Un dispositivo para realizar la migración de células / Curación de Heridas en una placa de 96 pocillos
Summary
A continuación, se presenta un protocolo para realizar un ensayo de migración celular semi-alto rendimiento en una placa de cultivo celular de 96 pocillos. Este protocolo es un método rápido, simple y económico para crear heridas arañazos consistentes en una monocapa de células.
Abstract
La migración de células / hiriendo ensayo es un método comúnmente utilizado para estudiar la migración celular y otros procesos biológicos, tales como la angiogénesis y la metástasis tumoral. En este ensayo, las células se cultivan para formar una monocapa confluente y una herida mecánica se crea por el rascado con un dispositivo. Entonces la tasa de migración de las células hacia el área denudada se puede supervisar mediante formación de imágenes. Nuestra wounder mecánica 8-canal está diseñado para hacer frente a la mayoría de los problemas asociados con el ensayo de migración celular. En primer lugar, nuestra wounder puede ser fácilmente esterilizado por autoclave o con desinfectantes comunes. En segundo lugar, las patillas ajustables individuales permiten incluso el contacto con la placa de cultivo celular de manera que las heridas agudas y reproducibles pueden ser creados. En tercer lugar, las barras de guía en ambos lados de la wounder asegurar la posición herida consistente en cada pocillo. El uso de puntas de pipeta de plástico desechables por herir pueda ampliar un mejor manejo de la wounder, así como para reducir al mínimo cruzada contamination. En conclusión, nuestro wounder célula puede proporcionar a los investigadores un dispositivo fácil y reproducible de usuario para realizar el ensayo de migración celular usando la placa de cultivo de 96 pocillos estándar.
Introduction
La migración celular juega un papel importante en los procesos celulares, tales como la embriogénesis, la neurogénesis, la angiogénesis, la curación de heridas, la reparación de la mucosa, epitelio-mesenquimal transiciones en fase de desarrollo normal y situación de la enfermedad 1. Es un proceso complicado que implica la coordinación de numerosos eventos inter e intra-celulares, incluyendo interacciones de moléculas de señalización, la polarización celular, la reorganización del citoesqueleto, remodelación de la matriz, la protrusión de la membrana y la célula-célula dinámica de adhesión de modulación 2. Mediante el estudio de la migración celular, el descubrimiento y validación de los productos químicos o biomoléculas que conducen a movimiento de la célula y sus vías bioquímicas relacionadas pueden determinarse. Este proceso fundamental se puede utilizar beneficiosamente como un proxy para diversas aplicaciones, como el tratamiento de la enfermedad y la orientación de drogas.
El ensayo hiriendo es uno de los ensayos de migración celular 3. Aquí, unamuestra individual de las células se elimina parcialmente por medios mecánicos para producir un área denudada donde las células migrarán a cubrir el área. El porcentaje de recuperación en un momento concreto, se hará. Al manejar gran número de muestras, cuestiones tales como el costo experimental y la contaminación cruzada dentro de las muestras pueden ser problemáticos. Aunque muchas herramientas comerciales y ensayos están disponibles para el estudio de la migración celular 4, 5, 6, muchos de ellos requiere un equipo costoso y sofisticado y todavía se necesitan mejoras. Por estas razones, se desarrolla un wounder celular mecánica de 8 canales (Figura 1).
Nuestra wounder celular mecánica de 8 canales ha incorporado varias características únicas en la solución de los problemas mencionados anteriormente. Proporciona la flexibilidad para llevar a cabo la migración celular / hiriendo ensayos en el formato de placa de cultivo de 96 pocillos. La gu ajustablediseño de la barra Iding asegura que el área de borrador está en la posición central de cada pocillo. Además, la altura de las barras de guía se puede ajustar de manera que el wounder es aplicable para diversas marcas de placas de cultivo. Finalmente, el diseño ajustable pin herida permite un contacto uniforme de las puntas de pipeta con la superficie de placa de cultivo para lograr herida simultánea y reproducible 7, 8.
Protocol
Representative Results
Discussion
Nuestra wounder célula tiene varias características únicas en la solución de los problemas de los ensayos de migración celular tradicionales. El wounder celular mecánica 8-canal está hecha de acero inoxidable de alta calidad (Steel 304) con una larga vida útil que se puede esterilizar en autoclave. Casi todas las marcas comerciales de placas de cultivo de 96 pocillos disponibles en el mercado se pueden utilizar con este wounder celular mecánica debido a la barra de guía ajustable. El diseño de la barra de gu?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Los autores desean agradecer al Sr. Tam Po Leung, el Sr. Wong Chi Kin y el personal técnico de la Facultad de Ciencias de taller, Hong Kong Baptist University, por sus conocimientos técnicos y asesoramiento en la fabricación del prototipo de este wounder.
Materials
| 96-well cell culture plate | Nunc | 167008 | Other brands of 96-well cell culture plate can also be used |
| P10 pipette tips | Axygen | 301-03-051 | Short P10 pipette tip is more easy to create a clear wound |
| Wounder | R&P Technology Limited | ||
| Medium 199 | Sigma | M2520-1L | For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. Use appropirate culture medium and condition for other type of cells. |
| Fetal bovine serum | Gibco | 26140079 | For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. Use appropirate culture medium and condition for other type of cells. |
| Penicillin/Streptomycin | Gibco | 15140122 | For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. Use appropirate culture medium and condition for other type of cells. |
| Heparin sodium salt from porcine intestinal mucosa | Sigma | H3393 | For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. Use appropirate culture medium and condition for other type of cells. |
| Gelatin from bovine skin | Sigma | G9391 | For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. Use appropirate culture medium and condition for other type of cells. |
Riferimenti
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