के लिए एक आईएल -8 ट्रांस-ट्रांससीनाइज्ड माउस मॉडल<em> विवो में</em> सूक्ष्म प्रतिक्रियाओं की दीर्घकालिक निगरानी
Summary
यहाँ वर्णित विधि गैर-इनवेसिव बिलीमिनेसेंस इमेजिंग (बीएलआई) के माध्यम से चूहों के फेफड़ों में आईएल -8 प्रमोटर-निर्भर सूजन सक्रियण के दृश्य के लिए अनुमति देता है। लुईफेरेज़ रिपोर्टर के निर्माण के समय से दो माह तक एक ही जानवर को BLI के अधीन किया जा सकता है।
Abstract
एयरवे सूजन अक्सर बैक्टीरिया के संक्रमण से जुड़ा होता है और फेफड़ों की बीमारी के एक प्रमुख निर्धारक का प्रतिनिधित्व करता है। विभिन्न कारकों की प्रो-भड़काऊ क्षमताओं के विवो निर्धारण में चुनौतीपूर्ण है और ब्रोन्कोलोविल्वर लव्ज जैसे टर्मिनल प्रक्रियाओं की आवश्यकता होती है और स्वस्थानी विश्लेषण के लिए फेफड़ों को हटाने, एक ही माउस में अनुदैर्ध्य दृश्यता को रोकना। यहां, फेफड़े की सूजन, स्यूडोमोनस एरुगिनोसा संस्कृति सतह पर तैरनेवाला (एसएन) के अंतःस्थापूर्ण उत्तेजना के माध्यम से प्रेरित होती है, जो हेलरॉफेस आईएल -8 बोवाइन प्रमोटर के नियंत्रण में ल्यूइफेरेज़ रिपोर्टर जीन को अभिव्यक्त करती है। फेफड़ों में ल्यूसफेरेज अभिव्यक्ति की निगरानी इन्फिलेशन के बाद 2.5 से 48-एच समय-सीमा पर विवो बायोलिमिनेसेंट इमेज (बीएलआई) विश्लेषण में की जाती है। इस प्रक्रिया को 2 से 3 महीने के भीतर कई बार दोहराया जा सकता है, इस प्रकार एक ही चूहों में भड़काऊ प्रतिक्रिया के मूल्यांकन की अनुमति दी जा सकती हैताकि जानवरों को खत्म करने की आवश्यकता हो। यह दृष्टिकोण वास्तविक समय में फेफड़ों में अभिनय के समर्थक और विरोधी भड़काऊ कारकों की निगरानी की अनुमति देता है और कार्यात्मक और औषधीय अध्ययन के लिए उपयुक्त दिखाई देता है।
Introduction
गंभीर फेफड़ों के रोग, जैसे कि अस्थमा, क्रोनिक ऑब्स्ट्रक्टिव पल्मोनरी डिजीज (सीओपीडी), सिस्टिक फाइब्रोसिस (सीएफ), और ब्रोनिइक्टेसिसिस, एयरवे सूजन द्वारा विशेषता हैं। वायुमार्ग की सूजन एडिमा, सेलुलर घुसपैठ, टी लिम्फोसाइट और मस्तूल सेल सक्रियण, वायुमार्ग के स्राव में वृद्धि, और अत्यधिक कोलेजन बयान से होती है। सीएफ़ एक मल्टीसिस्टिम डिसऑर्डर है, और इसकी मृत्यु दर और रोग का मुख्य कारण फुफ्फुसीय उत्तेजना बढ़ने से बैक्टीरियल संक्रमण फैलता है। फेफड़ों के कार्य में गिरावट का अनुमान 1 , 2 , 3 , 4 के मुकाबले काफी खराब परिणाम है।
श्वसन तंत्र की सूजन स्थिति आम तौर पर निचली और ऊपरी वायुमार्ग से उत्पन्न सामग्री में भड़काऊ प्रक्रिया के दौरान भर्ती प्रतिरक्षाविज्ञानी मार्करों के मूल्यांकन के माध्यम से देखी जाती है, जैसे थूक, जो चर रेज प्रदान करता हैults। ब्रोंकोस्कोपियां भी 5 प्रदर्शन कर रहे हैं मुरिन मॉडल, बीमारियों की सूजन की बीमारियों के रोगजनन और विकास की जांच के लिए मूल्यवान उपकरण हैं और जिनके लिए प्रभावी उपचार या इलाज अभी तक नहीं पहचाना गया है। फेफड़ों के संक्रमण और सूजन के पशु मॉडल का उपयोग अस्थमा और मेजबान-रोगजनन क्रियाकलापों का अध्ययन करने के लिए किया गया है, जिसमें मानवीय स्थितियों ( जैसे, सिगरेट के धुएं का एक्सपोज़र, एलपीएस, इलास्टेज़, ओवलबिमिन, पाली I: सी, आदि) का अनुकरण करने वाली रसायनों की भूमिका शामिल है अच्छी तरह से ऊपर के संयोजन) 6 सूजन-संबंधी मापदंडों की माप के लिए जानवरों के बलिदान की आवश्यकता होती है, क्योंकि इनवेसिव दृष्टिकोणों की आवश्यकता होती है जैसे बैक्टीरियल लोड, फेफड़ों में साइटोकिन्स, और ब्रोन्कोलावियोलर लेवेज (बीएएल) तरल पदार्थ एकत्र किया जाता है। इसके अलावा, हिस्टोलॉजिकल परीक्षाएं अक्सर आवश्यक होती हैं भड़काऊ प्रतिक्रिया कैनेटीक्स पर जानकारी प्राप्त करने की संभावना के लिए num का उपयोग करना आवश्यक हैएरस चूहों इसलिए, एक ऐसी तकनीक जो जानवरों का त्याग करने की आवश्यकता के बिना ऐसी जानकारी प्राप्त करने की अनुमति देगी, तकनीकी, नैतिक, आर्थिक, और परिचालन आधार पर मूल्यवान है।
आईएल -8 सूजन प्रक्रिया में एक आवश्यक खिलाड़ी है, सूजन के ऊतकों को ल्यूकोसाइट्स की भर्ती करना। यह भड़काऊ मार्ग सक्रियण के अध्ययन के लिए एक आणविक रीड-आउट का प्रतिनिधित्व करता है। एमआईपी -2 और के.सी. चूहों में मानव आईएल -8 के कार्यात्मक होमोलॉग हैं। चूहे केवल एक संभावित आईएल -8 रिसेप्टर, मानव सीएक्ससीआर 2 7 , 8 का एक homolog व्यक्त करते हैं, लेकिन वे एक रिपोर्टर जीन को चलाए जाने वाले एक हेरट्रोगोज़ आईएल -8 जीन प्रमोटर को संशोधित करने में सक्षम हैं। अवलोकन के बाद हाल ही में एक फेफड़े की सूजन मूरीन मॉडल विकसित किया गया है कि एक गोजातीय आईएल -8 प्रमोटर / लुइसफेरेस रिपोर्टर का निर्माण चूहों में किया जा सकता है। यह सुविधा बीआईएलआईमेन्सेंस इमेजिंग (बीएलआई) के उपयोग के लिए अनुमति देता है जिससे कि जीवाणु में जीर्णोद्धार प्रतिक्रिया की निगरानी की जा सकेNimals 9
यह मॉडल जीवाणु exoproducts ( जैसे, एलपीएस या जीवाणु उपभेदों द्वारा जारी उत्पादों) या TNFalpha 10 , 11 द्वारा शुरू की सूजन का अध्ययन करने के लिए अनुकूलित किया गया है। दवा की खोज की प्रक्रिया पुराने और नए विरोधी भड़काऊ अणुओं के विकास और अनुकूलन पर केंद्रित है जो सीएफ़, अस्थमा और सीओपीडी जैसी फेफड़ों के रोगों का इलाज कर सकती है। स्मार्ट नैदानिक परीक्षणों के डिजाइन को सुविधाजनक बनाने के लिए इन नए रासायनिक इकाइयों को पशु मॉडल में शीघ्रता और आसानी से परीक्षण किया जाना चाहिए ताकि विशिष्ट नैदानिक फ़िनोटाइप से जोड़ा जा सके।
Protocol
Representative Results
Discussion
पिछले काम में 11 , बीआईएल -8-ल्यूक-आश्रित बीएलआई और बीएएल मार्करों के बीच एक अंतर दिखाया गया था। यह माउस उपभेदों के भीतर संवेदनशीलता की विभेदक डिग्री पर निर्भर था 12 इस कारण से, बीआईएल -8-ल्य…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम को इतालवी सिस्टिक फाइब्रोसिस फाउंडेशन प्रोजेक्ट एफएफसी # 18/2013, एफएफसी # 29/2015 और इटली के सिस्टिक फाइब्रोसिस लीग द्वारा वेनेटो ब्रांच-एस्सोसिज़ियोन वेनेटा लेटा कॉन्ट्रो ला फिब्रोसी सिस्टिका ऑनलस द्वारा समर्थित किया गया था।
Materials
| FMT 2500 Fluorescence Tomography System | Perkin Elmer Inc. | Experimental Builder | |
| IVIS Lumina serie II Pre-clinical In Vivo Imaging System | Perkin Elmer Inc. | Experimental Builder | |
| MMPsense 750 FAST | Perkin Elmer Inc. | NEV10001EX | Protect from light, store the probe at 4 °C |
| Female inbred BalbC | Harlan Laboratories Italy | Prior to use, animals were acclimatized for at least 5 days to the local vivarium conditions | |
| bIL-8-Luc plasmid | Department of Medical Veterinary Science, University of Parma, Italy | Store the plasmid at -20 °C | |
| pGL3basic vector | Promega | E1751 | Store the vector at -20 °C |
| JetPEI DNA transfection reagent | Polyplus transfection | 201B-001G | The DNA and JetPEI mix was formulated with a final N/P ratio of 7 |
| D-luciferin potassium salt 1g | Perkin Elmer Inc. | 122796 | Protect from light, store at -20 °C |
| Living Image software | Caliper Life Sciences, | Experimental Builder | |
| Isoflurane | ESTEVE spa | 571329.8 | Do not inhale |
| Bio-Plex Cytokine Assay Kit | Bio-Rad Laboratories | M60-009RDPD | Store the unopened kit at 4 °C |
| Automated cell counter | Dasit XT 1800J | Experimental Builder | |
| Penn-century model DP-4M Dry power insufflator | Penn-century | DPM-EXT | |
| Gas anesthesia system XGI-8 | Perkin Elmer Inc. | Experimental Builder | |
| PE190 micro medical tubing | 2biological instruments snc | BB31695-PE/8 | |
| Syringe without needle 5ml | Terumo | SS*05SE1 | Cut the boards of the piston by a scissors |
| Hamilton 0,10 ml (model 1710) | Gastight | 81022 | |
| Discofix 3-way Stopcock | Braun | 4095111 | |
| Syringe with needle 1ml | Pic solution | 3,071,260,300,320 | Use without needle |
| Plastic feeding tubes 18ga x 50mm | 2biological instruments snc | FTP-18-50 | Cut obliquely the tip |
References
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