조직 학적 분석을위한 돼지 CNS의 노출 : 목 베기, 두개골 열기위한 매뉴얼 및 뇌 제거
Summary
이 종이와 교육 비디오의 목표는 노출 이후 거시 및 조직 학적 분석에 적합한 손상 상태에 돼지 뇌와 뇌하수체 부검을 제거하는 방법을 설명하는 것입니다.
Abstract
돼지는 인간이 아닌 영장류에 대한 경제적, 윤리적으로 가능한 대안으로 대형 동물 번역의 신경 과학 연구에 점점 더 인기를 끌고있다. 돼지의 큰 뇌의 크기는 기존의 임상 뇌 이미 저와 인간의 병원에서 직접 사용 및 신경 외과 절차 및 장비의 테스트를 사용할 수 있습니다. 또한, 육안 및 조직 학적 분석은, 그러나, 돼지 중추 신경계 (CNS) 및 후속 뇌 제거 사후 노광을 필요로한다. 이것은 CNS는 두께, 뼈 두개골과 척추에 의해 캡슐화 된 돼지로 쉬운 일이 아니다. 이 종이와 교육 비디오의 목표는 노출과 사후 돼지 뇌와 이후의 거시 조직 학적 분석에 적합한 손상 상태에서 뇌하수체를 제거하는 방법을 설명하는 것입니다.
Introduction
돼지 번역 상 신경 과학 연구는 지난 20 년 동안 점점 더 인기를 끌고있다. 돼지 뇌의 크기가 커서 기존의 임상 뇌 이미 저들과 직접 사용하여 인간 임상 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8에서 신경 외과 절차 및 장비 테스트의 사용을 가능하게한다. 지난 20 년 동안, 돼지, 특히 minipigs (예를 들어, 괴팅겐 미니 피그) 등 줄기 세포 이식과 같은 neuromodulatory 치료 방법을 검사하는 데 사용되었다; 바이러스 벡터 형질; 파킨슨 질환, 비만, 우울증, 알츠하이머 병 2, 6 향하는 깊은 뇌 자극,= "외부 참조"> 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17. 이는 미니 피그 CNS 3, 18, 19, 20, 21을 조작 정위 수술 방법을 개발 하였다되었다. 제정 CNS의 변경 (PET 10, 13, 22, 24, 23 MR), 방광 내압 11, 12, 25 뇌 영상을 이용하여 살아있는 동물에서 평가되어, 보행 분석17, 신경 평가 9, 17, 및 조직학 분석 stereological 14, 15, 17, 26, 27, 31에 기초하여 사후 검사. 그러나 사후 분석은 두께, 뼈 두개골과 돼지 뇌를 둘러싸고 취재 섬유 경막로 노출 쉬운 일이 아니다 돼지 두뇌의 제거가 필요합니다.
이 종이와 교육 비디오의 목표는 사후 돼지 뇌와 뇌하수체 비 전동 수술 도구를 사용하여 15 ~ 20 분에 온전한 상태로 노출을 제거 할 수있는 방법을 설명하는 것입니다. 미니 피그 뇌하수체에 대한 해부학 적 연구에 사용 된 교육 비디오 및 사진 그림은 남성 minipigs (20-25kg : : 6 개월, 체중 세)를 보여줍니다.
Protocol
동물 마취 및 euthanesia은 (NIH 간행물 번호 86-23, 1985 개정) 동물 연구 윤리에 대한 덴마크위원회의 승인을 "실험 동물 관리의 원칙"에 따라 수행되었다. 1. 악기 악기 비디오에서 제시 및 재료의 표에 열거를 수집합니다. 2. 목 베기 주 : 마취 미다 졸람 5 ㎖ (5 ㎎ / ㎖) 및 5 mL의 케타민 (25 ㎎ / ㎖)의 근육 내…
Representative Results
마르지 티슈 재료를 방지하기 위해,이 고정 제 또는 거시적 분석이 수행 된 직후에 등장 성 식염수로 채워진 병의 뇌 및 뇌하수체 제거를 저장하도록 권고한다. 조직 재료는, 등장 성 식염수에 보관 반면 년 동안 정착에 저장 될 수있다, 심지어 냉장고에, 시간과 함께 조직의 붕괴로 이어질 것입니다. 본래 돼지 뇌 직접 동결 <s…
Discussion
대부분의 실험 연구는 신경 같은 CNS에 대한 액세스가 얇은 skull- 및 경막의 두께에 의해 용이하게 마우스 및 래트와 같은 작은 동물 종에서 수행된다. 그러나, 돼지 1, 4, 8, 양 (32) 및 비 – 인간 영장류와 같은 큰 실험 동물에서 이러한 구조의 상당한 두께 두개골 뼈 제거를위한 강력한 도구 (재료의 테이블) 적절…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
저자는 감사로 부인 트린 W 미켈슨의 숙련 된 지원, 피팅 부인 리자 M. 및 Påskehøjgaard에서 직원을 인정합니다. 덴마크 의학 연구위원회 (Medical Research Council)의 룬드 벡 재단, 그리고 노보 노 디스크 재단은 재정적으로 연구를 지원했다.
Materials
| Heavy Scalpel Handle #4 | FST (Fine Science Tools) | 10008-13 | Good for skin incision and soft tissue removal |
| Non-Sterile Scalpel Blades #23 | FST | 10023-00 | |
| Scalpel Handle #7 | FST | 10007-12 | Optimal for dural incision and precision work |
| Non-Sterile Scalpel Blades #11 | FST | 10011-00 | |
| Surgical Forceps | FST | 11024-18 | The tip of the surgical forceps ensure a firm grip |
| Kerrison Bone Punch | Aesculap Neurosurgery | FF713R | Must be robust, bite size 3-5 mm |
| Bone Rongeur | Aesculap Neurosurgery | MD615 | Must be robust, bite size 15 x 5 mm |
| Bone Rongeur | Aesculap Neurosurgery | FO551R | Must be robust, bite size 25 x 15 mm |
| Bone Chisel | Lawton | 67-0335 | The size of the chisel head should not exceed 20 mm |
| Mallet (Hammer) | Millarco | 5624108 | Weigth 300 g, length 30 cm, head hit area size 2 x 2 cm |
| Micro-Scissor | FST | 14002-14 | |
| Dissector | Aesculap Neurosurgery | OL165R | |
| Göttingen minipigs | Ellegaard Göttingen Minipigs A/S, Denmark | ||
| Euthanimal | pentobarbital | ||
| Ketamine | Pfizer | ||
| Midazolam | Hameln Pharmaceuticals |
Riferimenti
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Citazione di questo articolo
Bjarkam, C. R., Orlowski, D., Tvilling, L., Bech, J., Glud, A. N., Sørensen, J. H. Exposure of the Pig CNS for Histological Analysis: A Manual for Decapitation, Skull Opening, and Brain Removal. J. Vis. Exp. (122), e55511, doi:10.3791/55511 (2017).