कपास bollworm में होस्ट-ऊतक वितरण, पारेषण मोड, और एक Densovirus की होस्ट स्वास्थ्य पर प्रभाव की जांच के लिए प्रोटोकॉल
Summary
यहाँ, हम मेजबान ऊतक वितरण, पारेषण मोड, और प्रभाव एक densovirus के मेजबान फिटनेस पर एक lepidopteran प्रजाति के भीतर, कपास bollworm की जांच के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं। यह प्रोटोकॉल भी अन्य मौखिक रूप से प्रेषित वायरस और उनके कीट मेजबान के बीच बातचीत के अध्ययन के लिए इस्तेमाल किया जा सकता।
Abstract
कई उपन्यास वायरस अगली पीढ़ी के अनुक्रमण प्रौद्योगिकी का उपयोग कर पशु मेजबान में पाया गया है। इससे पहले, हम एक lepidopteran प्रजातियों में, पारस्परिक वायरस, Helicoverpa armigera densovirus (HaDV2) ने बताया, कपास bollworm, Helicoverpa armigera (Hübner)। यहाँ, हम प्रोटोकॉल है कि वर्तमान में अपने मेजबान पर HaDV2 के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए उपयोग किया जाता है का वर्णन। सबसे पहले, हम एक भी प्रजनन जोड़ी से एक HaDV2 मुक्त कपास bollworm उपनिवेश की स्थापना। एक HaDV2 संक्रमित, अन्य असंक्रमित: तो फिर, हम मौखिक रूप से फ़िल्टर किए गए तरल HaDV2 युक्त एक ही आनुवंशिक पृष्ठभूमि के साथ दो कालोनियों का निर्माण करने के साथ कुछ नवजात शिशु लार्वा वंश टीका। एक प्रोटोकॉल HaDV2 संक्रमित और -uninfected व्यक्तियों भी प्रस्तुत किया जाता है के बीच जीवन तालिका मानकों (जैसे, लार्वा, पोटा संबंधी, और वयस्क अवधि और उपजाऊपन) की तुलना करने, के रूप में मेजबान ऊतक वितरण और HaDV2 का संचरण क्षमता का निर्धारण करने के लिए प्रोटोकॉल है। इन प्रोटोकॉल would भी अपने कीट होस्ट करता है, विशेष रूप से lepidopteran होस्ट पर अन्य मौखिक रूप से प्रेषित वायरस के प्रभाव की जांच के लिए उपयुक्त हो।
Introduction
पिछले कुछ दशकों में, इस तरह अगली पीढ़ी के अनुक्रमण के रूप में अनुक्रमण प्रौद्योगिकी के विकास (NGS) कई उपन्यास डीएनए और आरएनए वायरस, विशेष रूप nonpathogenic वायरस, लेकिन यह भी पहले से ज्ञात वायरस 1, 2, 3 के उपन्यास आइसोलेट्स की खोज में मदद की है, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12। मॉडल जीव ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर में, 20 से अधिक नई आंशिक वायरस जीनोम metagenomic तकनीक 13 का उपयोग कर पाया गया है। उपन्यास वायरस सहित कई वायरल दृश्यों,, भी इस तरह के मधु मक्खियों, मीटर के रूप में अन्य कीड़े, में पहचान की गई हैosquitoes, एशियाई खट्टे psyllids, dragonflies, और कई lepidopteran प्रजातियों 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21।
भविष्य में, यह उम्मीद की जा सकती है कि और अधिक उपन्यास वायरस इन उन्नत प्रौद्योगिकी का उपयोग कर कीड़ों में खोज की जाएगी; इसलिए, वायरस मेजबान बातचीत के बारे में हमारी समझ के हिसाब से 6 से 9 बदल सकता है,। उदाहरण के लिए, वायरस मेजबान बातचीत, पहले सोचे तुलना में अधिक जटिल माना जाता है, क्योंकि कई उपन्यास वायरस के बजाय पारस्परिक भागीदारों सख्त रोगजनकों 22 के रूप में परिभाषित किया जा रहा है। उदाहरण के लिए, Dysaphis plantaginea में पारस्परिक densovirus DplDNV पंखों वाला रूप प्रेरित करता है और गतिशीलता बढ़ जाती है, वायरस 23 के साथ ही मेजबान के प्रसार की सुविधा। इसके अलावा, पारस्परिक वायरस स्तनधारी स्वास्थ्य, सूखा और पौधों की ठंड सहिष्णुता, और बैक्टीरिया के संक्रमण 24 के प्रभाव के संबंध में वर्णित किया गया है। सेनेका घाटी वायरस-001 ट्यूमर कोशिकाओं की ओर चयनात्मक cytotoxicity मध्यस्थता करने neuroendocrine कैंसर के साथ सुविधाओं 25 दिखाया गया है। हेपेटाइटिस ए वायरस के संक्रमण हेपेटाइटिस सी वायरस प्रतिकृति को दबाने और हेपेटाइटिस सी 26 से वसूली हो सकती है। दाद विलंबता जीवाणु संक्रमण 27 से सहजीवी सुरक्षा प्रदान करता है। मानव अंतर्जात रेट्रोवायरस HERV-W के लिफाफा ग्लाइकोप्रोटीन तिल्ली परिगलन वायरस 28 के लिए सेलुलर प्रतिरोध प्रेरित करता है। Curvularia थर्मल सहिष्णुता वायरस (CThTV) एक कवक endophyte से इस कवक और एक उष्णकटिबंधीय आतंक घास के बीच पारस्परिक बातचीत में शामिल हैरेफरी "> 29। इसलिए, नव पाया वायरस और उनके मेजबानों के बीच संबंधों का ज्ञान उनके जीव विज्ञान और प्रबंधन पर नए दृष्टिकोण उत्पन्न करनी चाहिए। हालांकि, उपन्यास वायरस, विशेष रूप गुप्त वायरस तीव्र संक्रमण के विशिष्ट कोई स्पष्ट संकेत प्रदर्शित करने, शायद ही कभी किया है जांच की गई है, और हम एक पाइप लाइन और प्रोटोकॉल की जरूरत है उनके मेजबानों पर नव पाया वायरस के प्रभावों की जांच के लिए।
इससे पहले, हम कपास bollworm, Helicoverpa armigera में प्रसार के लिए एक नया monosense densovirus Helicoverpa armigera densovirus (HaDV2) ने बताया, और HaDV2 और कपास bollworm 30, 31 के बीच पारस्परिक सम्बन्ध का सबूत प्रस्तुत किया है। इस पत्र में, हम विस्तार से HaDV2 और उसके कपास bollworm मेजबान के बीच बातचीत का अध्ययन करने के प्रयोगशाला प्रोटोकॉल का वर्णन करेंगे। यहाँ प्रस्तुत प्रोटोकॉल भी आर की जांच शोधकर्ताओं के लिए बेहद प्रासंगिक हो सकता हैअन्य मौखिक रूप से प्रेषित वायरस के OLE, विशेष रूप से lepidopteran कीटों में।
Protocol
Representative Results
Discussion
पिछले कुछ दशकों में, कीट-वायरस बातचीत पर ज्यादातर अध्ययन में मधु मक्खी स्वास्थ्य 34, 35, 36, मानव रोग 37 की वैक्टर पर जोर दिया है, संयंत्र 38 वायरस, और कुछ कीट…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
यह काम चीन के राष्ट्रीय कुंजी बुनियादी अनुसंधान कार्यक्रम (सं 2013CB127602) और के लिए चीन के राष्ट्रीय विज्ञान फाउंडेशन (सं 31,321,004) के क्रिएटिव अनुसंधान समूह विज्ञान कोष द्वारा समर्थित किया गया।
Materials
| 24-well plate | Corning | 07-200-740 | Multiple suppliers available. |
| DNA extraction kit | TIANGEN | DP304-03 | Multiple suppliers available. |
| thermal cycler | Veriti; Applied Biosystems | 4375786 | |
| PBS | Corning | 21-040-CV | |
| 0.22 µm membrane filter | Millipore | SLGS025NB | |
| pEASY-T Cloning Vector | TransGen, Beijing, China | CT301-02 | |
| Tweezers | IDEAL-TEK | 2.SA | |
| Premix Ex Taq (Probe qPCR) | Takara | RR390A | |
| Probes | Invitrogen | Custom order | |
| Primers | Invitrogen | Custom order | |
| microspectrophotometry NanoDrop 2000c | Thermo scientific | not available | |
| 7500 Real-Time PCR system | Applied Biosystems | not available | |
| stereomicroscope SZX-16 | Olympus | not available | |
| sucrose | Multiple suppliers available. | ||
| vitamin complex | Multiple suppliers available. |
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