japan Ltd, Tokyo, Japan | #65096 | |
| Interference filters l@560nm | Edmund Optics Japan Ltd, Tokyo, Japan | #67766 | |
| Interference filters l@570nm | Edmund Optics Japan Ltd, Tokyo, Japan | #67767 | |
| Interference filters l@580nm | Edmund Optics Japan Ltd, Tokyo, Japan | #65646 | |
| Interference filters l@600nm | Edmund Optics Japan Ltd, Tokyo, Japan | #65102 | |
| Interference filters l@730nm | Edmund Optics Japan Ltd, Tokyo, Japan | #65115 | |
| Interference filters l@760nm | Edmund Optics Japan Ltd, Tokyo, Japan | #67777 | |
| Motorized filter wheel | Andover Corporation, NH, USA | FW-MOT-12.5 | |
| 16-bit cooled CCD camera | Bitran, Japan | BS-40 | |
| Video zoom lens | Edmund Optics Japan Ltd, Tokyo, Japan | VZMTM300i | |
| Spectralon white standard with 99% diffuse reflectance | Labsphere Incorporated, North Sutton, NH, USA | SRS-99-020 |
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