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Articolo metodologico

Sintesi di biocompatibili a cristalli liquidi in elastomero Schiume come impalcature cellulari per 3D spaziali colture cellulari

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DOI:

10.3791/55452

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11 aprile 2017

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In questo articolo

Sommario

Questo studio presenta una metodologia per preparare 3D, biodegradabili, schiuma come scaffold cellulari basate su elastomeri cristalli liquidi catena laterale biocompatibili (LCEs). esperimenti di microscopia confocale mostrano che LCEs schiuma come permettere l'attacco, proliferazione, e l'allineamento spontaneo dei mioblasti C2C12s.

Abstract

Qui vi presentiamo una preparazione step-by-step di un 3D, biodegradabili, gomma-come impalcatura delle cellule. Tali ponteggi sono stati preparati mediante reticolazione blocchi a stella copolimeri dotati di unità di colesterolo come gruppi pendenti catena laterale, con conseguente smectic-A (SMA) elastomeri a cristalli liquidi (LCEs). impalcature Schiuma-like, preparati utilizzando forme in metallo, sono dotate di microcanali interconnessi, che li rende adatti come impalcature di coltura cellulare 3D. Le proprietà combinate della struttura regolare della schiuma metallo e del risultato elastomero in un'impalcatura cellule 3D che favorisce non solo superiore proliferazione cellulare rispetto alle tradizionali pellicole templated porosi, ma anche una migliore gestione del trasporto di massa (cioè, nutrienti, gas, rifiuti , ecc). La natura del modello di metallo permette una facile manipolazione del materiale espanso (cioè, rotoli o film) e per la preparazione di supporti di differenti dimensioni dei pori per diversi studi sulle cellule preservando di interfacciamentoted natura porosa del modello. Il processo di incisione non influenza la chimica degli elastomeri, conservando la loro natura biocompatibile e biodegradabile. Abbiamo dimostrato che questi LCEs smectiche, quando coltivato per lunghi periodi di tempo, permettono lo studio di clinicamente rilevanti e complessi costrutti di tessuto, favorendo la crescita e la proliferazione delle cellule.

Introduzione

Esistono numerosi esempi di materiali sintetici biologici e biocompatibili destinati ad essere applicati in studi cellulari e per la rigenerazione tissutale obiettivo di adesione cellulare e la proliferazione 1, 2, 3, 4, 5. Ci sono stati alcuni esempi di materiali biocompatibili, noti come elastomeri a cristalli liquidi (LCEs), che potrebbe rispondere a stimoli esterni con anisotropico molecolare ordinare 6, 7. LCEs sono materiali di stimoli reatti....

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Protocollo

NOTA: Le seguenti operazioni per la preparazione 3D LCE gomma-come utilizzando il blocco stella 3-braccio copolimero sono mostrati in Figura 1. Per la caratterizzazione Risonanza Magnetica Nucleare (NMR), gli spettri vengono registrati in cloroformio deuterato (CDCl 3) a temperatura su uno strumento Bruker DMX 400 MHz camera e internamente riferimento picchi residui a 7.26. Fourier Transform Infrared spettri (FT-IR) vengono registrati con un Bruker Vector 33 FT-IR spettrometro utilizzando la modalità riflettanza totale attenuata. Per ogni passo del seguente protocollo, è importante indossare indumenti protettivi adeguati (DPI....

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Risultati

Questo rapporto mostra il metodo di preparazione di un LCE 3D poroso come impalcatura per la coltura cellulare utilizzando un modello di nichel metallico. Il ottenuto 3D LCE dimostra una complessa rete di canali interconnessi che permette una facile infiltrazione di cellule, così come più adatto trasporto di massa 27. Si è constatato che le cellule sono in grado di penetrare completamente la rete di canali interconnessi e sono anche in grado di allineare all'i.......

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Discussione

elastomeri liquido cristallini sono stati recentemente studiati come scaffold cellulari biocompatibili a causa della loro reattività stimoli. Essi hanno dimostrato di essere le piattaforme ideali come ponteggi cellulari. Tuttavia, un fattore importante da tenere a mente durante la preparazione e la progettazione di un nuovo scaffold LCE è la porosità. L'incorporazione di solidi lisciviabili 23 o gas non sempre comporta porosità omogenea o pori completamente interconnessi. L'uso di un mode.......

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Dichiarazioni

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Ringraziamenti

Gli autori desiderano ringraziare Kent State University (assegno di ricerca in collaborazione e il supporto per la Medicina Rigenerativa iniziativa alla Kent State - ReMedIKS) per il sostegno finanziario di questo progetto.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
1H, 1H, 2H, 2H-perfluoroottiltrietossisilanoAlfa AesarL16606Agente silanizzante
2-bis(4-idrossi-cicloesil)propanoTCIa href="http://www.tcichemicals.com/eshop/en/us/commodity/B0928/">B0928Reagente
2-cloroesanone Alfa AesarA18613Reagente
2-eptanone Sigma AldrichW254401Solvente
2-propanolo Sigma Aldrich278475Solvente
acido 3-cloroperbenzoico, m-CPBASigma Aldrich273031Reagente
4-dimetilamminopiridinaAlfa AesarA13016Reagente
4',6-diamidino-2-fenilidolo, DAPI InvitrogenD1306Colorazione nucleare
Acido 5-esinoico Alfa AesarB25132-06Reagente
Acido aceticoVWR36289Solvente
AcetoneSigma Aldrich34850Solvente
Alcool 200 proof ACS Grade VWR71001-866Reagente
BenzeneAlfa AesarAA33290Solvente
ε-caprolattone Alfa AesarA10299-0EReagente
CloroformioVWRBDH1109Solvente
ColesteroloSigma AldrichC8503Reagente
Ossido di cromo (VI)Sigma Aldrich232653Reagente
Ioduro di rame (I)Strem Chemicals100211-060Reagent
D,L-Lactide Alfa AesarL09026Reagente
DiclorometanoSigma Aldrich 320269Solvente
Etilico etere Emd MilliporeEX0190Solvente
N,N-DimetilformammideSigma Aldrich270547Solvente
Dulbecco' s modificato Eagle medium, DEME CORNING Cellgo10-013Cell Media
EtanoloAlfa Aesar33361Solvente
Formaldeide SIGMA Life ScienceF8775Siero
fetale fissativo per bovini, FBS HyCloneSH30071.01Media Component
Carta da filtro, Grado 415, qualitativa, crespaVWR28320Filtrazione
GliceroloSigma AldrichG5516Nodo centrale (3 bracci)
Esametilene diisocianato, HDISigma Aldrich52649Crosslinker
Ferro (III) cloruro Alfa Aesar12357Agente mordenzante
Alcool isopropilicoVWRBDH1133Solvente
MetanoloAlfa AesarL13255Solvent
N'-dicicloesilcarbodiimmideAldrichD80002
SolventeN,N-DimetilformammideSigma Aldrich270547Solvente
Modello in metallo nichelAmerican ElementsNi-860Modello in schiuma
Cellule di neuroblastomi (SH-SY5Y)ATCCCRL-2266Linea cellulare
Streptomicina penicillina Thermo SCIENTIFIC15140122Antibiotici
Polietilenglicole 2000, PEGAlfa AesarB22181Reagente
Sodio azide VWR97064-646Reagente
Bicarbonato di sodioAMRESCO865Sale essiccante
Cloruro di sodioBDHBDH9286Sale essiccante
Fosfato di sodio eptaidrato bibasico FisherScientificS-374Sale essiccante
Fosfato di sodio monobasico monoidratoSigma AldrichS9638Sale essiccante
Solfato di sodioSigma Aldrich239313Sale essiccante
TetraidrofuranoAlfa Aesar41819Solvente
Tiosolfato di sodioAMRESCO393Sale essiccante
Stagno (II) 2-etilesanoatoAldrichS3252Reagente
TolueneAlfa Aesar22903Solvente
TrietilamminaSigma Aldrich471283Reagente
TripsinaHyCloneSH30042.01Distacco di cellule
Olympus FV1000
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Riferimenti

  1. Khor, E., Lim, L. Y. Implantable applications of chitin and chitosan. Biomaterials. 24 (13), 2339-2349 (2003).
  2. Chung, H. J., Park, T. G. Surface engineered and drug releasing pre-fabricated scaffolds for tissue engineering. Adv. Drug Deliv. Rev. 59

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Ristampe e permessi

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